《微生物标本采集要求ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物标本采集要求ppt课件（94页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、临床微生物标本采集要求,“超级病菌”变种袭击英国医院,2006年12月18 据英国媒体 报道，俗称“超级病菌”MRSA的一个变种今年袭击了英国一家医院，已造成8人感染，其中2人死亡 2004年受感染死亡的英国士兵坎贝，18岁，感染后48h死亡,CA-MRSA,阿什顿邦兹，07年10月4日感到身体一侧疼痛，就到当地一家医院就诊。 10月17日死亡。,美国弗吉尼亚州贝德福德一名17岁高中生就因感染MRSA而死亡，21所学校停课 。,Zeller JL, et al. JAMA patient page. MRSA infections JAMA. 2007 Oct 17;298(15):1826.
2、,世界人口死因（1998年） 感染性疾病：25(1330万/5390万）,抗生素时代，感染仍是 人类健康的主要“杀手”,“君子慎始，差之毫厘，谬以千里” 礼记,微生物检验结果是临床医师在诊疗感染症过程中所需要的重要信息，临床医师可以根据这些检验结果及病人的临床情况来区分疾病的不同阶段，观察疾病的变化，判断预后或观察疗效。所以分析前阶段样本的质量保证是直接关系到检验结果能否真实客观地反应患者当前病情的一个重要环节。,正确的采取、处理与运送本是临床微生物检验成功与直接关系检验结果的基本关键。,如果标本采集不当，即使有经验的实验室工作者及最好的仪器设备也难以弥补在采集标本时引入的误差和错误。标本采取
3、与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不符合要求，则微生物培养的结果毫无意义。故病人准备和标本采集是检验质量保证的重要环节之一。,正确的采取、处理与运送本是临床微生物检验成功与直接关系检验结果的基本关键。,由于病人受到各种内在和外界的影响，可使检验结果产生或大或小的误差，为此检验前病人须作适当准备，可减少随机分析误差。如标本采取或处理失当，造成污染，甚至使检验结果给临床以误导，延误对患者的正确治疗造成严重后果。标本保存和运送是检验质量保证的重要环节之一。由于采集的标本受各种因素的影响，可能使检验结果受或大或小的误差，因此必须正确掌握标本保存和运送。,“
4、正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”,著名的临床微生物检验专著Manual of Clinical Microbiology 的主编Patrick Murray,标本采集和运送是 细菌培养成功的最最重要的关键,但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是: 临床医生最不能接受的问题:阳性率低,我们应该追求： “准确的病原学诊断” “针对性病原学治疗” 正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！,微生物让人类步步为营，,微生物样本采样基本原则,1.及时采集微生物标本作
5、病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检，甚至床旁接种尤其是厌氧培养 5.棉拭子标本宜用运送培养基 6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。 8.送检标本应注明来源和检验目的,我们可能每天都面临以下问题的挑战,同时做需氧血培养和厌氧血培养时血液先注入需氧瓶或厌氧瓶？ 脓标本有时涂片见到细菌为什么培养阴性？ 非上班时间需要做厌氧培养怎么办？ 明显细菌性脑膜炎为什么培养阴性？ 痰标本分离出4种细菌做哪一种细菌的药敏试验？ 数量很多的凝固酶阴性葡萄球菌在痰里分离出来是否要做药敏?,临床标本的分类,带菌体液 无
6、菌体液 痰 血液 咽拭子 脑脊液 尿液 关节腔积液 粪便 胸腹水 其他类别 其他类别,一、血培养操作规范,临床常见的采血指征,发热（38C）或低温（36C） 寒战 白细胞增多（计数大于10，000109/L，特别有“核左移” 未成熟的或杆状核的白细胞） 粒细胞减少（成熟的多核白细胞1000109/L） 血小板减少 皮肤粘膜出血 昏迷 ，休克 多器官衰竭 CRP/PCT升高,皮肤消毒程序，严格执行三步法:,1、用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上 2、用1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用60s，从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上，涂擦穿刺皮肤2遍，待干燥。 3、75%酒精
7、脱碘：用75%酒精由内向外方向涂抹去碘酒液 ，待酒精挥发干燥后采血。,培养瓶消毒程序,打开血培养瓶塑料盖用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞并擦干表面残余酒精消毒皮肤后用无菌注射器抽取血液从橡皮塞处注入血培养瓶内用75%酒精重新消毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖立即送检。,血培养标本的运送,采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室。 血培养瓶在采血接种后在室温不超过4 小时。 血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。,菌血症病人血中细菌浓度,成年病人: 链球菌心内膜炎 1 to 30 organisms/ml 葡萄球菌心内膜炎 1 to 20 organisms/ml 革兰氏阴性菌血症 少于 1 to
8、 10 organisms/ml 革兰氏阳性菌血症 1 to 300 organisms/ml 幼儿病人: 革兰氏阴性菌血症 5 to 1000 organisms/ml 75%幼儿菌血症病人血液有 100 organisms/ml Infect Dis Clinics N Amer 2001;15:1009 所以采血量一定要足够！,采血量,成人为810 ml,儿童15 ml 有人引述多篇文章指出:对成人每增加1ml 血量平均能提高阳性率3.2% 。,采血份数和采血时机,采血培养应该在使用抗生素之前进行 间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5小时采集血液，不知发热规律应在寒战或发热后
9、半小时后进行。 24小时内采集2-3份血培养 持续性菌血症：如急性心内膜炎、导管相关sepsis时需多次取血监测，捕捉指导治疗：特别是金葡菌时,建议,第一天 1-3套血，每套16-20ml 第二天 ,如无迹象有细菌生长 1-2套，每套16-20ml,血培养采血量、份数与阳性率,研究表明，当每套血培养采血20ml时 一套检出率：65% 二套检出率：80% 三套检出率：96% 目前的指南推荐采集23套血培养,特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议,(1) 可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎,应在不同部位采集2 3 份血标本。 (2) 不明原因发热,如隐性脓肿,伤寒热和
10、波浪热,先采集2 3 份血标本,24 36 h 后估计体温升高之前(通常在下午)再采集2 份以上。,特殊的全身性和局部感染患者 采血培养的建议,(3) 可疑菌血症或真菌菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,以获得罕见的或苛养的微生物。 (4) 可疑细菌性心内膜炎,在1 2 h 内采集3 份血标本,如果24 h 后阴性,再采集3 份以上的血标本。,采集部位,推荐从外周静脉采集血液标本。 不推荐动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大。 不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读提供解释。,血液细菌培养 合格的操
11、作,1 从静脉取血 2 不宜从静脉导管或静脉留置口取血 3 若从导管设施取血，须同时静脉取血，以求对比和解释，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 4 不推荐静脉血直接入瓶，不要和测血气及血沉的取血同时进行（或在先） 5 不主张换针头入瓶 6 有血的培养瓶不可放入冰箱和冻箱保存 7 建议至少一次做两瓶培养，一瓶需氧一瓶厌氧,瓶数及血量,结论1： 绝对不能只用一瓶 寒战升温之间应采血20毫升分装两个瓶内 先分配在需氧瓶10ml，然后剩余的入厌氧瓶内，因为真菌、绿脓杆菌、窄食单胞菌只长在需氧瓶内。 结论2：2-5天内不必重复取血 结论3：只有可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关sepsis时，才要
12、有间隔地(1h至24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗；特别是金葡菌时。,抽血量和体重的关系,真菌血培养,真菌血培养采用需氧血培养瓶采集标本。 采用中和/灭活抗菌药物的血培养瓶可提高真菌的检出率。 自动化血培养系统不能用于双相真菌的检测。,分枝杆菌血培养,必须采用特殊的商品化分枝杆菌血培养瓶。 所有培养基都必须孵育至少4周。,感染性细菌性心内膜炎,急性：在经验性抗生素用药前30min之内采集血培养。 亚急性：在30分钟至1小时之内连续抽取数套血培养。 最初采集3套血培养。 假如这些血培养在24小时之内结果是阴性的，再采集2套血培养，总共5套。,血液及骨髓标本采集运送的规范,1.采血时间：尽可能在
13、用抗生素前，心内膜炎例外。 2.采血量：采一次或采一瓶是错误的，至少应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少于16-20ml，先将10ml注入需氧瓶，再将剩余血采血注入厌氧瓶。 3.采血方法：不要与血气和血沉标本一起采血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采血。,血液及骨髓标本采集运送的规范,4.采血间隔：如第一次采集2套（4瓶）血培养标本，在以后的2-5天不必采血，但除外心内膜炎和导管相关性败血症。 5.儿童：采血量是总血量的1%。 6.延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱，放常温，尽早送往临床细菌室。 7.皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙
14、醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。,血培养假阳性的危害,1、增加患者抗生素用量，破坏其微生态环境 2、延长了住院天数 3、延误病情诊断 4、增加经济负担 防止皮肤寄生菌或环境微生物污染,二、泌尿标本采集的规范,尿液培养标本送检指征,1 有典型的尿路感染症状； 2 肉眼脓尿或血尿； 3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性； 4 不明原因的发热，无其他局部症状； 5 留置导尿管的病人出现发热； 6 膀胱排空功能受损； 7 泌尿系统疾病手术前。,您知道吗？,正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养最大的问题是杂菌污染。正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见的病源菌。因此要
15、作好尿液细菌学检查，首先应注意标本收集问题。,您知道吗？,尿液经尿道排出时会受到尿道内正常菌群的污染,但定量培养时计数不会超过103 CFU /m l, 泌尿系感染时定量培养在104 105 CFU /m l 。 另外,由于绝大多数的泌尿系感染是由肠杆菌科细菌引起,而此类细菌的硝酸盐还原实验为阳性,故可参考尿十项检查中的硝酸盐还原实验来推断是否有细菌感染。,尿培养样本采集方法,标本采集应力争在未使用抗生素之前注意避免消毒剂污染标本 1 清洁中段尿中段尿（晨尿最佳）约10 20ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。 2 耻骨上膀胱穿刺：评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法。 3 直接
16、导尿：可减污染，准确反映膀胱感染情况。 4 小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。,尿培养样本采集方法,5 留置导尿管收集尿液：穿刺导尿管吸取尿液，不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更换新尿管时留取尿标本。 6 集尿法：尿查抗酸杆菌时，留24小时尿液盛于洁净容器内，取其沉渣10mL送检。,泌尿标本采集的规范,1、采集后的标本应立即送检。标本采集后应立即送检，否则可暂存于4冰箱。 2、采集时间：多数药物从尿道排泄，所以不管用哪种方法都应在用药前采集。应采集早晨第一次的尿。 3、标本管不应含防腐剂和消毒剂。,泌尿标本采集的规范,4、采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲
