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1、医学微生物学实验室规则：,学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒； 进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内； 严禁在实验室进食、饮水和抽烟； 手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手； 实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的垃圾不得随意抛掷，要扔在指定的桶内,细 菌 形态学检查,新乡医学院基础医学院科教科 3029945,主讲：马玉龙 15903060813 Email:,形态学检查分类 一、不染色标本检查(活体） 悬滴法 压滴法 二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料 （美兰染色） 复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰
2、染 色、抗酸染色）,染色标本检查法的一般步骤,一、涂片制备 涂片 干燥 固定 二、染色 初染 媒染 脱色 复染 注：固定的目的 1、杀死细菌,保持细菌原有的形态和结构 2、增加细菌的通透性，使细菌易于着色 3、使细菌牢牢地黏附在玻片上，不至于在染色 过程中被水冲掉,革兰染色(Gram stain),1884年由丹麦医师Gram创立 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义,一、目的,1、掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法 2、了解革兰染色的原理和临床意义,1、通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说,二、原理,通透性学说,G+
3、菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易进入 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易渗入。,等电点学说,G+菌等电点（pI23） G-菌等电点（pI45） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。,化学学说,G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色 G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色,1、菌种 葡萄球菌 大肠杆菌 2、试剂 革兰染色液 初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红 3、其它 载玻片 染色盘
4、 接种环 酒精灯等,三、器材和试剂,冲洗,染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果,四、方法与步骤,1min,1min,30s,30s,冲洗,冲洗,冲洗,1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸 吸干,无菌操作（接种环灭菌和取菌） 涂片的厚度要适中 染色的时间控制，一一半半 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗,五、注意事项,一 一 半 半,G+菌,G-菌,结晶紫,卢戈氏碘液,95%乙醇,石碳酸复红,初染 媒染 脱色 复染,六、结果,图一,图二,七、临床意义,1、鉴别细菌,2、研究与致病性的
5、关系,3、指导临床用药,G+,G-,G+ 致病 外毒素,G- 致病 内毒素,G+ 青霉素、头孢菌素等,G- 链霉素、庆大霉素等,细菌的特殊结构（示教） （二毛荚一胞）,从细胞质的基础颗粒长出，伸到细胞外面的细长呈波状弯曲的丝状物。 功能：鞭毛运动可鉴定、与致病性有关、具有抗原性（H抗原）,菌发出比鞭毛更更细、短、直、硬和多的丝状蛋白附属物，与运动无关，菌毛中空，可分为普通菌毛和性菌毛 功能：普通菌毛附黏膜，性菌毛传递遗传物质,细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，厚度0.2m边界明显者称为荚膜，厚度0.2m者称为微荚膜 功能：荚膜护菌强致病-抗吞噬作用、抗有害物质损伤、抗干燥作用、黏附作用,菌体内
6、部物质缩水（60）形成圆或卵圆形小体。 功能：芽胞形态辨细菌， 灭菌标准抗力强。,实验报告,一、目的 二、原理（主要） 三、材料 四、方法 五、结果（2+3幅图） 六、意义 七、注意事项,实验结果,1、绘制所涂片染色的G+及G-菌的形态图并注 明放大倍数 2、绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大倍数,透镜 折光率 油 1.515 1.0 空气 玻 1.52 璃 空 气 油镜原理示意图,油镜的使用方法,寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大。 转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。,调试观察：观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外重找时应按：低倍高倍油镜程序。在加油区内重找应按：低倍油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残余的香柏油，最后再用干擦镜纸擦干净。,油镜的使用方法,革兰染色临床意义,预 习,细菌的生化反应。病原菌的分离技术 见P61-67,
