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1、金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌的生物学特性,一、形态与染色 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串状。 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。革兰氏染色阳性。,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片,金黄色葡萄球菌的透射电镜照片,金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片,二 培养特性： （1）营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37，最适生长pH 7.4。 （2）平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。 （3）有高度耐盐性，可在10- 15% NaCl肉汤中生长。,培养,生物学性状,金黄色葡萄球
2、菌,表皮葡萄球菌,普通平板上,在普通平板上的菌落特征,在血平板上的菌落特征,菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。,在Baird-Parker 平板上的菌落特征,Baird-Parker培养基中含卵黄亚碲酸钾，可抑制大多数细菌繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌生长。 菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。,3种葡萄球菌鉴别的主要性状,1.可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，V-P反应弱阳性。 2.许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 3.具
3、有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。,三 、生化特性,四、抗原种类和血清学分型,金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。多糖抗原有特异性。 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。,五、致病物质及致病性,外毒素，分、五种. 对人类在致病作用的主要是溶血素。它是一种“攻击因子”，化学成分为蛋白质，分子量约为30000，不耐热，6530分钟即可破坏。如将-溶血素注入动物皮内，能引起皮肤坏死，如静脉注射，则导致动物迅速死亡。溶血素还能使小血管收缩，导致局部缺血和坏死，并
4、能引起平滑肌痉挛。溶血素是一种外毒素，具有良好的抗原性，经甲醛处理可制成类毒素。,1.葡萄球菌溶血素（Staphyolysin）,2.杀白细胞毒素（Leukocidin） 可破坏人的白细胞和巨噬细胞,3.肠毒素 金黄色葡萄球菌肠毒素主是由血浆凝固酶或耐热核酸酶阳性菌株所产生的一类结构相关、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质。50%以上的金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，并且一个菌株可以产生2种或2种以上的肠毒素。 目前，在近18个种和亚种的金黄色葡萄球菌中，有6种为凝固酶阳性，这6种即为与食品有关的重要菌种。迄今从血清型上已被鉴定的肠毒素血清型有10种：A、B、C、D、E、G、H、I、J、K型，其中
5、C型抗原又根据等电点的不同分为3个亚型(Cl、C2、C3),肠毒素是一种可溶性蛋白质，耐热，经100煮沸30分钟不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响（破坏食物中存在的肠毒素须加热至100，并持续2h），且具有“超抗原“(superantigen)特性 ，故误食污染肠毒素的食物后，在肠道作用于内脂神经受体，传入中枢，刺激呕吐中枢，引起呕吐，并产生急性胃肠炎症状。,4.表皮溶解毒素（Epidermolytic toxin） 表皮溶解毒素也称表皮剥脱毒素（Exfoliatin)，可引起人类或新生小鼠的表皮剥脱性病变、烫伤样皮肤综合征（剥脱性皮炎），多见于新生儿、婴幼儿及免疫功能低下者。它主要是由噬菌体型金
6、葡菌产生的一种蛋白质，分子量24000，具有抗原性，可被甲醛脱毒成类毒素。,致病性与免疫性,烫伤样皮肤综合症,5.中毒性休克综合症毒素-（Toxic shock syndrome toxin-1,TTST-1） 系噬菌体群金黄色葡萄球菌产生。是极强的致病因子，可引起发热，增加对内毒素的敏感性，增强毛细血管通透性，引起血管紊乱而导致休克，多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合症。它们在介导感染性休克及器官损害中可能具有一定意义。,6.血浆凝固酶（Coagulase） 血浆凝固酶是能使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，致病菌株多能产生，常作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要标志。,
7、凝固酶有两种：一种是分泌至菌体外的，称为游离凝固酶（Free coagulase），为蛋白质。作用类似凝血酶原物质，可被人或兔血浆中的协同因子(Cofactor)激活变成凝血酶样物质后，使液态的纤维蛋白原变成固态的纤维蛋白，从而使血浆凝固。另一种凝固酶结合于菌体表面并不释放，称为结合凝固酶(Bound coagulase)或凝聚因子(Chumping factor)，在该菌株的表面起纤维蛋白原的特异受体作用，细菌混悬于人或兔血浆中时，纤维蛋白原与菌体受体交联而使细菌凝聚。,凝固酶和葡萄球菌的毒力关系密切。 * 凝固酶阳性菌株进入机体后，使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面，阻碍体内吞噬细胞的
8、吞噬，即使被吞噬后，也不易被杀死。 * 同时，凝固酶集聚在菌体四周，亦能保护病菌不受血清中杀菌物质的作用。 * 凝固酶具有免疫原性，刺激机体产生的抗体对凝固酶阳性的细菌感染有一定的保护作用。慢性感染患者血清可有凝固酶抗体的存在。,7.葡激酶（Staphylokinase） 亦称葡萄球菌溶纤维蛋白酶（Staphylococcal fibrinolysin） 溶纤维蛋白酶是细菌侵袭性酶类的一种，该酶能使凝固的纤维蛋白溶解，有利于细菌在体内的扩散。乙型溶血性链球菌等也可以产生溶纤维蛋白酶。,8.透明质酸酶(Hyaluronidase) 透明质酸酶也是细菌侵袭性酶类的一种，金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链
9、球菌和产气荚膜杆菌均可产生。该酶可水解机体结缔组织中的基质透明质酸，有利于细菌在组织内扩散，所以也叫扩散因子。,9.耐热核酸酶 (Heat-stable nuclease) 金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶（DNA酶）能耐受高温，可用作鉴定金黄色葡萄球菌的依据。该酶能分解脓液中粘稠的DNA，使脓液变得稀薄，利于细菌在体内的扩散及毒素的吸收。很多人利用耐热核酸酶试验来快速检测金黄色葡萄球菌,10.其他酶 -明胶酶 -脂酶 -肽酶等。,样品制备 稀释、接种胰蛋白胨大豆肉汤 划线接种于琼脂平板 挑取菌落,移种到肉汤培养基中培养 凝固酶试验 对可疑结果进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验，如耐热核酸酶
10、试验等加以证实。 根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌 的MPN/g (ml)。,六、 金黄色葡萄球菌的检验方法,GB4789.10-2010,血平板的制作,增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37C培养24小时。 金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。 在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带 。,血浆凝固酶试验,吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置361培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，
11、即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。,动物试验 聚合酶链式反应（ PCR） 免疫血清学方法 免疫双扩法(DD）、 反向被动胶乳凝集(RPLA)、 反向被动血凝(RPHA)酶联免疫吸附 固相放射免疫技术(SPRIA)、 免疫印迹技术（Immunobloting) 酶联免疫吸附法(ELISA) 生物传感器技术 超抗原技术等。,金黄色葡萄球菌肠毒素的检测,其中以反向被动胶乳凝集(RPLA)和反向被动血凝(RPHA)酶联免疫吸附试验为主，也有用亲和素-生物素乳胶凝集的方法和放射免疫试验以及表面等离子体谐振技术（Surface Plasmon Resonesonance ,
12、SPR）,PCR法检测的结果不一定能够完全反应体内的生物学效应 DD法所用仪器昂贵，尤其是存在放射性污染，也不易推广 免疫印迹和RPLA受非特异性干扰易产生假阳性结果 ELISA法稳定性较差,各种方法的局限性,金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒比例约为33%，加拿大则更多(45%)，某些欧洲国家如匈牙利、芬兰等占50以上。我国每年由金黄色葡萄球菌所引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的50，且近年来发现葡萄球菌几乎都对青霉素产生抗性，特别是耐甲氧西林耐药株大量出现，已与肝炎、艾滋病等一起统称为世界上三大难治传染性顽症。,金葡萄球
13、菌肠毒素中毒,肠毒素形成条件,存放温度，在37内，温度越高，产毒时间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。,主要症状为腹泻、反复呕吐等急性胃肠炎症状。儿童对肠毒素比成人敏感，因此发病率更高，病情也更重。另外，金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。,中毒症状,食品被金葡萄球菌污染后，在适宜条件下迅速繁殖，在繁殖过程中分泌到菌细胞外的肠毒素会引起中毒。肠毒素作用于迷走神经的内脏分枝而致呕吐,作用于肠道使水分的分泌与吸收失去平
14、衡而致腹泻。在一般烹调温度下，食物中如有肠毒素存在，就能引起食物中毒。A型肠毒素毒力最强，摄入1g即能引起中毒，在葡萄球菌毒素中毒中最为多见。各型肠毒素引起的中毒症状基本相同。,中毒机制（毒素型食物中毒）,在我国主要引起中毒的食品有：奶、肉、蛋、鱼类及其制品等各种动物性食品。糯米凉糕、凉粉、剩饭和米酒等也曾引起过中毒。,引起中毒的食品,引起葡萄球菌肠毒素中毒的食品必须具备以下条件： (1)食物污染大量产肠毒素的葡萄球菌； (2)污染后的食品放置适合产毒的温度； (3)有足够的潜伏期； (4)食物的成分和性质适于细菌生长繁殖和产毒。,中毒条件,污染的控制,防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。,污染的控制,防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 低温、通风贮藏食物,Thanks!,
