制剂车间微生物知识培训课件

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1、制剂车间微生物知识培训2010年9月,GMP要求,药品生产质量管理规范中明确规定：洁净室区内的人员数量应严格控制。其工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室区的临时外来人员应进行指导和监督。,GMP要求,医药工业洁净室（区）必须以尘粒和微生物为环境控制对象。 二者相比，微生物更难以控制，其基本特点为： 1、存在范围广。 2、生长速度快。 3、生存能力强。,微生物是什么？,一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物。 形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物。 是生物的一大类，形体微小、构造简单、繁殖迅速，广泛分布在

2、自然界中，是一群在化学显微镜或电子显微镜下放大几千倍，甚至上万倍才能看得到的微小生物。,常见微生物的种类 微生物细胞结构,微生物的种类,微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类,真核细胞型,原核细胞型,非细胞型,如 酵母菌、霉菌等,如：细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌,如病毒,真核微生物,细胞较大 细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体 ，胞质内有完整的细胞器 可自身进行新陈代谢、繁殖相关活动,真核微生物特点,真核单细胞,酵母菌,真核多细胞,青霉,黑曲霉,细菌,细菌结构,真菌结构,细菌的分类,革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,外毒素,内毒素,细菌的特殊结构,荚膜,荚膜是

3、细菌细胞壁外面胶状的黏液层 。 荚膜的厚度因细菌的种类而不同。除掉荚膜对细菌的生活没有什么影响，但荚膜具有抗吞噬作用和抗干燥作用。这也就解释了为什么我们在消毒时需要用75%的酒精，就是因为这个浓度的酒精可以更好的透过荚膜实现杀菌作用,细菌的特殊结构,芽孢,芽孢,在温度逐渐降低或营养缺乏,某些细菌能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小体，称为芽胞。芽胞是处于休眠状态的细菌，当环境适宜时，可恢复生长繁殖。 芽胞在自然界分布广泛，芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。,病毒,T4噬菌体 蝌蚪形病毒,病

4、毒,流感冒病毒 丝状有被膜的病毒,病毒,蛋白质外壳,DNA,病毒细胞内寄生生,注意：,革兰氏阴性菌因有内毒素镶嵌在细胞表面，当菌体破裂时会将毒素释放出来，这一部分是可以通过0.22m的过滤器的，除去此类毒素的可靠方法为活性炭吸附,体积小，面积大； 吸收多，转化快（2000倍体重/h）； 生长旺，繁殖快（20min分裂一次）； 易变异，适应强； 分布广，种类多（10万种以上）,微生物具有以下特点,微生物详细分类,真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹） 细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 放线菌： 支原体：肺炎支原体 衣原体：沙眼 立克次体：斑疹伤寒 螺旋体：梅毒 病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，

5、狂犬病毒，流感病毒。,微生物五大共性,体积小，面积大； 吸收多，转化快； 生长旺，繁殖快； 适应强，易变异； 分布广，种类多。,常见污染药物制剂的微生物,1.葡萄球菌：可引起局部感染 2.大肠杆菌：胆道及尿道感染 3.绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎 4.枯草杆菌：结膜炎 5.酵母菌：使糖分解，药液产生有机酸 6.霉菌：使制剂霉坏、酸败变质,洁净车间内微生物在哪里？,空气 水 人员 器具,1. 空气中的微生物,灰尘“微生物的飞行器”。 微生物不是凭空存在的，99%的微生物都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。 灰尘、微粒具有沉降和粘附的趋势，所以同一区域内，地面是微粒相对集

6、中的地方，也是微生物相对较多的地方，墙壁也容易粘附灰尘。,98版GMP,Air lock两扇门不能同时打开,Air Lock,仓库or外包间,洁净区走廊 Or DISP,高效过滤器,高效过滤器,气流,Air lock（缓冲间）的作用： 控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、灰尘进入车间。 必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启。,空气自净和微粒的沉降与粘附,空气自净有死角 顶送顶回（洁净走廊），地面 顶送侧回（清洗间，操作间），对面的墙角，顶棚。 微粒沉降和粘附 不能用脚踏在垫仓板和料桶上。 不得跑跳、大声喧哗。 不靠在墙上或其他物体上。,2 水,水是生命之源，有水的地方就有生命,水微生物的乐园

7、 水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。 水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。,水,药品生产质量管理规范第四章设备第三十四条中明确规定：纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生和污染。储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀。管道的设计和安装应避免死角、盲管。储罐和管道要规定清洗、灭菌周期。,制药工业对水质的要求,药厂的水源：城市自来水、井水等达到饮用水标准的水源。 口服制剂：片剂、颗粒剂、糖浆 容器清洗：饮用水 容器最终淋洗：纯化水 小容量注射剂：15ml 配制容器清洗：纯化水 容器最终淋洗：注射用水 ,混合器内部最后淋洗： 直接接触物料的部件最后淋洗： 纯水,纯水

8、管的放置,纯水由于去除了水中的余氯，有机物，特别容易滋长微生物。必须放在干净处保存。 纯水管中不能有积水。否则再使用时，微生物会污染整根管道。,3 人 洁净室中最大的微生物污染源,1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。 3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。,人体内外微生物的分布,1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌、金黄色葡萄球菌等 2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌等 3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠

9、杆菌、变形杆菌等。 4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。 5、胃肠道：大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种 6、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌,如何阻断人体污染源,药品生产质量管理规范中明确规定：进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。 药品生产质量管理规范中明确规定：无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。,我们的更衣流程,一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。 脱去

10、外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。 一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。 二更 二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。 带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下口罩 带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的包裹头发。 穿洁净服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开洁净服。 手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%的酒精能杀灭99%的微生物。,平时的卫生习惯,勤洗澡、洗头，勤换内衣 去除皮屑、头屑等人体脱落物，保持体表洁净。 勤剪头发 工作时，头皮不

11、容易出汗，易被帽子全部包裹。 勤剪手指甲 指甲内能够藏污纳垢，有很多的致病微生物。 勤换鞋 准备两双鞋经常交替穿着，保证鞋内干燥无异味。,4.器具,清洗：最后淋洗用水，纯水。 清洗后按要求包装并有清洁标签，注明清洁日期、有效期至和清洗人 储存有效期， 部件，包括不锈钢桶、Bar、筛网等，1天,灭菌与消毒,灭菌：有物理或化学方法，杀死物体上的所有微生物，包括致病的或非致病的微生物以及细菌的芽胞，称为灭菌。灭菌后的物品即为无菌状态。 消毒：用化学或物理方法杀灭物体上的病原微生物，称为消毒。 防腐：阻止微生物生长繁殖以防止物品的腐败，亦称抑菌。 无菌：不含活菌。,灭菌与消毒的方法,物理因素：温度、辐

12、射、干燥、声波、渗透压和过滤等。 （1）热力灭菌法:分为干热灭菌法和湿热灭菌法 干热灭菌法:利用烘箱中的热空气灭菌，通常在160持续12小时，可杀死细菌芽胞。此法只适用于玻璃器皿、磁器、小金属用具等耐热物品的灭菌。 湿热灭菌法 a 煮沸法：在100沸水中煮沸5分钟，可杀死细菌营养型，但杀不死细菌的芽胞。煮沸法常用于外科器械如刀、剪、镊子、注射器等的消毒,湿热灭菌法,c 流通蒸汽灭菌法：流通蒸汽的温度通常不超过100，加热1530分钟，可杀死细菌营养型，杀不死芽胞。 d 间歇灭菌法：利用反复多次的蒸汽灭菌，适用于不耐高温的某些培养基的灭菌。 e 高压蒸汽灭菌法：利用密闭的高压蒸锅，在加压下产生的

13、高温短时间杀菌的方法。灭菌效果好，是实验室和生产中最常用的灭菌法。一般采用1kg/cm2(或15磅/时2)121.3，1530分钟可达到灭菌目的，含糖培养基或注射液可用0.56kg/cm2(或8磅/时2)113，2030分钟灭菌。,灭菌与消毒的方法,紫外线 紫外线中波长200300nm者具有杀菌作用，波长265266nm杀菌力最强。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透力差，即使是薄玻璃也能滤掉大部分，所以紫外线只适用于室内及物体表面消毒。 （3） 过滤除菌 过滤除菌是利用滤器机械地除去液体或空气中细菌的方法。不耐热的物品如毒素、抗毒素、病毒、酶溶液、维生素、抗生素等均采用过滤除菌法，达到除去液体中细菌

14、的目的。 细菌滤器有贝克菲滤器、蔡氏滤器、玻璃滤器（G5和G6滤孔最小，能阻止细菌通过）及膜滤器（0.220.45m滤膜能除掉细菌）。,灭菌与消毒的方法,化学方法 消毒剂：具无选择性毒性，即消毒剂不但能杀死病原菌，同时对人体组织细胞也有损害作用，只能外用。常用的消毒剂如下： （1）重金属盐类：红汞、硫柳汞、苯汞等。 （2）氧化剂：0.1%高锰酸钾、3%过氧化氢、过氧乙酸 （3）酚类：35%来苏尔消毒地面、家具、器具表面；12%来苏儿消毒手和体表；0.5%酚作为生物制品的防腐剂。,灭菌与消毒的方法,（4）醇类：7075%乙醇、苯氧乙醇 （5）醛类：3740%的甲醛溶液（福尔马林）、戊二醛 （6）

15、环氧乙烷：气体灭菌剂 （7）表面活性剂： 0.1%新洁尔灭,微生物与产品变质,微生物广泛存在于自然界，因而液体制剂中可能有微生物污染。这些微生物若遇到适宜的条件，就能生长繁殖，一方面可造成料液变质，失去疗效；另一方面对病人可引起不良反应，甚至引起继发感染或危及生命。为了防止由微生物引起的药物变质，生产环境、条件、操作等应符合GMP要求，保证液体制剂的卫生学标准。,微生物与药物变质,根据药物不同的剂型，如出现下列情况之一，即可认为该药物已为微生物所损害： （1）有致病菌存在。 （2）微生物的总数超过一定的限量（口服及外用药物；注射剂及其他无菌制剂不得有活微生物的存在）。 （3）有微生物的代谢产物，如热原质等的存在。,防止药物微生物污染的措施,药物中微生物的来源：原料、制造过程所应用的设备、空气、水、操作人员及最后包装使用的容器等。 （1）加强药物的生产管理 （2）使用合适的防腐剂与抑菌剂 （3）合理的储存,Test,我们在洁净区中如何做到防止： 空气污染 水污染 人员污染 器具污染,