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1、探究: 培养液中酵母菌 种群数量的变化,探究:培养液中酵母菌种群数量的变化,目的要求 1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法 2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化 3、注意样方法的应用 4、体会影响种群数量变化的因素,1、酵母菌的繁殖方式主要是:,2、酵母菌的呼吸方式是:,兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸),回顾思考:,出芽生殖,3、酵母菌的培养条件要注意那些问题?,比如要用适宜的温度培养,调节好PH值,溶氧量的控制等。,酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母菌可以用液体培养基(培养液)来培养。培养液中酵母菌种群的增长情况,与发酵食品的制作有密切关系。,培养液中酵母菌种群数量开始一段时间
2、是“J”型增长,由于营养物质的消耗,有害代谢产物的积累,PH值的改变,种群数量呈“S”型增长。,探究:培养液中酵母菌种群数量的变化,问题:培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的?温度会影响酵母菌的生长吗?营养成分会影响酵母菌的生长吗? 作出假设 根据前面所学的知识,针对这一问题作出假设:,讨论探究思路 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板(2mm2mm方格)、滴管、显微镜等,都由老师提供。 在制订计划前,你需要思考以下问题,并与同学讨论。,实验设计 将9支试管分成ABC三组,每组3支。A组为实验组,装培养液10 mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28。B组装培
3、养液10 mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度5,与A组形成温度条件对照。C组不装培养液,只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28,与A组形成营养条件对照。,实验操作: (1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液; (2)、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养液到A组和B组试管,用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌水到C组试管。待分装完毕,每支试管加塞后把试管扎成捆后,然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。 (3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌; (4)、接种菌种:用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液,往每支试管中加入。(注意滴加量不要太多,避免
4、初始菌数过多。) (5)、培养:将 A、C试管置于 28的恒温箱中培养。将 B试管置于5的恒温箱中培养。(5的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5时代替。) (6)、计数和记录:每天取样时间大体一致,每次每组按序号取一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范,取样的吸管要干净且分开使用,每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计数后,立即将数据填到记录表格中。,分析结果,得出结论 将所得数值用曲线图表示出来,分析实验结果是否支持你所做的假设。,酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈 “S”型增长,但之后会下降。温度、营养成分会影响酵母菌种群数量的变化。,探究的结论:,一、怎样进行酵母菌的计
5、数? 提示:对一支试管中的培养液(可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的,可以采用抽样检测的方法:先将盖玻片放在计数室上,用吸管吸取培养液,滴于盖玻片边缘,让培养液自行渗入,多余培养液用滤纸吸去,稍待片刻,待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部,将计数板放在载物台的中央,计数一个小方格内的酵母菌数 量,再以此为根据,估算试管中的酵母菌总数。,介绍:血球计数板的构造,1、血球计数板:是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台,中间的平台较宽,其中间又
6、被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网。,2、方格网的构成:,方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,计数室通常有两种规格:一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由1625=2516=400个小方格组成。,3、使用方法:,将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的盖玻片,将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内,加盖盖玻片。,5、单
7、位换算: 以1mm1mm为例,大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。换算为1mL:1000/0.1= 104即1mL是104 个0.1mm3 。,4、计数室的规格:,计数室长宽有: 1mm1mm, 2mm2mm, 3mm3mm等 深度均为0.1mm。,如果使用规格为16格25格的计数室,要按对角方位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数。 如果使用规格为25格16格的计数室,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数(五点取样法)。 出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。,6、如何计数呢
8、?,规格为25格16格的计数室,五点取样法,7、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm,请推算出将一个小方格范围内的酵母菌数,换算成10ml培养液中酵母菌总数的公式。 每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式 (以1mm1mm为例):,(1)16格25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)400 104 稀释倍数 即:一小方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数,(2)25格x16格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)400 104 稀释倍数 即:一小方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数,课本中大方格的长和宽各为2mm,深度为
9、0.1mm,其体积为0.4mm3。换算为1mL:1000/0.4 = 2.5103 ,即1mL是 2.5103个 0.4mm3。 则:每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式(2mm 2mm ) :,(1)16格25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)400 2.5103稀释倍数 即:一小方格内酵母菌个数106稀释倍数,(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)400 2.5103 稀释倍数 即:一小方格内酵母菌个数106稀释倍数,使酵母菌混合均匀。,不需要,因不同时间取样已形成对照。,需要。尽量减
10、少误差。对每个样品计数三次,取其平均值。,二、从试管中吸出培养液进行计数之前,建议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么?,三、本探究需要设置对照吗?如果需要,请讨论对照组应怎样设计和操作,如果不需要,请说明理由。,四、需要做重复实验吗?,五、怎样记录结果?记录表怎样设计?,.,只计数相邻两边及其顶角的酵母细胞数,稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。,八、血球计数板的清洁,血球计数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌
11、体或其他沉淀物,若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。,六、如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应当采取怎样的措施?,七、对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数?,表达和交流 1、向全班汇报本小组7天的数据,算出每一天全班各组数据的平均值,根据平均值重新画酵母菌种群数量的增长曲线。将这个增长曲线与本小组的曲线进行比较,分析其相似程度,并做出合理的解释。 2、根据各组平均数据画出的增长曲线有没有什么总趋势?如果有,作出说明。如果设计了无菌水的对照,也画出增长曲线。,3、影响酵母菌的种群数量增长的因素可能是什么?,除了本实验中温度、营养以外还包括酵母菌菌种本身性质、接种时间、p值、接种量、溶氧量等影响因素。,