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1、动物细胞工程,单克隆抗体等,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,动物细胞工程常用的技术,单克隆抗体等,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,是其他动物细胞工程技术的基础。,动物细胞工程常用的技术,2.2.1动物细胞培养和核移植技术,一.动物细胞培养,1.动物细胞培养过程,1.动物细胞培养过程,胚胎或幼龄动物的组织器官,比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。,1.动物细胞培养过程,胚胎或幼龄动物的组织器官,剪碎,胰蛋白酶,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,1.动物细胞培
2、养过程,胚胎或幼龄动物的组织器官,剪碎,胰蛋白酶,动物细胞培养适宜的PH为7.27.4，此环境下胃蛋白酶（1.5）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。,胚胎或幼龄动物的组织器官,细胞悬液,剪碎,胰蛋白酶,1.动物细胞培养过程,细胞贴壁过程,2.,培养液,营养,温度、ph,气体,无菌、无毒环境,思考：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？,思考：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？,血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。有些氨基酸（必需氨基酸）动物细胞本身不能合成必须由培养液提供。 血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子。血清中还含有多种未知的活性物质，能促进细胞
3、的生长、增殖和贴附。 因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般须添加10%20%的血清。,3.有关概念:,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。,3.有关概念:,原代培养和传代培养,细胞悬浮液,10代细胞,50代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,多数组织细胞固定在表面生长和分裂,随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液
4、，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞癌变：50代以后，细胞可悬浮培养。,3. 有关概念:,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,4.植物组织培养和动物细胞培养的比较,5. 动物细胞培养技术的应用,分 类,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,分 类,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,细胞分化程度低，恢复全能性容易,分 类,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,细胞分化程度低，恢复全能性容易,细胞分化程度高，恢复全能性不容易,2
5、.2体细胞核移植的过程：,多莉羊的培育过程,卵细胞,A母绵羊,B母绵羊,乳腺细胞,细胞质,细胞核,细胞核移植,早期胚胎,卵裂,C母绵羊子宫,胚胎移植,多莉羊,分娩,妊娠,融合后的卵细胞,2.2体细胞核移植的过程：,请看教材P48图2-21,思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？,2.2体细胞核移植的过程：,请看教材P48图2-21,思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？,M中期卵母细胞,2.2体细胞核移植的过程：,请看教材P48图2-21,思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在
6、什么时期？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？,M中期卵母细胞,诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。,讨 论,1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？,讨 论,1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？,为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。,2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？,培养的动物细胞一般当传代至1050代左右时，部分细胞核型
7、可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。,2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？,3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？,3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？,绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。,此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的
8、一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。,体细胞核移植技术的应用前景：,体细胞核移植技术的应用前景：,1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的 进程,体细胞核移植技术的应用前景：,1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的 进程,2.保护濒危物种,体细胞核移植技术的应用前景：,1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的 进程,2.保护濒危物种,3.医药卫生领域生产医用蛋白质及组织 器官的移植,体细胞核移植技术的应用前景：,1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的 进程,2.保护濒危物种,3.医药卫生领域生产医用蛋白质及组织 器官的移植,4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究 疾病的发展过程和治疗疾病,
