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1、牛人工授精技术员培训,萨吾塔力.达吾肯 伊犁畜牧科学研究所 13565246918,牛冷配改良技术要点,1、子宫解剖 2、发情鉴定 3、卵泡与黄体 4、输精时间 5、输精部位 6、难孕牛治疗,1、子宫解剖,2、发情鉴定,3、卵泡与黄体,牛冷冻精液配种的工作房间的要求 (1) 有3-5平方米的面积，能放下一个液氮罐和一张工作用桌；使用一间独立的房屋或在一个避静、卫生的房间选用一个角皆可。地面以水泥或砖地为好，易打扫，灰尘少。 (2)房间应有水、电，房间及周围环境应干净、卫生、干燥、通风。 (3)每日应打扫地面卫生，擦去桌面和器具的尘土，一周(至少一个月)应大扫除一次。 (4)房间内不能存放有挥发
2、性气味的药品，室内禁止吸烟、禁止堆放与工作无关的物品。,牛冷冻精液解冻注意事项 (1)所有直接接触冷冻精液的器具及容器都应是灭菌消毒过的。防止液氮罐内和解冻过程中的污染，如镊子、装解冻液和精液的容器等 (2)3238是适宜的解冻温度，温度低了影响精子的恢复，高于42会使精子迅速死亡；,冷冻精液解冻后的存放注意事项 (1) 解冻后就应将精液从水浴中取出，长时间放在较高的温度下，会加速精子的衰竭； (2) 解冻后尽快输精，常用的解冻液成分比较简单，不能长时间保存精液，解冻后输精越快越好，细管冷冻精液最多不能超过1小时，颗粒冷冻精液最多不能超过2小时； (3) 解冻后不能再次急剧的升温或降温，否则会
3、影响冻精的活力； (4)解冻后需要远距离运输的，可用1015解冻，解冻后用棉花等包裹好，低温保存(5)和携带，可延长精子的存活时间数小时。,用显微镜检查精液活力 载玻片、盖玻片和其它接触精液的器具应预热，加热时又要注意不能超过40。 注意使用器具的卫生和溶液的质量。 显微镜物镜不要直接沾上了精液。 对焦距时将显微镜镜头从下往上运动，先将镜头靠近盖玻片，再逐渐轻缓地上移聚焦，以免损坏镜头和载玻片。 用放大100200倍观察即可，视野大，可看到精液的总体情况，操作容易。,输精时间 发情开始后824h 适宜输精时间 发情开始 发情结束 0 12 24 排卵 输精部位 卵泡侧的子宫角基部 子宫颈内口处
4、的子宫体基部 输精次数 1-2次,-,直把输精操作技术 (1)输精员在操作前戴好长臂手套或徒手涂以润滑剂，输精器按操作规程装好精液备用，配种牛保定牢靠； (2)将一只手（左手更方便些）伸入母牛直肠内，掏出粪便，清洗母牛外阴部并擦干。用伸入直肠的手隔着直肠壁找到子宫颈并轻握，主要用大拇指、食指和中指固定和调整子宫颈的位置。另一只手持输精器沿阴道上壁先斜向上，再平直向前，至子宫颈外口处； (3) 双手凭感觉协同操作，主要靠伸入直肠的手调整转动子宫颈的方向通过子宫颈。输精器通过子宫颈的螺旋皱襞后，把精液输入刚过子宫颈内口的子宫体基部或卵泡侧子宫角内。,直把输精操作注意事项 (1)插入输精管时要小心谨
5、慎，不可用力过猛，以防输精器穿破子宫颈或子宫壁(没必要输入太深)。 (2)个别母牛努责，直肠壁收缩紧张，子宫颈也向后移。这时，可把手前伸，刺激肠壁，使其放松，然后握住子宫颈向前推，使阴道壁伸展，以便于输精管插入。 (3)有些母牛子宫垂入腹腔，可用手握住子宫颈慢慢往上提，才便于输精管通过。,(4)有时输精管已到达子宫颈口，就是不好插入，这可能是子宫颈开张不好，有炎症、颈口有疤痕等，或许是已孕母牛假发情，遇到这些情况要认真检查，诊断清楚，妊娠牛强行深部输精会引起流产。 (5)操作时应主要靠直肠内的手调整子宫的位置，不能靠持输精器的手硬戳。 (6)术者最好先将阴唇掰开(或由助手协助)，把输精器插入阴
6、道后再将操作手伸入直肠，也可将伸入直肠的手臂往侧下压，使阴门裂张开，这样输精器头部不会碰到阴唇外部，不易被污染。,牛配种时间不宜过早,母牛发情持续时间 18-24小时 排卵 发情结束后的6-12小时 精子在母牛生殖道的存活时间 12-20小时 精子在子宫和输卵管内获能需数小时 卵子排出后能够保证正常受精的时间为数小时,母牛发情适时输精时间 母牛发情后的12-24小时是适宜的输精时间，6-27小时也可以。 凌晨或上午发情的牛可在下午或傍晚配种，下午或傍晚发情的牛可以在第二天上午配种。 一次输精配种，在发情后18-24小时。 有些发情持续时间长、排卵延迟的牛需第三次输精，以确保精卵能够结合受精。,
7、母牛一次发情输精次数 有经验的技术员，在发情开始后的18-24小时一次输精即可达到满意地受胎率(60)。 两次输精法，即在母牛发情后约12小时(早晨或上午发情，在下午或傍晚配种，下午发情的牛第二天早配种)第一次输精，间隔约12小时第二次输精。 发情时间延长的母牛需第三次输精。,输精部位 卵泡侧的子宫角基部。 子宫颈内口处的子宫体基部 两角及子宫体基部三点输精 子宫颈难通过的牛也可输入子宫颈深部，当然这会损失一部分精液。 常规操作 轻缓地将精液输在刚通过子宫颈内口处的子宫体基部。 可用食指在子宫颈内口和子宫体部轻轻触摸输精器的头部确定位置。,为什么输精部位不能太深？ 直把输精不是越深越好。没有必
8、要将精液送得超过子宫角的弯曲部，这是因为： (1) 精子在发情母牛的子宫内运行的很快。十多分钟甚至几分钟即可到达输卵管，精子在子宫内运行有助于精子的获能。 (2) 子宫结构 子宫角向下弯曲，发情时子宫水肿和充血，输精器插的太深容易损伤子宫内膜，影响了受胎。 (3) 准确输精 如果是左手在直肠内操作，输精器很容易进入右侧子宫角内；如果是右手在直肠内操作，输精器容易进入左侧子宫角。盲目将精液输的太深，可能使排卵侧无精子而使卵子无法受精。,细管冷冻精液的解冻和装枪 细管取出后首先在空气中停留几秒，然后用32-38水浴升温 水浴时间0.25ml细管停留约15秒钟， 0.5ml装的细管停留约20秒钟。
9、精液溶解后，从水浴中取出，用较干的酒精棉球或灭菌的棉花、卫生纸等擦干细管外壁 ，再用专用细管剪刀将细管的封口端垂直剪开，开口端朝前装入输精枪，钢芯对准细管棉塞部，法式卡苏枪将枪体放入塑料外套至头部，固定紧备用。日式金属输精枪无外套，将头部与体部旋紧即可。,使用细管冷冻精液注意事项 (1) 不要在温水中浸泡时间太长。 (2) 水浴解冻的容器最好能将细管冻精解冻时横置，如果需将细管垂直放入，将棉塞端朝下。 (3) 细管冻精取出后不要急忙将细管放入水中，先在空气中放置几秒，让细管口内的液氮充分挥发，以防止细管“放炮”。 (4) 剪塑料细管封口时，应使用专用的细管剪刀，这样剪的口齐而且园，输精时精液不
10、易倒流。 (5) 注意细管和细管剪刀的卫生，因为细管口部分要接触精液。,(6) 往输精枪里装细管时，将输精枪的钢芯先插入细管的棉塞端口内，以防推精液时钢芯走到细管外。如果推精液时阻力很大，可能就是钢芯跑到细管外了或是钢芯不直。 (7) 用法式卡苏枪将金属枪体放入塑料外套时要行至塑料外套的头部，否则输精时头部的塑料部分可能会打折。塑料外套长了，应剪去一段。 (8) 输精部位不能太深，尤其是使用有塑料外鞘的输精枪，许多塑料外鞘的头部不光滑，很容易损伤子宫内膜。 (9) 输精器枪体不要碰折，钢丝弯曲后推细管棉塞困难。 (10) 个别青年母牛或土杂种母牛子宫颈开口小，没有输精枪体的直径粗，无法通过子宫
11、颈。碰到这种情况，可用颗粒精液输精，颗粒精液的输精器比细管输精枪细。没有颗粒精液时，可将细管精液推入试管内，加入近1毫升生理盐水或其它解冻液，用颗粒输精器输精。,液氮罐在使用中需要注意什么问题？ (1) 液氮罐放置在荫凉避静处，室内通风。 (2) 运输和搬运中要防止震荡和碰撞。贮存罐不能作为运输罐使用。 (3) 罐外保持卫生，罐内注意无菌。许多病菌在液氮低温下不会死亡，液氮罐内也可能传播病菌，因此不要用不卫生的器具接触液氮，不要将不卫生的绳袋等放入罐内。每年应将罐内清洗一次，液氮罐停用时，应将罐内的颗粒等清理干净，否则罐内会生霉菌。 (4) 取冻精后及时盖罐塞。为了减少液氮消耗，罐口处可用塑料
12、、胶皮等适当密封，但仍要留有通气的缝隙，不可绝对密封。 (5) 注意液氮面，绝对不能干罐，干罐后罐内保存的东西即报废，液面高度剩1/3时应补充液氮。如果添加不方便，应将精液沉至罐底，浸入液氮中。,冷冻精液在取用中应注意什么问题？ (1) 取冻精时，提筒只允许提至液氮罐颈口水平线下，严禁提出罐口，而且停留时间不能超过10秒，需要继续操作时，应将提筒浸入液氮后再提起操作。 (2) 向另一液氮罐转移冻精时，提筒离开液氮面的时间不能超过5秒； (3) 颗粒冻精要放入系口的纱布袋内，不能直接放入提筒内，否则取冻精后提筒再次入液氮时，提筒内液氮沸腾，冻精会漂出提筒，可将纱布袋口线绳系一个可滑动的活扣，易开
13、易合，取用方便。 (4) 取冻精的镊子，拴冻精袋的线绳等接触冻精和液氮的物品要卫生。 (5) 取颗粒冻精时，用止血钳比镊子好，冻精不易滑落。,6、难孕牛治疗,难孕牛的概念 母牛不孕症为暂时性或永久性的繁殖障碍。繁殖率降低，则产奶量下降，饲养管理和治疗及配种开支增大。诊断标准为全年配种牛的纯种奶牛，一般产奶量的母牛产后80天、高产奶牛120天，青年牛20月龄、超过这个时间即属难孕牛。农牧区饲养的牛，由于季节和饲养管理条件的限制，常季节性发情，正常配种3个情期不孕的牛或参加配种70天未受胎的牛为难孕牛。,难孕牛诊断 (1)调查病史，查明原因、症状、发病头数、年龄、饲养管理、精液品质、输精技术、繁殖
14、史、既往症等。 (2)临床检查 全身、阴道、直肠检查。 (3)实验室检查 在实验室做微生物、子宫内膜活组织和激素测定等。,先天性不孕症治疗 (1)幼稚病生殖器官发育不全； 治疗： 公畜刺激； 按摩卵巢子宫； 激光穴位照射。 激素治疗法有： HCG静脉注射或肌肉注射 2500-5000单位； PMSG 1500IU 肌肉注射； 雌二醇或苯甲酸雌二醇 5-20mg； 已烯雌酚 5-20mg。,(2)两性畸形(雌雄间体，半阴阳)无法治疗、淘汰； (3)异性孪生不孕受雄激素影响在性分化中造成，染色体异常，直检时摸不出正常的子宫和卵巢，阴道短小，为盲端，输精器无法插入；这种母牛应淘汰。 (4)生殖道畸形
15、 单子宫角 子宫颈闭锁 双颈双口 膣肛,后天性不孕症治疗 (1)营养性：瘦弱、过肥、饲料不全价、品质不良。 VitA 10-20万单位，间隔5-7天，用3-4次； VitD 2.5-10万单位，间隔7天用3-4次，同时加强运动和光照； VitE 100-200ml，间隔5-7天使用3次； 日粮中补充比例适当的矿物质和微量元素。 (2)气候性：严冬、酷暑。 (3)管理性：高产、使役过度。 (4)繁殖技术性：漏配，技术操作不过关。 (5)衰老性：绝情期13-15岁。,休情母牛常用的治疗方法 FSH 100 -200单位 生理盐水稀释3- 4ml，肌肉注射 ； LH 100-200单位 生理盐水稀释
16、3- 4ml，肌肉注射； HCG 静脉注射2500-5000单位，肌肉注射5000-20000单位； LHRH-A 200-1000微克肌肉注射； PMSG 1000-2000 IU肌肉注射； 孕激素 注射、埋植或阴道栓法处理912天； 雌二醇 20-30mg一次肌肉注射。 三合激素 按1ml/100kg肌肉注射 ； LHRH-A 25-100g，隔9天后PGF2 ； 电针、激光或催情的中药方剂； 垂体后叶素； 胎盘组织液20ml； 浓盐水灌注子宫。,持久黄体的诊断和治疗 未妊娠，近期也未配种的母牛，经2-3次检查，同部位存在着同一黄体20天以上可确诊为持久黄体。 治疗方法：PGF2类似物，宫注1支，肌注2-3支。,母牛排卵延迟治疗方法 排卵延迟是因为LH分泌不足。 治疗方法 在配种输精时，肌肉注射LHRH-A 25g-100g或LH 200
