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1、第一研究室2010年工作汇报,2011年1月18日,一、治疗用人源化单抗平台简介,1.建立自主化的从靶抗原到可开发的人源化抗体 平台 2.将待开发的候选抗体放大规模产业化,总体目标：,治疗性单抗的发展前景,治疗性单抗研究是21世纪生物学领域最为热门的研究方向之一，具有很高的壁垒性。仿制药虽能占一定市场份额，但最丰厚的盈利仍来自于自主创新药，最终的竞争力也来自于自主创新。 2. 抗体市场占全球生物制品销售额1/3以上，并且年均复合增长率超过40%。 3. 我国的单抗市场目前仍处于起步阶段，未来发展空间巨大中生集团作为国内最大国有生物制品企业应该有所作为。,2019/2/25,3,为什么要做原创药
2、? bio-better (更好) 在专利过期前能分得市场,为什么要做原创药?,Genentech, a Phase II (2010) in women with early-stage, HER2-positive breast cancer. pertuzumab +Herceptin (trastuzumab) + chemotherapy (docetaxel) complete tumor disappearance (pathological complete response rate, pCR, of 45.8 percent) Herceptin plus docetaxe
3、l (pCR of 29.0 percent), p=0.014.,人源化单抗产品流程,SIBP,国际新上市单抗（专利期有效期20年）,单抗制备、筛选 以及人源化,细胞稳定表达株 生产工艺研究,临床研究,临床前研究,生产上市,抗体序列申请专利,2-3年,2-3年,3-4年,治疗性单抗的开发可分为二部分: 前期的单抗筛选,即任何能拿到有效的人源化或人源单抗,它的独特序列(CDR区域)为专利,通常保护二十年 拿到CDR后的后期开发,即如何将抗体在 CHO细胞中稳定高效表达,经大规模细胞培养后如何纯化抗体并满足质控要求.,单抗列表,靶抗原有限，全世界各大制药公司纷纷加入！,人源化或人源单抗筛选途径比
4、较: 全人源单抗理论上优于人源化单抗,但必须具备 a.很优质的大的嗜菌体库; b.或优质的免疫球蛋白文库; c.或转基因小鼠(基本被Amgen公司控制) 单抗人源化单抗尽管有些免疫原性,但: a.通常情况下能筛选到抗体; b. 需要CDR移植技术,治疗性单抗的主要应用类型: 1.免疫抑制剂: CD3;CD25;CD4 2.肿瘤:CD20:CD22;Her1;Her2;VEGF 3.抗感染或毒素:RSV;RV;TT 4.抑制配体:TNF;RANKL 人源化单抗对类型1.2.3.均可适用.,人源单抗制备流程,制备纯化抗原,鼠源单抗制备,鼠单抗可变区PCR,嵌和抗体表达（CHO）,嵌和抗体人源化 （
5、得到有效序列）亲和力、表达量,建立高表达稳定株,大规模培养,工艺开发,申报临床前研究 （中试生产）,抗体体外亲和力成熟,重组蛋白（抗原及受体）,鼠抗筛选,亲和力 表位 体外功能 动物模型,抗VEGF单抗,A,B,C,D,图A: Tris-Hcl buffer组，鸡胚尿囊膜血管正常生长； 图B: 血管内皮生长因子VEGF165 (400ng)组，鸡胚尿囊膜上的血管明显扩增，血管渗透性强； 图C: VEGF165(400ng) 与 MAb 61(16g)混合组，VEGF165的促血管生长及血渗透作用被抑制； 图D: VEGF165(400ng) 和 VEGF 不相关鼠源同型对照单抗 MAb con
6、trol (16g) 组， 对照抗体对 血管的生长和渗透作用无抑制作用,鸡胚尿囊膜实验,用A673肿瘤细胞在裸鼠背部皮下接种建立肿瘤模型，肿瘤平均大小约100mm3时裸鼠随 机分为PBS、鼠源同型对照单抗MAb control及MAb 61三组，每组8只裸鼠，每只裸鼠每次腹腔注射100ug单抗或等体积PBS，一周两次，治疗5次。 图A：PBS对照组； 图B：MAb control对照组； 图C：MAb 61治疗组,抗VEGF单抗肿瘤模型,治疗结束时MAb 61组小鼠肿瘤体积相比PBS组（P0.001）及MAb control 组（P0.001）均有显著性差异，PBS组与MAb control组
7、（P0.05）无明显差异； MAb 61组小鼠肿瘤重量相比PBS组（P0.05）及MAb control组（P0.05）均有显著性差异，PBS组与MAb control组（P0.05）无明显差异； 肿瘤体积和重量为meanss.e.m,抗VEGF单抗肿瘤模型,基于细胞平台 Hotspot位点突变 高效率,SIBP,抗VEGF抗体体外亲和力成熟,抗TT单抗(抗破伤风),抗体中和活性测定,药典：抗TT人源抗体蛋白含量不高于180g/L，效价不低于100UI/ml,EGFR胞外区与HGH融合蛋白的纯化,目的条带,12%SDS-PAGE,12%SDS-PAGE,lane1、2、3均为为EGFR胞外区与
8、HGH融合蛋白条带， M为12%SDS-PAGE蛋白Maker条带.,1 2 3 M,1 2 3 M,抗EGFR抗体亲和力及结构域分析：,抗EGFR抗体与A431细胞结合实验:,4,243,342,361,50,125,87,212,PBS,抗EGFR抗体细胞增殖抑制实验：,抗EGFR抗体,细胞生长抑制率(%),抗EGFR单抗肿瘤抑制实验,SIBP,适应症：头颈部癌、结肠癌、宫颈癌、膀胱癌等,TT8D9为白喉毒素对照鼠源抗体,87、342为抗EGFR 抗体。每只裸鼠打2X106个A431细胞， 7天后开始治疗，抗体用量均为：1mg/只,每隔三天治疗一次，每组裸鼠只。,抗EGFR单抗肿瘤抑制实验
9、,抗EGFR单抗肿瘤抑制实验,抗EGFR单抗肿瘤抑制实验,抗EGFR单抗肿瘤抑制实验,抗EGFR单抗肿瘤抑制实验,总结,结论,1.已经建立了从重组抗原到人源化单抗的平台 2.筛选到几个有开发价值的抗体,讨论及打算,CHO-DG44无血清培养稳定表达重组抗体 高表达稳定细胞株 细胞大规模培养工艺 抗体纯化工艺 申报临床前研究,以抗TT单抗项目带动后续平台建设？,药典：抗TT人源抗体蛋白含量不高于180g/L，效价不低于100UI/ml,致谢,单抗制备:祝婧烨 黄海武 重组抗原表达,制备及动物模型:吴丽娜,陆瑾 Anti-TT,人源化工作:于汉卿 Anti-VEGF,亲和力成熟:梁红远 Anti-IgE,RANKL:陈家琪 Anti-CD40:张燕燕 Anti-Her1,her2:郭锦林、牛曲美,谢谢！,
