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1、药品微生物检验技术基础操作规范,2010年06月,微生物检验是一门微生物应用技术，也是一门综合的专业技术。它包括的范围非常广泛；基本分为；无菌技术和微生物检验技术两大类。,一、无菌技术,1、 无菌技术概念 2、无菌环境 无菌室 无菌器材,3、无菌操作,无菌操作一般是指在无菌环境条件下，使用无菌器材进行检验，可保证检验物品不被二次污染、保证试验结果的真实性及检验人员的安全。无菌操作涉及的方面很广，现简述如下：,试验前准备,消毒(工作台面和地面) 进行空间灭菌处理(开启净化系统和紫外线灯 试验器具与供试品进入无菌室(通过物流) 操作人员进入第一缓冲间(洗手、消毒液消毒手) 操作人员进入第二缓冲间(
2、穿戴无菌工作服、鞋、帽、口罩) 操作人员进入无菌室 点燃酒精灯，消毒液的棉球消毒手 进行试验操作。,检验操作规程,试验全过程应在近火焰处操作，动作要轻。 标记 使用接种环（针），灼烧灭菌。 用吸管吸取供试液或培养液等，用橡胶乳头吸取。 用过的玻璃器皿应立即放入消毒液缸（桶）内进行灭菌。 用注射器吸取供试品或培养物时，注射器内应无空气，从密封容器内抽取液体时，应通过火焰注入无菌空气。 在开启菌种管或其他供试品安瓿之前，应用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器。刻痕用的砂轮、锯刀也应消毒，截断时要防止污染，安瓿切口通过火焰灭菌。,在接种霉菌、放线菌时，应在铺有浸过消毒液的湿纱布上操作，以防孢子散落传播。 试
3、验时使用的培养皿打开盖时开口朝向火焰，不得将盖放工作台上，拔出玻璃容器塞子时应用小指夹住塞子拔出，不得将塞子放在工作台上，以免造成污染。 在实验过程中观察平板培养物时，一般不宜开盖观。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集实验时，在近火焰处操作，平皿盖可适当开启（45），开口朝向火焰，挑取菌落。 在涂片、染色时应使用夹子夹持载玻片，切勿用手直接拿载玻片，用过的玻载片和盖玻片应置消毒液中消毒后，洗刷清洁的器皿经消毒后再洗刷，放置固定处，备用。,二、微生物检验操作技术,接种、分离、培养是微生物检验工作中应用最多的基本操作技术。,1、接种技术,接种方法有多种，根据接种的菌株不同所使用的培养基也不同，
4、接种时经常使用接种环、接种针、无菌吸管或无菌注射器等。,接种方法 斜面培养基接种法 适用于纯培养、扩大培养及短时间保存菌种。,2、分离技术,使用平板培养基进行分离达到分离出单个菌落的目的，以供微生物的鉴别、纯菌的保留，分离的方法有多种，常用的方法如下： 划线分离法 倾注分离法 涂布分离法,3、培养方法,细菌培养，要掌握温度、湿度、时间、环境等因素，中国药典2010版规定微生物限度检验细菌培养温度为3035，此温度适于中温菌生长，某些高温菌在该温度下也可以生长。药品污染的控制菌多是中温菌。根据不同菌株及检验目的选择不同的培养时间。根据细菌对环境要求不同常用培养方法如下：,需氧培养法 此为最常用的
5、培养方法，适于需氧菌和兼性厌氧菌的培养。 厌氧培养法 厌氧菌的培养，必须在无氧的环境中进。 厌氧培养箱法、抽气换气法、厌氧缸法、厌氧培养罐、厌氧袋 。,微需氧培养法 有些细菌为微需氧菌在微需氧环境（502、10CO2、85N2）生长良好，微需氧培养法常用的有以下几种： 混合气体法、气袋法、双平板法、烛缸法,微生物限度检查法,供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及细菌、霉菌及酵母菌计数方法应尽量选择微生物限度检查法中操作简便、快速的方法，且应避免损伤供试品中污染的微生物。对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。,供试液的制备,根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。,1.液体供试品 2.固体、半固体或黏稠性供试品 3.需用特殊供试液制备方法的供试品 非水溶性供试品 膜剂供试品 肠溶及结肠溶制剂供试品 气雾剂、喷雾剂供试品 贴剂供试品 具抑菌活性的供试品,供试品检查,培养基稀释法 离心沉淀法 薄膜过滤法 中和法,白色念珠菌检验方法 抑菌剂效力检查法,谢谢大家,
