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1、第1章 微生物培养技术章末复习提升课微生物技术1.培养基的制备计算称量溶化灭菌倒平板。2无菌技术主要指消毒和灭菌。实验室中常用紫外线或化学药物消毒，如用酒精棉球擦拭双手。灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。另外，实验操作应在无菌环境中，例如酒精灯火焰旁。3倒平板操作待培养基冷却至50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，严格遵循课本上的操作步骤。4平板划线操作平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线或交叉划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。5稀释平板涂布法先将菌悬液进行系列稀释然后涂布平板，在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在
2、培养基表面形成单个的菌落。6应用选择培养基分离某种特定的微生物选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本专题中有选择分解尿素的细菌和纤维素分解菌的两种培养基。测定某种微生物的数量每克样品中的菌落数(CV)M。总之，在实验室培养微生物中一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。章末综合测评(一)(时间：45分钟满分：100分)一、选择题(每小题6分，共60分)1不同培养基的具体配方不同，但一般都含有()A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素【解析】
3、培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源，有的培养基中还含有生长因子。【答案】C2下列对四种微生物的相关叙述，错误的是()ACO2和NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自NH3的氧化BCO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源，该生物所需的能源来自太阳能C糖类和N2是乳酸菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自乳酸的氧化分解D葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源，但CO2一定不是酵母菌的碳源【解析】乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，生命活动所需能源主要来自糖类氧化分解形成乳酸时释放的能量，其生命活动过程中不能直接利用N2作为氮源。【答案】C3产生标准菌落的最初数目和培养基分别是()A同种少数细菌
4、，液体培养基B许多细菌，液体培养基C同种少数细菌，固体培养基D许多细菌， 固体培养基【解析】在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，都是肉眼不可见的。在固体培养基上的细菌，当数目较少时也是不可见的。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落， 就不可能有比较标准的形态。【答案】C4.(2013江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养
5、过程中每隔一周观察一次【解析】微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板，A项错误；每一次划线前都要灼烧接种环，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，B项正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件，C项错误；培养过程中观察的间隔时间不能太长，适宜条件下一般不超过24 h，D项错误。【答案】B5固氮菌可以从豆科植物的根瘤中分离出来，有关说法错误的是()A选用大且红润的豆科植物根瘤B分离培养固氮菌的关键是杀死表面杂菌C因材料过大，不能采用平板培养基分离技术D可以利用选择培养基进行纯化【解析】题目中的固氮菌应是根瘤菌。可以在缺氮的培养基上选择培养，也可以利用琼脂平板划线法进
6、行分离。当然，杀死根瘤表面杂菌，将内部根瘤菌制成菌落是实验的关键。【答案】C6把乳酸菌、酵母菌、硝化细菌三种不同类型的微生物分别培养在三个半固体培养基中，几天后观察结果如图所示(图中阴影表示微生物的生长状况)，下列叙述正确的是()A甲管中培养的微生物的异化作用类型是自养型B从结构上看，丙管中培养的微生物具有成形的细胞核C乙管中培养的微生物可以进行出芽生殖D这三种微生物所需的碳源均为有机碳源【解析】乳酸菌是原核生物，属异养厌氧型生物，酵母菌是真核生物，属兼性厌氧型，生殖方式有出芽生殖和分裂生殖两种，硝化细菌是原核生物，属自养需氧型生物。【答案】C7细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼
7、烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于消毒或杀灭哪些部位的杂菌()A接种针、手、培养基B高压锅、手、接种针C培养基、手、接种针 D接种针、培养基、手【解析】培养基、手和接种针都可以接触空气而被空气中的微生物污染，因此都应消毒和灭菌，但消毒和灭菌的方法不同。【答案】C8某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的微生物R，比较理想的方法是采用()A天然培养基B稀释平板计数法C利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D用显微镜直接观察、寻找，再培养【解析】本题考查微生物的选择培养。在培养过程中可以通过选择该微生物能生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基，使微生物R能在该培养
8、基上成为优势菌种而大量繁殖。【答案】C9将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态，下面能加快这一变化过程的一项是()ACO2的释放B丙酮酸转化成酒精C葡萄糖的利用 DATP的形成【解析】由富氧状态变为缺氧状态是将氧气消耗，消耗氧气的过程为有氧呼吸葡萄糖的利用。【答案】C10甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是()粉状硫K2HPO4FeSO4蔗糖10 g(NH4)2SO404 gH2O100 mLMgSO4925 gCaCl205 gA.甲、乙、丙都是异
9、养微生物B甲、乙都是自养微生物，丙是异养微生物C甲是固氮微生物，乙是自养微生物，丙是异养微生物D甲是异养微生物，乙是固氮微生物，丙是自养微生物【解析】分析表中的三种培养基，甲能在无氮源的中正常生长繁殖，说明甲具有固氮能力，属于固氮微生物；乙能在无碳源的中正常生长繁殖，说明乙能利用空气中的CO2，属于自养微生物；丙只能在含碳源和氮源的中正常生长繁殖，说明丙为异养微生物。【答案】C二、非选择题(共40分)11(20分)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题： (1)为了从样本中获取
10、致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 _；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 _。(
11、4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 _。【解析】(1)实验室中对微生物纯化培养时，常用的接种方法有划线法和稀释涂布法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖，常用涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌，在该抗生素存在的范围内，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中还有菌落生存，则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知，在应用时，要想杀死某致病菌，就得选择能使该致病菌大量死亡，即产生的透明圈大的那种抗生素。【答案】(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌
12、(4)A12(20分)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用了稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板，先行培养了一段时间，这样做的目的是_。然后，将1 mL水样稀释100倍，在三个平板上用涂布法分别接入0.1 mL的稀释液；经适当培养后，三个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出，每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的_。(3)示意图A和B中，
13、_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到菌株接种到液体培养基中，并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行震荡培养。结果震荡培养的细菌比静止培养的细菌生长的速度快。分析其原因是：震荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。【解析】(1)检测一个培养基是否合格的方法是放在恒温培养箱中培养一段时间，看是否有菌落产生。计算三个平板的平均值是38,0.1 mL的稀释液是38个菌落，则1 mL 100倍的稀释液含有活菌数为3.8103。(2)接种环等金属用具用灼烧灭菌，平板划线法将聚集的菌落逐步分散成单个。(3)图B的菌落分布均匀。(4)震荡的目的是增加培养液中的溶氧量，使菌体和培养液接触更充分，从而提高了营养物质的利用率【答案】(1)检测培养基是否被杂菌污染3.8103(2)灼烧将聚集的菌落逐步稀释以获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质
