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1、实验十 孢子萌发和病原物的接种,了解病原菌生活力的强弱，存活期的长短，有效传播距离，抗药性的大小，生活史，环境与发病的关系以及有些病原菌的鉴定等，都必须进行孢子萌发试验。 孢子能否萌发，萌发率的高低，萌发势的强弱以及萌发的方式等既受病原菌自身内在的因素影响，也受外界环境条件制约，因此要达到萌发试验的目的，必须充分掌握萌发所需的各种条件。,一、实验目的,通过人为作用使病原物与寄主植物感病部位接触，创造条件使病原物侵入使寄主发病叫接种，接种是证病过程的重要步骤，在研究植物病害规律，测定品种抗病性，药剂防病效果时都需要接种。因此，接种是植病工作者必须掌握的基本技术。 本实验主要学习真菌孢子萌发以及植
2、物病原物常用的接种方法。,(一) 孢子萌发的方法很多，常用的有以下几种： 1.琼脂平板法 对于某些不适于直接在水滴中萌发的真菌可采用此法。 取洁净的载玻片，在熔化并冷至50左右的2%水琼脂培养基中沾一下，待凝成薄层后，去掉一面琼脂培养基，将有琼脂培养基的一面朝上，平放在培养皿内的“U”形玻棒上，皿底衬上吸水滤纸保湿。,二、孢子萌发的内容、材料和方法,再将小麦秆锈菌夏孢子或白粉菌的分生孢子轻轻弹落或涂抹在琼脂平面上。保温培养，小麦秆锈菌夏孢子培养在20温度下，小麦白粉病分生孢子培养在1012下，2小时后镜检萌发结果。 此法也可以直接在培养皿中做成的水琼脂平板上进行。,2.悬滴法 在洁净的盖玻片中
3、央，滴玉米大斑病菌孢子悬浮液一滴，注意滴成圆形，大小适当，菌悬液浓度以显微镜低倍镜头每个视野约20个孢子为宜。然后翻转盖片制成悬滴，平放在培养皿内的“U”形玻棒上，皿底衬上吸水滤纸保湿，盖好皿盖，放置在2628温箱中培养，45小时后检查萌发结果。,(二)孢子萌发的记载方法 孢子萌发是先吸水膨胀，然后长出芽管，通常以芽管长度超过孢子直径一半(不是正圆形的孢子以短径为准)作为萌发标准，记载项目有以下几种:,(1)萌发率： 即萌发一定时间后，随机取一定数目(至少500个)的孢子，检查萌发的孢子数，求出萌发百分率，如果用该法记录两种或几种不同处理时，要注意严格掌握检查时间。 (2)萌发时间：测定孢子萌
4、发达到一定萌发率所需的时间。 (3)芽管平均长度：测定一定数目已萌发孢子的芽管长度，求其平均值。,三、植物病原物接种的内容、材料和方法,(一)植物病害人工接种方法 人工接种方法是根据病害的传染方式和侵染途径设计的，植物病害的种类很多、其传染方式和侵染途径各异，因此接种方法也不相同。,(1)拌土法 (小麦根腐病) 拌土法适于土壤传染的病害，方法是将消毒的土壤分别装入两个小花盆中，其中一盆表层覆以一厘米厚的菌土，菌土是用玉米砂培养菌1份加消毒土5份混合而成，另一盆不接种(不覆菌土)作为对照。将经0.1%升汞表面消毒3分钟并用无菌水洗3次的小麦种子，分别播种在两个花盆内，插上标牌，注明接种日期，方法
5、病害名称及接种人姓名，花盆放在室温下，浇水保湿，遮阴管理，待幼苗出土展开叶子后(大约一周)，观察并记载根腐病发生情况。,(2)喷雾法(稻瘟病) 气流及雨水传播的病害常用此法接种，将在高粱粒培养基上培养好稻瘟病菌株，装在加有无菌水的烧杯中，用力搅拌，待孢子洗下后，以纱布过滤，并于滤液中加入吐温20，配成孢子悬浮液，用喷雾器均匀喷布在稻苗上。同时设一不喷菌液而喷无菌水的作对照，保湿48小时，移到温室中正常管理，7天后作发病调查。,(3)涂抹法(小麦秆锈病) 这也是气传病害常用的接种方法，用于禾本科锈病的接种。方法是用食指沾锈菌夏孢子悬液自下向上轻轻涂抹欲接种的小麦叶片，也可先用手指沾水摩擦叶片，使
6、叶表有一层水膜，然后将夏孢子粉抹在上面，以不涂抹孢子悬液或孢子粉的作为对照。用塑料罩保湿12小时后揭布，正常管理，7天后作发病调查。,(4) 创伤接种法 (大白菜软腐病) 适用于由伤口侵入的弱寄生菌。方法是取切成适当大小的白菜帮两块、经水洗，待水稍干后，以10%漂白粉溶液作表面消毒，分别放在两个灭过菌的上下铺有吸水纸的培养皿中，用酒精擦过的玻璃棒顺着白菜帮打三排不穿透的孔穴。将培养好的白菜软腐病菌斜面菌种以无菌水冲洗，配成菌悬液。,然后，先以灭过菌的注射器吸取无菌水滴于菜帮的第一排孔内作为对照，再用该注射器吸菌液滴于第二、三排孔内。注意无论无菌水、还是菌液都不要滴的过多，以免流出孔穴，另一培养皿的菜帮以同法处理作为重复，盖好皿盖，置于2628的温箱中，24小时后检查发病情况。,(二) 接种试验的观察和记载： 认真观察和记录是做好接种试验的重要环节，为了及时正确地分析总结试验结果，必须认真观察并做详尽的记录，如记录接种时间，接种植物、品种、接种方法、部位、接种用的病菌名称(包括菌系和生理小种)、来源、繁殖和培养方法(培养基、培养温度、培养时间)、接种体浓度、接种的方法和步骤及接种后的管理等。,
