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1、双成药业 GMP管理文件 编码：SC-TP-017-02 文件名称生长抑素工艺规程编 制 者审 核 者批 准 者编制日期审核日期批准日期编制依据中华人民共和国药典2005年版药品生产质量管理规范1998年修订药品生产质量管理规范1998年修订药品注册批件2006S05219颁发部门质量管理部制作备份分发部门质量管理部、生产技术部 实施日期一、目的：本工艺规程是经过验证并对生长抑素的设计、生产、包装、标准及质量控制进行全面描述的基准性技术文件，是制定岗位SOP、批生产记录和批生产指令的重要依据。二、范围：本规程适用于生长抑素的生产和质量管理，以及相关物料的供应。三、职责：生产技术部和质量管理部对
2、本规程实施负责。四、依据：中华人民共和国药典2005年版药品生产质量管理规范1998修订药品注册批件2006S05219 五、目录1. 产品概述2. 制备方法3. 工艺流程4. 操作过程及工艺条件5. 原料质量标准6. 辅料质量标准7. 中间产品质量标准 8. 成品质量标准9. 质量监控10. 物料消耗定额11. 设备12. 技术安全及劳动保护13. 卫生14. 劳动组织与岗位定员、生产周期15. 技术经济指标的计算六、内容1 产品概述1.1通 用 名：生长抑素1.2英文名/拉丁名：Somatostatin 结 构 式：分子式：C76H104N18O19S2分子量：16381.3性 状：本品为
3、白色粉末1.4有 效 期：24个月1.5贮 藏：遮光，密封，2-8保存1.6包 装：PVC瓶1.7制 剂：注射用生长抑素1.8 批准文号：国药准字号H20066874 2.制备方法 生长抑素的制备是采用多肽固相合成技术，在树脂上按生长抑素的一级结构依次连接氨基酸，形成多肽，然后用三氟醋酸（TFA）将多肽从树脂上分离下来，得到二氢生长抑素，使用空气氧化法氧化得到生长抑素粗品，再采用高效液相色谱技术对进行分离纯化，最终得到纯度为98%以上的生长抑素。3三氟醋酸生长抑素工艺流程图原料 脱去树脂上N一端的Fmoc保护基因 激活下一个Fmoc保护氨基酸，进行偶联反应以上三步为一周期，重复13次 配液 去
4、保护 氨基酸活化偶联二氢生长抑素粗品 粗品乙醚沉淀切割十万级区空气氧化浓缩、冻干冷冻干燥 检验合格粗 品一般区粗品溶解 RP-HPLC纯化 检验合格 装格半成品RP-HPLC转化为醋酸盐浓 缩入库检验合格包 装冷冻干燥冷冻干燥4. 操作过程及工艺条件4.1合成4.1.1准备4.1.1.1 根据合成指令分别领取合成所需的原料、辅料、试剂等，核对原料、辅料、试剂的名称、批号、物料编码、规格，准确无误后方可领取。在物净间去除外包装，用75%乙醇擦拭后，经传递窗送至合成室。4.1.1.2 检查合成所需氮气是否已准备好，压力、阀门、管道状态是否正常。 4.1.1.3 按规定进行清场，将合成所需容器具清洗
5、干净，自然晾干后备用。 4.1.2 溶液的配制4.1.2.1 20%六氢吡啶（PIP）的配制：用量筒量取200ml六氢吡啶溶解于二甲基甲酰胺（DMF）中并定容至1000ml，将配好的试剂倒入指定的试剂瓶中，贴上标签。 4.1.2.2 40% DIEA溶液的配制：用量筒量取DIEA400ml，加入DCM 400ml，摇匀；加入DMF至1000ml，摇匀即得，将配好的试剂倒入指定的试剂瓶中，贴上标签。4.1.2.3 0.05mol/L 醋酸铵溶液的配制：称取7.7g醋酸铵，用去离子水溶解，定容至1000ml使成0.1mol/L 醋酸铵溶液，然后用去离子水稀释配制成0.05mol/L 醋酸铵溶液。4
6、.1.2.4 Kaiser检测试液的配制试液A：2.5茚三酮/丙酮（重量/体积）试液B：1克醋酸钙/50毫升醋酸/100毫升水4.1.2.5 将配制好的溶液倒入指定的试剂瓶中，帖好标签，填写配制记录。4.1.3 投料量的计算：4.1.3.1根据合成树脂的量以及树脂的取代值求出理论产量，以及各种氨基酸和其他试剂的用量。其中树脂载量与氨基酸的摩尔比= 1：3。4.1.3.2各个氨基酸投料量为：Fmoc-Aa用量(g)树脂质量树脂取代值Fmoc-Aa分子量摩尔比/1000；精确称量保护氨基酸，并做好记录。4.1.3.3 氨基酸：HBTU：DIEA的摩尔比=1：1：2。4.1.4 树脂的检测：取树脂1
7、030粒，加入一滴试液A，再加入一滴试液B，在70下加热5分钟，观察树脂的颜色。若结果为淡黄色或灰白色，则可用于合成反应；若结果不是淡黄色或灰白色，表明树脂不符合要求，不得使用。 4.1.5 按合成指令准确称量树脂倒入反应器中，将反应器接到合成仪正确位置。向反应器中加入适量的DMF（树脂质量/g2.5ml/g），树脂在其中浸泡1小时后，排空DMF。4.1.6 开启合成仪启动氨基酸连接程序，加入20%的PIP溶液适量（树脂质量/g2.5ml/g），室温搅拌反应30分钟。待去保护后，再取出少量树脂作Kaise检测，若结 果为蓝色，则进行下一步，否则需继续进行去保护直至Kaise检测的结果为蓝色为止
8、。 4.1.7 准确称取所需各种氨基酸、HBTU，用适量的DMF溶解后 （树脂质量/g2.5ml/g），再按规定量准确量取DIEA，加入反应器中，将反应器接到合成仪上。4.1.8 继续启动此程序，待连接反应一段时间后（例如0.5小时），取出少量树脂作Kaise检测。若Kaise检测为淡黄色或灰白色，则可进行下一步；若结果显蓝色，则需延长连接反应时间，直至Kaise检测结果为淡黄色或灰白色为止。4.1.9 待该步连接反应结束后，启动清洗程序，使用适量（树脂质量/g2.5ml/g）的DMF连续清洗树脂3次。重新启动该连接程序，连接下一个氨基酸，如此重复，直至氨基酸全部连接为止。 表1 保护氨基酸名
9、称及顺序序号弗马克保护氨基酸名称氨基酸顺序1Fmoc-Cys(Trt)-Wang 树脂12Fmoc-Ser(tBu)-OH23Fmoc-Thr(tBu)-OH3、54Fmoc-Phe-OH4、8、95Fmoc-Lys(Boc)-OH6、116Fmoc-Trp(Boc)-OH77Fmoc-Asn(Trt)-OH108Fmoc-Cys(Trt)-OH129Fmoc-Gly-OH1310Fmoc-Ala-OH144.2 切割4.2.1 将装有合成产物的容器置冰水浴中，配制TFA/EDT/水（95：2.5：2.5）的混合溶液适量（树脂质量/g10ml/g），加入含有合成产物的容器中，使得合成产物能够悬
10、浮在混合溶液中。4.2.2 浓缩： 常温下用磁力搅拌器搅拌2小时后使用砂芯漏斗抽滤，滤液旋转蒸发至约1/4体积（浓缩至出现白色沉淀为佳）。将浓缩后的滤液滴加到-10左右的冰乙醚中，乙醚的体积应约为滤液体积的10倍左右。.4.2.3 将上述产物在-20左右静置30分钟后取出，摇匀抽滤，其沉淀物即为二氢生长抑素三氟醋酸盐。将二氢生长抑素粗品置于真空干燥箱中减压干燥至恒重。4.2.4 氧化：将二氢生长抑素粗品溶解在0.05mol/L的醋酸铵缓冲液中（PH=6-7），得到10mg/ml的溶液，空气氧化24h。4.2.5 浓缩及冻干：将氧化液浓缩至1/10体积，冷冻干燥得到生长抑素粗品。取出称重，并做粗
11、肽含量检验。做好标识置冰箱内保存。4.3纯化 4.3.1 粗品溶解：准确称取所需的生长抑素粗品，倒入锥形瓶或烧杯中。4.3.2 按每0.5g粗品加入醋酸水溶液(1/3，v/v)10ml溶解，在磁力搅拌器上搅拌10分钟。经离心或过滤处理除去不溶物，得到澄清溶液。4.3.3 贴上标签，注明品名、批号、溶解日期、操作人等。4.3.4 纯化设备及条件：制备液相色谱仪：美国VARIAN公司色谱柱：C18（77mm25cm）流动相A：0.1TFA/10乙腈的水溶液流动相B：0.1TFA/90乙腈的水溶液洗脱梯度：（1）0-50min: 15-30流动相B； （2）50-60min: 30%-70流动相B；
12、 （3）60-63min: 70流动相B；（4）63-64min: 70%-15流动相B；（5）64-74min: 15流动相B。流速：90ml/min检测波长：215nm4.3.5 操作：按“SD-1型制备高效液相色谱仪标准操作规程”开机、进样。用适宜的容器接收相应吸收峰所代表的样品。4.3.6 浓缩：将纯化后的产品置旋转蒸发器中，在38-40下减压蒸发浓缩，浓缩体积至原体积的1/10。用直径为0.45m微孔滤膜过滤即得生长抑素三氟醋酸盐浓缩液。4.3.7冷冻干燥：将浓缩液置冻干盘中，在超低温冰箱下冷冻12小时以上，然后置冷冻干燥机中干燥48小时以上。4.3.8 将冻干所得的生长抑素三氟醋酸盐称重后，置
