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1、ABO血型鉴定试验,吉林省临床输血质量控制中心 吉林大学中日联谊医院输血科,血样本,ABO血型鉴定试验,ABO血型鉴定试验,ABO血型鉴定试验,ABO血型鉴定试验,ABO血型鉴定试验,红细胞悬液制备 抗凝或不抗凝的血标本洗涤压积红细胞配制红细胞悬液 2-3% 的红细胞悬液 试管法血型鉴定、效价滴定 5% 的红细胞悬液 玻片法血型鉴定、间接抗人球蛋白试验 10% 的红细胞悬液 抗体亲和力测定 血清标本 抗凝或不抗凝血标本37水浴箱玻棒使血块与 试管壁分离离心将血清吸至干净试管待用,ABO血型鉴定,原理： 根据ABO血型的分型原则及其独特的性质，利 用凝集试验技术通过正定型（红细胞定型）和反定 型
2、（血清定型）两组试验可准确鉴定ABO血型。 试剂： 抗A、抗B 试剂血清 A型、B型和O型试剂红细胞悬液 2-3 %受检者红细胞悬液和血清或全血,ABO血型鉴定试验,方法： 玻片法 不适于血清抗体鉴定 试管法 正定型、反定型 结果解释 凝集为阳性 即被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原；或被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体。 不凝集为阴性,加试剂抗体血清,ABO血型鉴定试验,加被检红细胞悬液,ABO血型鉴定试验,离心,ABO血型鉴定试验,相对应的抗原抗体反应,ABO血型鉴定试验,观察结果,ABO血型鉴定试验,ABO血型判断 血 正定型 反定型 型 抗-A 抗-B AC BC O
3、C A + + B + + O + + AB + + ,ABO血型鉴定试验,思考题 ABO血型的分类原则是什么？ A BO 血型的分类原则是根据红细胞膜上所存在的抗原，血清中所存在的抗体来进行分类的。通常使用抗-A 和抗B 两种血清及 A 型、B 型和 O 型三种试剂红细胞来鉴别。如受检者红细胞被抗血清凝集，说明红细胞膜上存在相应的抗原；如不发生凝集说明不存在相应抗原；如受检者血清与试剂红细胞发生凝集，说明血清中存在相应的抗体；如不发生凝集，说明不存在相应抗体。,ABO血型鉴定试验,为什么ABO血型鉴定应采用“正反定型”两种方法？ 因为 ABO 血型鉴定,主要依据受检者红细胞与抗A 、抗B 试
4、剂血清反应结果确定,此法称正定型法；也可通过受检者的血清与A型、B型和O型试剂红细胞反应结果确定,此法称反定型法，同时采用正反定型法,并互相核对其结果是否一致是一个可靠的血型鉴定法。 为什么在反定型中使用O型红细胞？ 因为有些受血者或供血者血清中存在因免疫、妇女妊娠或不当输血而引起的抗A、抗B以外的抗体，这些抗体不是自然所期望存在的。血清反定型时，使用O型红细胞可在 ABO 血型鉴定试验过程中检测出受检血清中是否有“不规则”抗体的存在。,ABO血型鉴定试验,为什么红细胞悬液过浓或过淡均可出现假阴性反应结果？ 因为抗原、抗体在适当的比例下，反应最强。若红细胞悬液过浓，则抗原过剩，抗体不足，每个红
5、细胞均只能吸收少量抗体，不足以形成凝集。若红细胞悬液过淡，则红细胞间距离较大，不易集聚在一起，不形成凝集。在实际血型鉴定时，玻片法用 5% 红细胞悬液敏感性较强，并应在鉴定过程中不断摇动玻片以促使其相互接触。试管法用 2% 浓度的红细胞悬液 敏感性较好，容易观察凝集。,ABO血型鉴定试验,为什么玻片法血型鉴定要严格规定观察结果的时间？ 凝集反应出现的快慢与强弱是由抗原抗体的性质决定的,如果抗原的抗原性强，抗体效价高，凝集反应的第一，第二阶段可以在数秒内完成；如抗原的抗原性弱，抗体效价也低，则凝集反应不明显， 反应需要一段时间才能完成。 因为血清在空中暴露时间过长，发生浓缩，从而使红细胞聚集，造
6、成假阳性结果；如果不等反应完成便判定反应结果，可使阳性结果误报成阴性结果，造成假阴性。所以玻片法血型鉴定要严格规定 观察结果的时间,凝胶试验使用的试剂和器材,凝胶技术,凝胶技术,凝胶法鉴定ABO血型,凝胶法鉴定ABO血型,优点： 敏感： 在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 结果可保存： 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。 操作技术要求较低： 凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。 无需洗涤的抗球蛋白试验： 缺点凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。高度敏感有时也会造成不便。,ABO血型鉴定试验,注意事项 1
7、、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。 2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。 3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温2024内进行试验，而37条件，可使反应减弱。 4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。,ABO血型鉴定试验,5、玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。 6、正、反定型结果一致才可发报告。 7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。,
