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1、医学论文-索氏提取法提取白术内酯的工艺研究作者：卫修来，陈镇，夏泉，许杜娟【摘要】 目的建立白术内酯索氏提取的最佳工艺。方法采用正交设计优化的索氏提取工艺，以石油醚为提取溶剂，从白术(炒)中提取白术内酯，高效液相色谱法测定提取物中白术内酯的含量。结果采用索氏提取法提取白术（炒）中白术内酯的最佳工艺为白术（炒）的粒度为 80 目，加 120 ml 石油醚提取 12 h。结论所确定的炒白术中白术内酯提取工艺合理可行，值得进一步向工业化生产推广。 【关键词】 白术内酯 索氏提取 正交设计白术始载于神农本草经并列为上品，原名“术”，来源于菊科植物白术 Atractylodes macrocephala
2、 Koidz 干燥根，主产于浙江、安徽、湖北、湖南等省。其性味甘、苦、温，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效1。白术的主要化学成分为挥发油、内酯类化合物及多糖2。其中内酯类成分具有抗炎、抗肿瘤作用，该类成分还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的功能，尤以白术内酯作用明显3。本研究通过对白术内酯索氏提取工艺的最佳条件的研究，为今后进一步研究其药理作用提供实验基础。1 仪器与试药1.1 仪器索氏提取器（中国科学技术大学玻璃仪器厂）；XW-80 旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；TGL-16H 高速离心机（珠海黑马医学仪器有限公司）；硅胶 G 板，规格 510cm(青岛海洋化工厂)；Agil
3、ent 1100 系列高效液相色谱仪；Agilent chemstion 色谱工作站，RE-52 旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）；AB135-S 电子天平（瑞士 Mettler-Toledo 公司）。1.2 试药对照品白术内酯(butenolide ) （纯度98%，编号 1396-070212，产地：中药固体制剂制造技术国家工程研究中心）；白术（炒）购自安徽省国投药业，批号 071120，经安徽中医学院中药学与中药资源教研室刘守金教授鉴定为白术同属。石油醚、苯、醋酸乙酯等均为分析纯，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。2 方法与结果2.1 提取方法白术（炒）饮片 400 g，低温真空干燥并粉碎，分
4、别过60，80，100 目筛备用。分别按表 1 实验方案精密称取不同粒度的白术（炒）粉末 15 g 置索氏提取器中，加入规定量的石油醚，于水浴锅上提取，至规定时间后取提取液过滤，旋转蒸发仪浓缩至干，残渣加适量甲醇溶解并转移至 5 ml量瓶中，取提取液适量于离心机上离心，上清液作为供试品溶液。2.2 正交实验考察提取工艺根据预实验结果，选用影响提取效果的 3 个主要因素：粒度(A)、溶剂量(B)和提取时间(C)，每一个因素各选 3 个水平，制定因素水平表。见表 1。表 1 正交设计因素水平（略）2.3 TLC 定性鉴别分别取供试品溶液 19 号及对照品甲醇溶液（浓度为1mg/ml）各 2 l，分
5、别点于同一硅胶 G 板上，置展开槽展开，展开剂为石油醚苯醋酸乙酯=1521，展距为 9 cm，取出，烘干，喷以 10%硫酸乙醇置烤箱中，设定温度 90放置 30 min 后，于可见光及 365 nm 紫外灯下检视。2.4 HPLC 法测定白术（炒）中白术内酯的含量2.4.1 色谱条件 Dikma Kromasil C18(150 mm4.6 mm)色谱柱，以甲醇水6040 为流动相，流速为 1.0 ml/min，柱温为 30，检测波长为 220 nm，进样量为 10 l。2.4.2 对照品溶液的制备精密称取白术内酯1 mg，加甲醇溶解成 1 mg/ml 的储备液，精密吸取储备液适量，加甲醇稀释
6、成浓度为0.50，0.25，0.12，0.06，0.03，0.01 mg/ml 的溶液作为对照品溶液，照上述色谱条件下进样，以峰面积 Y 对质量浓度 X 绘制标准曲线，计算回归方程为Y28.931X48.38，r0.999 8。2.4.3 精密度实验取浓度为 0.03 mg/ml 对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样 5 次，计算白术内酯的峰面积 RSD 为 1.12%(n5)。2.4.4 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，每隔一定时间进样，测定峰面积。结果 24 h 内供试品峰面积的 RSD 为 0.29%(n6)，表明供试品溶液在 24 h 内基本稳定。2.4.5 重复性实验取同一批样品
7、6 份，分别按供试品溶液的制备方法进行提取、制备、测定。结果白术内酯含量的 RSD 为 1.04% ，表明方法的重复性良好。2.4.6 样品含量的测定取样品溶液 19 号各 100 l，分别加入 400 l的甲醇，用涡旋仪振动混合，照上述色谱条件下进样 10 l 进行分析，由回归面积计算供试品样品中白术内酯 I 的含量。对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图 2。2.4.7 含量测定结果根据测得的峰面积，代入回归方程，可计算出 19 号实验方法所得到的白术内酯的含量(mg)，进行数据处理分析见表 2。表 2 样品含量测定结果（略）极差 Rj 反映各因素对指标影响的程度，极差越大，影响程度越大。本实
8、验3 个因素排列顺序为 CAB，其中各因素水平分析结果为A：321；B：321；C：312，最佳处方应该为 A2B3C3。因此采用索氏提取法的最佳工艺为使用粒度 80 目的白术（炒），加 120 ml 石油醚回流提取 12 h 的提取效率较高。3 讨论作者于正交实验前进行了预实验，考察了提取方法对白术(炒)中白术内酯提取率和含量的影响，结果表明索氏提取法较乙醇回流提取法提取效果好，故本研究中采用索氏提取法。本研究对白术(炒)索氏提取 19 号实验方法所得成分进行 TLC 和紫外扫描分析，实验结果表明提取物中均含有白术内酯。对索氏提取 19 号实验方法所得成分进行 HPLC 法测定白术内酯的含量，得知 5 号实验方法所得白术内酯的含量最高。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：68.2董岩，辛炳炜.白术化学成分研究新进展J.山东医药工业,2003, 22(3): 32. 3Zhou D W.Pharmacology and pharmacodynamic action of A-tractylodesJ.World Phytomed,1996,11(3):120.
