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1、各期梅毒实验诊断方法,广东省皮肤病医院 广东省皮肤性病防治中心 郑和平 PhD,“广东疮”,广东与全国梅毒比较 1995-2011(incidence/100,000),1995-2011年 广东省各期梅毒发病情况,GD STD LG Yang,2011年，全省21个地市报告梅毒51,051例，报告数占全国报告总数的11.88%，位居全国第一,梅毒诊断的准确性如何？,某省疾控中心共核查后天梅毒164例，其中，未做RPR定性的43例，未进行RPR定量的64例，根据临床表现但无症状记录的92例。核实7例先天梅毒均不符合国家确诊标准。 诊断技术的掌握和正确应用很重要,先天梅毒血清学的随访研究 5年上
2、海市99例报道先天梅毒患儿 TPPA随访 转阴率 累计阴转率 1个月 1.14 1.14 3个月 17.65 18.59 6个月 39.91% 44.57% 12个月 40 66.74 18-24月 23.08 74.42 1顾伟鸣等，先天梅毒的血清学随访，中华传染病杂志 2007，25（2）：117-119 误诊率？ 检测能力差！,梅毒诊断的准确性如何？,2011年梅毒诊断试剂临床评估结果,中国性病控制中心，广西皮肤病防治研究所、北京市CDC、云南省CDC、甘肃省CDC、浙江省皮肤病防治研究所等,中国预防与控制梅毒规划 （2010-2020年）,加强梅毒检测质量控制和实验室能力建设，充分利用
3、现有资源，开展梅毒检测实验室质量考评和技术指导，提高梅毒实验室检测的准确性和梅毒确证检测的可及性”,各期梅毒实验诊断方法,未经治疗的梅毒病人的自然病程,感染梅毒螺旋体,一期梅毒,二期梅毒,潜伏梅毒,三期梅毒,72%,30%,终生潜伏梅毒,中枢神经系统感染,28%,感染梅毒螺旋体,2-6周,1-3月,1-3月,2-50年,2Gjestland, T. 1955. The Oslo study of untreated syphilis; an epidemiologic investigation of the natural course of the syphilitic infection
4、 based upon a re-study of the Boeck-Bruusgaard material. Acta Derm. Venereol. 35:3368; Annex I-LVI.,一期梅毒的临床表现与实验室诊断,入 侵 部 位,临床表现,广东省皮肤性病防治中心 WWW.GDVDC.COM,致病性螺旋体,一，梅毒病原学检测,1，病原学检测： 1）暗示野镜检： 方法：渗出液混于盐水中，暗示野镜观察 结果：可见典型梅毒螺旋体和特殊运动方式,5R. Heymans, et al. J. CLIN. MICROBIOL.2010 48(2):497,2）暗示野与PCR检测. 5 Cl
5、inical Value of Treponema pallidum Real-Time PCR for Diagnosis of Syphilis,6Molecular Characterization of Syphilis in Patients in Canada: Detection of Treponema pallidum DNA in Whole-Blood Samples versus Ulcerative Swabs J. CLIN. MICROBIOL. 2009,47（6）：1668,病人87例:41梅毒（19例一期,9例二期,10例潜伏,3例先天） 靶基因：T. pa
6、llidum tpp47, bmp, polA，23S rRNA gene 结果： 结论：溃疡拭子样本适合于一期梅毒的PCR检测 二期血液样本中50%活动性梅毒可检测到TP-DNA,WHO推荐暗示野镜检诊断早期梅毒，早于抗体出现前数日至数周 organisms/mL required for visualization 敏感性80%，但阴性不能排除梅毒 3Larsen S, et al. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis. Clin Microbiol Rev 1995;8:121. 假阳性:与口腔肛周其
7、他螺旋体相似，不推荐口腔肛周标本 4Tramont E. Syphilis in adults: from Christopher Columbus to Sir Alexander Fleming to AIDS. Clin Infect Dis 1995;21:136171 PCR敏感性特异性高.适宜早期诊断。,病原体检测,二、血清学检查 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 VDRL、USR、RPR、TRUST 2. 梅毒螺旋体抗原血清学试验 FTA-ABS、TPHA、 TPPA、ELISA、TP-RT IgM,非梅毒螺旋体抗原血清学试验： 原理：梅毒螺旋体破坏宿主细胞释放以及其螺旋体细胞表面释放
8、的类脂物质，刺激机体产生抗类脂抗体（反应素）。在体外该抗体与心磷脂、卵磷脂和胆固醇组成的抗原反应，形成凝集反应。 方法：VDRL (venereal disease research laboratory test) USR (unheated serum reagin test) RPR (rapid plasma reagin circle card test) TRUST (tolulized red unheated serum test) 特点：非特异性反应,2、梅毒螺旋体抗原血清试验,原理：基于TP特异性抗原，检测TP抗体 方法： 凝集法：TPHA， TPPA FTAABS ELI
9、SA 19sIgM TP-RT（胶体金法）,19S Ratnam. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J InfectDis Med Microbiol 2005;16(1):45-51.,1）TPPA/TPHA 原理： 超声裂解TP抗原或基因工程抗原，致敏明胶颗粒/家禽RBC，与血清中抗TP抗体结合，发生凝集反应。 临床：梅毒确证 注意 存在交叉（1：80） 低滴定时候，FTA-ABS确证,2）FTA-ABS(fluoresent treponemal antibody absorption test) 原理：血清经吸收剂（Reiter)去非
10、特异性抗体，与TP反应，形成Ab+Ag复合物；再加TITC标记的抗人IgG/IgM抗体，形成荧光复合物，荧光镜下，TP呈苹果绿色荧光。 临床：最可靠确证试验 特点：高度特异，,3）ELISA： 原理：TP特异性抗原包备酶标板，与血清中TP抗体结合，加入酶标抗体，底物显色。 临床：用于梅毒筛查。 注意： 高敏感性，特异较差。,4) 19sIgM: 原理：ELISA， WB等 临床：早期梅毒诊断 先天梅毒诊断,5）TP-RT胶体金法： 原理（见图） 临床：筛查 注意： 高敏感性，特异较差。,11Reactivity of Microhemagglutination, Fluorescent Tre
11、ponemal Antibody bsorption, and Venereal Disease Research Laboratory Tests in Primary Syphilis,11 JOHN D. DYCKMAN, J. CLIN. MICROBIOL. 1980,12（4）：629,VDRL、FTA-ABS、TPHA关系,12S Ratnam. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J InfectDis Med Microbiol 2005;16(1):45-51.,梅毒螺旋体血清学检测用试剂的 敏感性和特异性 2011年国家公布
12、,一期梅毒血清学 非梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性(1:8) 梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性（1:320) 单次阳性结果应结合临床病史慎重诊断，阴性并不能排除梅毒，需连续观察抗体滴度。 IgM抗体早于IgG抗体，常为阳性反应 18Baughn, R. E., and R. F. Schell. 2001. Immune responses to Treponema pallidum and Borrelia burgdorefi, p. 27.127.7. In R. R. Rich (ed.), Principles and practice of clinical immunology,
13、2nd ed. Mosby, St. Louis, Mo.,二，梅毒血清学筛查策略：,梅毒筛查策略 I RPR/TRUST阳性 TPPA/FTA阳性 梅毒 特点：传统方法，漏检高（15%），现症。,梅毒筛查策略 II：,TP-ELISA阳性 TPPA阳性确证（阳性） TRUST阳性 梅毒 特点：批量检测，敏感性高 ，需现症鉴别,梅毒筛查策略 III：,TP-RT阳性 TPPA阳性确证（阳性） TRUST阳性 梅毒 特点：简便快速，敏感性高 ，需现症鉴别,互为确证试验,RPR阳性 TPPA阳性 梅毒 TPPA阳性 RPR阳性 梅毒 梅毒确诊,一期梅毒血清学 非梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性(1:
14、8) 梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性（1:320) 单次阳性结果应结合临床病史慎重诊断，阴性并不能排除梅毒，需连续观察抗体滴度。 IgM抗体早于IgG抗体，常为阳性反应 18Baughn, R. E., and R. F. Schell. 2001. Immune responses to Treponema pallidum and Borrelia burgdorefi, p. 27.127.7. In R. R. Rich (ed.), Principles and practice of clinical immunology, 2nd ed. Mosby, St. Louis, Mo
15、.,二期梅毒的临床表现与实验室诊断,临床表现,12S Ratnam. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J InfectDis Med Microbiol 2005;16(1):45-51.,非梅毒螺旋体抗体100%阳性，且滴度1:32 梅毒螺旋体抗体100%敏感性与98%特异性，且滴度640, 大量抗体的产生可能导致前带现象。 皮损暗视野检测绝大多数可检测到螺旋体，但由于血清学方法的简单性，而检测较少。 20Robert E. Baughn and Daniel M. Musher. Secondary Syphilitic Lesions
16、CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, 2005, 205216,二期梅毒,三期梅毒的临床表现与实验室诊断,临床表现,晚期,12S Ratnam. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J InfectDis Med Microbiol 2005;16(1):45-51.,三期梅毒实验室诊断,晚期梅毒的皮损中，极难找到TP。 非梅毒螺旋体抗体71%阳性，梅毒螺旋体抗体96%阳性。 脑脊液WBC、蛋白、VDRL阳性。,广东省皮肤性病防治中心 WWW.GDVDC.COM,未治疗早期梅毒孕妇的胎儿感染率75-95,四、先天梅毒的临床表现 与实验室诊断,广东省皮肤性病防治中心 WWW.GD
