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1、1酸性染料比色法测定苦参药材中总生物碱的含量【摘要】目的：建立酸性染料比色法测定苦参药材中总生物碱的含量。方法：将苦参的酸水提取液用氢氧化钠溶液调节至中性后，依次加入 pH=7.6 缓冲溶液，溴代麝香草酚蓝指示液、氯仿混合振摇，静置分层，于 413 nm 波长处测定氯仿层吸收度。结果：苦参碱检测浓度在 0.004mg/mL0.02 mgmL 范围内与吸收度线性关系良好，平均加样回收率为 98.96%(RSD=1.59%)，并对实际药材进行了含量测定。结论：本方法操作简便、准确，可用于苦参药材的质量控制。 【关键词】 酸性染料比色法苦参碱含量测定Abstract Objective：To est
2、ablish a method to determine total alkaloids in radix Sophora lavescens by acid dye colorimetryMethods：total alkaloids of radix Sophora lavescens were extracted by acidified water，then adjusted to neutral by sodium hydroxide solution, dissolved with buffer solution，then were mixed with 0.025 of brom
3、othymol solution and chloroform，and then the mixture was shaken，standing and demixed，the absorbability of chloroform layer was detected at the wavelength of 413nmResults：The detection concentration of matrine showed good linearity with its absorbability within the range of 0.004 mg/mL0.20 mgmL(r=0.9
4、992)，the average recovery was 98.96(RSD=1.59)three radix Sophora lavescens from different source were determined with this method.Conlusion：The established method is simple and accurate，which can be used for quality control of Radix Sophora flavescentis.Key words Acid dye colorimetry；Matrine；Content
5、 determination中药苦参是豆科植物苦参 Sophora flavescens Ait.的干燥根，所含有的生物碱是苦参药理作用的主要有效成分，具有抗炎、抗肿瘤、镇痛、抗心律失常、平喘、镇咳、杀菌等作用， 。生物碱含量的多少是评价苦参药材质量好坏的重要指标之一。酸性染料比色法常用于制剂中生物碱的含量测定5 ，作者采用酸性染料比色法，以苦参碱为对照品，对不同产地来源的苦参中的总生物碱成分，进行了含量测定，建立了苦参药材中总生物碱含量的测定方法，为苦参药材的质量控制提供了科学依据。1 仪器与试药756PL（IV）紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司） ；PHS-4CT 型数字酸度计（上
6、海康仪仪器有限公司） 。苦参碱标准品（中国药品生物制品检定所） ，溴代麝香草酚蓝和其余试剂均为分析纯。2 方法与结果22.1 对照品溶液的制备准确称取苦参碱标准品适量，加 50%乙醇制备成浓度为 1 mg/mL 的对照品溶液，备用。2.2 标准曲线的绘制及测定方法将“2.1”项下苦参碱对照品溶液稀释至 20 g/mL，各准确量取 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于干燥的具塞三角瓶中，各加水至 5 mL，分别加入pH=7.6 缓冲液 5 mL,再依次精密加入 0.025%溴麝香草酚蓝标准液 1.0 mL，氯仿10.0 mL，振摇 1 min，倒入 50 mL 分液漏斗放置分层
7、，静置 1 h，分取氯仿层。用分光光度计扫描、测定，结果显示，苦参碱与溴代麝香草酚蓝形成的复合物在413 nm 波长处有最大吸收峰，故选择 413 nm 为测定波长。另以同法操作(不加苦参碱对照品溶液)的氯仿为空白在 413 nm 波长处测定吸收度。以浓度(C)为横坐标，吸收度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 C=5.362X-0.012(=0.9992)，结果表明，苦参碱检测浓度在 0.004 mg/mL0.02mgmL 范围与吸收度线性关系良好。2.3 稳定性实验取 20.0 g/mL 对照品溶液 3.0 mL 按 2.2 方法制备标准品供试液和空白对照液，在波长 413 nm 处
8、进行测定。并在室温下每隔 1 h 测定 1 次含量，连续测定 8 次，结果表明，待测液在 8 h 内稳定，其 RSD=0.47% (n=8) 。2.4 精密度实验取 20.0 g/mL 标准对照液 3.0 mL，按 2.2 下方法制备标准品供试液和空白对照液，在 413 nm 波长处测定，重复测定 5 次。结果 RSD=0.23%。 2.5 加样回收实验精密称取已知总生物碱含量的苦参药材 5 份，每份约 0.08 g，分别准确加入 28.5 g/mL 苦参碱对照液 1.6 mL，按 2.2 项制备样品供试液和空白对照液，在波长 413 nm 处测定。结果样品的平均回收率为 98.96 %，RS
9、D=1.59%(n=5)。表 1 中药材苦参含量测定结果批次产地总生物碱含量(mg/g)1 河北安国 1.03 2 安徽亳州 2.26 3 山西长治 1.892.6 苦参总生物碱的含量测定将三种不同产地来源的苦参药材粉碎后，分别精密称取干燥至恒重的通过60 目筛的生药粉 0.1550 g ,加 0.1%盐酸 10 mL,冷浸 4 h 后，超声提取 1 h，滤3过，滤液用 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节至中性，取调节至中性的滤液 5.0 mL 置分液漏斗中，依次精密加入 pH=7.6 缓冲溶液 5 mL、0.025%溴麝香草酚蓝标准液1.0 mL，氯仿 10.0 mL，振摇 1 min，放置分
10、层，静置 1 h，分取氯仿层。在 413 nm 波长处，以不加药材，同法操作的氯仿为空白，测定吸光度。将测得的吸光度值代入标准曲线可以计算求得苦参药材中生物碱的含量。3 讨论3.1 由于苦参药材含有的生物碱成分都易溶于酸水溶液，因此在药材含量测定中采用 0.1%盐酸作为提取液，冷浸结合超声提取的方法，可以保证生物碱成分的提取完全。3.2 本实验采用酸性染料比色法，是根据在一定 pH 介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，一些酸性染料在此条件下可解离成阴离子而与上述阳离子定量结合成有色络合物，可被有机溶剂定量提取的原理，用苦参碱作为标准物质在pH=7.60 的条件下与溴麝香草酚蓝定量显色，苦参药材
11、中的生物碱在此条件下凡能与溴麝香草酚蓝显色的均可被测出，从而求得相对总生物碱的含量。该法灵敏度高，结果稳定，操作简便，易于在生产单位，药材经营等基层单位推广应用，用于苦参药材的质量控制。3.3 溴麝香草酚蓝溶液浓度的选择，取溴麝香草酚蓝配制成0.010%、0.025%、0.050%、0.075%、0.100% 5 个不同浓度的溶液，取 1.0 mL 溴麝香草酚蓝显色剂，按 2.2 项下方法进行测量，结果表明显色剂的浓度对测定结果有干扰。在保证测定样品中苦参碱完全与显色剂结合的前提下，经筛选试验，最佳显色条件应为 0.025%的溴麝香草酚蓝标准液加 1 mL 进行显色。3.4. 在实验对新鲜配制
12、和放置 1 个月的显色剂对结果的影响进行了考察。样品按 2.2 项下方法分别加入两种显色剂进行测量，结果显示放置 1 个月的显色剂的测量结果明显偏小，说明显色剂放置一段时间后不稳定。所以，试验所用显色剂应在使用时新鲜配制。【参考文献】 李广勋中药药理与临床 第 1 版，天津：科技翻译出版公司，1992：6364. 李金陵，程爱民，荆宇红，等重要苦参抗肿瘤作用的实验研究J 中国肿瘤临床与康复，2002，9（2）：2829 仵文英，刘 硕，张抗怀，等酸性染料比色法测定苦参碱脂质体中苦参碱的含量.中国药房，2005，16（22）：17341735 朱治富，李国元，赵 成，等酸性染料比色法测定乌贝散中浙贝总生物碱的含量.安徽医药，2003，7 (3)：2224 刘 萍，辛 勋，马 汉离子对比色法测定元胡止痛片中总生物碱的含量.湖北医科大学学报，2000，21（3）：196198
