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1、血液细胞分析仪 基础知识讲座,1,.,.,血液细胞分析仪原理与关键技术 讲座大纲,血液检验的地位。 血液的常识。 血细胞分析仪的知识。 血液细胞分析仪示例。 血液细胞分析仪的展望,本次讲座重点内容,1. 血液细胞分析仪的基本原理 2. 白细胞的分类 3. 如何保证产品的质量 4. PE6000液路分析,血球仪的发展史,42年美国科学家库尔特发明了用电阻法计数粒子的专利技术。56年他又将这一技术应用于血液细胞计数获得成功。62年我国第一台血细胞计数仪在上海研制成功。60年代未血球仪除完成血球计数外增加了血红蛋白测试（HGB），70年代血小板计数问世。80年代开发了血细胞3分类、5分类。90年代开
2、发出可对网织红细胞计数的分析仪，同时5分类及幼稚细胞检测 更成熟，并发展成为血细胞分析流水线。,医学检验包括：临床生物化学、临床微生物学、临床免疫学、临床血液学和临床基础检验学（临床检验）。 临床检验学着重对人体血液、尿液、粪便及其它体液和分泌物进行检查。 血液检验是临床检验中最常用、最有效的基本内容。,血液检验的作用,对各种系统疾病的诊断和鉴别。 是诊断各种血液病的主要依据。,一. 血液的基本知识,血液的组成,血液的概况,血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。水分占91%92%。 理化特征：红色（血红蛋
3、白）不透明，含量占体重的7-9%，约5L。Ph值为7.357.45，比重为1.051.06，相对粘度为45，渗透压为2.63.9kPa。,血液的功能,通过循环系统与全身各个组织器官密切联系。 参与机体呼吸：携氧和排出二氧化碳。 运输：将营养物质运送到器官组织，将体内代谢废物运往肾、肺等器官排出体外。 防御：血液中白细胞和抗体参与机体抗感染和其他免疫反应。 调节：调节体液渗透压、酸碱平衡和体温平衡。,将正常血液抗凝离心后得到沉淀的血液。,液体的血浆占50-60% 血细胞占40-60%（白细胞、血小板、红细胞）。,血液的基本组成,血浆 白细胞和血小板 红细胞,血细胞的分类和形态,寿命：7天 120
4、天 8天 直径：60120fl 1201000fl 230fl (20um) (6.77.7um) (23um) 功能：抗感染，免疫 携氧，代谢产物 凝血功能,白细胞 红细胞 血小板,白细胞的种类,中性粒细胞（75%） 单核细胞（5%） 淋巴细胞（25%） 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 经过瑞氏染色后的各种白细胞,血细胞的发育过程,共同的母细胞：造血多能干细胞 单核细胞,原单核细胞,幼单核细胞,单核细胞,白细胞的发育,原始粒细胞,早幼粒细胞,嗜酸性中 幼粒细胞,嗜酸性晚 幼粒细胞,嗜酸性杆 状核,嗜酸性分叶核,嗜碱性中 幼粒细胞,嗜碱性晚 幼粒细胞,嗜碱性杆状核,嗜碱性分叶核,中性中 幼粒细胞,
5、中性晚 幼粒细胞,中性杆状核,中性份叶核,红细胞的发育,原红细胞 早幼红细胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成熟红细胞,血细胞分析仪的知识,手工法检验的过程,1、细胞计数（红细胞、白细胞、血小板等血细胞的镜下计数） 2、定量血红蛋白 3、白细胞分类（瑞氏染色） 4、其它：血细胞比积、红细胞形态、嗜酸球计数等,血球仪发展,50年代80年代（半自动）：需将样本经机外稀释后才能检测，易受干扰，随机误差也大。 80年代后（全自动）：血液直接被吸入血液细胞分析仪后，在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测，有较高的精确度和准确性。,血球仪发展,近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、涂片机、染片机、网织红
6、细胞计数仪串联在一起。自动加样系统和真空采血管的应用，避免实验室的随机误差，提高工作效率，避免实验环节造成的血行感染，成为仪器发展和使用的潮流。,血细胞分析仪的发展,50年代，库尔特发明电阻抗法 库尔特原理（电阻抗法）：根据血细胞是不良导体的性质，它通过微孔时就引起电阻的变化，电信号的变化被检测出来。,血细胞分析仪的现况,国内： 二级医院以上，全自动三分类 二级医院以下，二分类或三分类或没有 国外：全自动五分类，应用其它新技术，可检测幼稚血细胞。,手工法 血细胞分析仪,手工法 操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实验结果的精确性、准确性差。,血细胞
7、分析仪 测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、高效。为临床提供更多有用的实验数据。,工作原理,细胞分析原理：阻抗法 血红蛋白测量:光电比色法 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法。 其它参数：通过计算机内换算,白细胞分析原理,白细胞分析原理,加溶血素后，白细胞大小分布如下： 第一群：小细胞区（3590fl） 淋巴细胞 第二群：中间细胞（90160fl） 嗜碱性、嗜酸性、单核 第三群：大细胞区（160fl以上） 中性粒细胞,血细胞分析原理 血小板分析原理,阻抗法,电阻阻抗法计数原理,血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件-阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导
8、电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。,液路的计数实验,二. 血球仪的三分类,2,白细胞的三分类,第一类（3590fL）：淋巴细胞 第二类（90160fL）：嗜碱性、嗜酸性、
9、单核 第三类（160fL）：中性粒细胞,白细胞直方图,血液细胞分析仪将白细胞按体积大小（电压幅值的高低）从35450fL分为256个通道，每个通道1.64fL，细胞按大小放在不同的通道中，得到白细胞的直方图。 第一群（3590fL）：淋巴细胞 第二群（90160fL）：单核细胞（中间细胞） 第三群（160fL）：中性粒细胞（大细胞）,WBC直方图,*各种报警符号,RBC直方图,PLT直方图,氰化高铁血红蛋白(HiCN) 测定法,红细胞溶解后，血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白（Hi），再与CN根结合生成稳定棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm有最大吸收峰。 HiCN法具有操作简单
10、，显色快且稳定，直接定值等优点。 缺点：氰化物有剧毒(氰化钾） 无氰溶血素：我公司已于03年研制成功，现已投入批量生产。,血细胞分析的过程,标本的采集和运输。 稀释标本或用全血上机分析。 检验者对结果的判断和分析。 编辑或修改病人报告。 打印报告。,重做,注意事项,保证采样的规范性。 试剂对实验的影响。（应尽量采用原装试剂和溶血素） 操作的影响,标准物混匀,样品的混匀,三. 血球仪的质量保证,质控物（Quality Control）,血球产品“质控物”是用来标定出厂仪器的“标准”，也是医院用来定期效准仪器的“标准”。目前使用的“质控物”大多是进口产品，在“质控物”包装盒中供应商会提供一个参考“
11、靶值”。 由于不同种类的仪器有其差易，供应商会提供的“靶值”仅供参考。生产商必须测定出与自己生产的仪器相符合的“靶值”供生产作标定用。,质控物（Quality Control）,用途：用于对血液细胞分析仪的质量控制，以保证仪器测定结果的准确性。 用法：与真正血样的操作方式相同，用血液细胞分析仪对质控物进行检验，通过分析测量质控物所得到的数值来评估仪器的准确性。 试剂成分：稳定的人类红血球，生物模拟血小板成分和固化红细胞（用于模拟白血球），以及含防腐剂的介质。,溯源,“溯源”就是找一台溯源标准机（称靶机），目前只有被检验行业公认的“库尔特”和“东亚”两家公司销售出的血球仪（它一定是被定期效准过）
12、。,参数转移（一）,首先准备一台被检产品的“标准机” 取3050只新鲜血，到选中“靶机”上测试，将测试报告连同血样在2小时内送到被检产品的“标准机”进行测试 将测试数据分成35组（每10只为一组） 统计各组在“溯源”的标准机上测试的各组各参数的均值，计算出总均值，例A,参数转移（二）,统计各组在被检产品的标准机上测试的各组各参数的均值，计算出总均值，例B 计算血样转移参数K1（K1=A/B） 将质控物到被检产品的标准机上测试35组，统计均值，例C 计算质控转移参数K2（K2=B/C）,计算靶值,根据质控靶值、K1和K2计算出该批质控的靶值，提供给生产定标。 每批质控到后都必须这样确定靶值。 定
13、靶值过程是一个精细的工作，一般由专人负责。 定靶值过程接触新鲜血，要特别提醒，注意事项！,定标,1、准备：定标液 （质控液） 本底测试通过 确认重复性好（最少3次） 2、标定过程：设好进血模式 手工法： 新系数=目前系数标定液参考值/ 测量平均值 自动定标：仪器自动换算新的系数。,仪器的定标和质量控制,校准物溯源： 定标：维持仪器的准确性 质控：检测可能存在的系统误差，保证重复性。 （对操作者的理论及操作水平有较高要求）,血细胞分析仪测试参数,WBC白细胞数目：4.0-10.0 X109/L RBC 红细胞数目：3.5-5.50 X1012/L PLT 血小板数目：100-300 X109/L
14、 HGB 血红蛋白：110-160 g/L Lymph# 淋巴细胞数目：0.6-4.1 X109/L Mid# 中间细胞数目：0.1-1.8 X109/L Gran# 粒细胞数目：2.0-7.8 X109/L Lymph% 淋巴细胞百分比：20.0-40.0% Mid% 中间细胞百分比：1.0-15.0%,Gran% 粒细胞百分比：50.0-70.0% MCHC 平均红细胞血红蛋白浓度：320-360 g/L MCV 平均红细胞体积：80.0-99.0fL MCH 平均红细胞血红蛋白：26.0-32.0pg RDW-CV 红细胞分布宽度变异系数：11.5-14.5% RDW-SD 红细胞分布宽
15、度标准差：35.0-56.0fL HCT 红细胞压积：36.0-48.0 % MPV 平均血小板体积：7.4-10.4 fL PDW 血小板分布宽度：15.0-17.0% PCT 血小板压积：0.108-0.282 %,临床应用价值,一、诊断临床疾病 WBC HGB和RBC PLT 二、常规检查 判断身体的健康情况和免疫能力,临床应用,血细胞参数的临床意义,红细胞计数： 1. 生理变异：随年龄和性别不同有差异。 新生婴儿、位处高原、情绪激动可使红细胞增加。 2. 病理意义：先天性心脏病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性缺氧可刺激红细胞生成引起红细胞增加。严重呕吐、腹泻等引起脱水时，血液浓缩，红细胞相对增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障碍等引起的贫血时，红细胞数减少。 白细胞计数： 1. 生理变异：随年龄不同时间不同，季节不同，变异较大。早上低、下午高，饭前较饭后低，冬季较夏季高，激烈运动及体力劳动都可使白细胞数增多。 2.病理意义：急性化脓性感染，如脓肿、扁桃体炎、肺炎、阑尾炎 、脑膜炎、败血症等白细胞数增多。外烧伤，手术后，尿毒症等也会增高。 障碍性贫血，部分急性白血病等造血干细胞疾病，某些传染性疾病如伤寒、黑热病、流感、传染性肝炎等白细胞数减少。,血小板计数： 1. 生理变异：健康人血小
