《氟尿苷二乙酸酯脂质固体纳米粒的制备【医学论文】》由会员分享，可在线阅读，更多相关《氟尿苷二乙酸酯脂质固体纳米粒的制备【医学论文】（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、医学论文-氟尿苷二乙酸酯脂质固体纳米粒的制备作者：连佳芳，张三奇，顾宜，石小鹏，奚苗苗 【关键词】 固体Preparation of floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles【Abstract】 AIM: To prepare floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles (FUDRASLN) so as to improve the treatment efficacy and reduce the side effects of floxuridine (FUDR). METHODS:
2、FUDR was esterified with acetic anhydride in the presence of pyridine and 4dimethylaminopyridine. The structure of expected compound, floxuridine diacetate (FUDRA)，was identified by proton nuclear magnetic resonance. The stability of FUDRA in mouse serum and tissue homogenates and octanolbuffer part
3、ition coeffient of FUDRA were investigated by reversed phase high performance liquid chromatography (RPHPLC). FUDRA was used to prepare FUDRASLN by dry membrane technique. Transmission electron microscopy was employed to study the shape and particle diameter distribution of FUDRASLN. Drug loading an
4、d entrapment efficiency were also determined by RPHPLC. RESULTS: FUDRA was more stable in weak acid solution than in base solution, hydrolyzed fast in serum and tissue homogenates, especially in liver homogenate. The partition coefficient of FUDRA was 58.13. The diameter distribution of FUDRASLN was
5、 （20853） nm, drug loading was 7.63% and entrapment efficiency was 94.21%. CONCLUSION: The lipophilicity of FUDR is dramatically increased after esterification with acetic anhydride. FUDRASLN has a high entrapment efficiency and a good distribution in size.【Keywords】 floxuridine; solid lipid nanopart
6、icles; targeted drug delivery system【摘要】 目的：为了提高氟尿苷（FUDR）的疗效，降低其毒副作用而制备氟尿苷二乙酸酯固体脂质纳米粒（FUDRASLN）. 方法：在吡啶和 4 二甲氨基吡啶存在时，FUDR 与乙酸酐反应，制备氟尿苷二乙酸酯，并测定其核磁共振氢谱.RPHPLC 测定其在正辛醇和磷酸盐缓冲液中的分配系数及不同 pH 缓冲液和组织匀浆中的稳定性.采用薄膜分散法制备 FUDRASLN；透射电镜研究其形态、粒径及粒径分布；RPHPLC 测定载药量、包封率. 结果：制备成的 FUDRA 在弱酸性溶液中较稳定，在弱碱性溶液中水解较快；在血清和组织匀浆中易
7、水解，在肝匀浆中水解最快；FUDRA 分配系数为 58.13. FUDRASLN 粒径为（20853）nm，载药量为 7.63，包封率为 94.21. 结论: FUDR 转化成 FUDRA 后亲脂性大大增加；FUDRASLN 包封率较高，粒径分布较均匀.【关键词】 氟尿苷；固体脂质纳米粒；靶向给药系统0 引言氟尿苷(floxuridine, FUDR)是 5 氟尿嘧啶（5FU）的脱氧核苷衍生物，是有效的抗代谢类抗消化道肿瘤新药，主要用于肝癌治疗. 为了增加其肝靶向性，我们制备了氟尿苷固体脂质纳米粒（FUDRSLN），但 FUDR 的脂溶性较小，制备固体脂质纳米粒（solid lipid nan
8、oparticles, SLN）比较困难，故将 FUDR 酯化，合成了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，以大豆磷脂为药物载体，制备FUDRASLN，期望药物静注后可浓集于肝脏，达到提高疗效，降低毒副作用的目的.1 材料和方法1.1 材料RE52 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；UV265 型紫外可见分光光度计（日本岛津）；INOVA400 超导核磁共振仪（美国 Varian）；LC10Avp 高效液相色谱仪（日本岛津）；色谱柱：Kromasil C18 柱，5 m，4.6 mm150.0 mm；KQ250 型超声波发生器(江苏昆山淀山湖检测仪器厂)，BP190S 电子天平(德国赛多利斯)，XW8
9、0A 漩涡混合器（江苏海门市麒麟医用仪器厂）；JEM2000Ex型透射电子显微镜（日本电子）；TG16W 微量高速离心机（湖南仪器仪表总厂光华仪器厂）；Sephadex G50 葡聚糖凝胶（华美生物工程公司）. 药品和试剂：FUDR（浙江海正药业股份有限公司，批号 041202，纯度 99.2）；乙酸酐（开封化学试剂总厂，批号 001022）；大豆磷脂（注射用，上海太伟药业有限公司，批号 040716）. 其它药品和试剂均为分析纯. 昆明种小鼠 5 只，体质量(202) g, 由第四军医大学实验动物中心提供.1.2 方法1.2.1FUDRA 的合成及结构鉴定 FUDR 0.25 g，加入干燥的
10、二氯甲烷 30 mL中，依次加入乙酸酐 0.31 g，吡啶 3 mL，催化量 4 二甲氨基吡啶. 反应混合物室温搅拌 3 h，反应结束后加入 250 mL 乙酸乙酯，依次用稀 HCl，稀 NaHCO3和 H2O 洗涤，加入适量无水 Na2SO4 干燥 2 h，过滤，滤液旋转蒸发，除去大部分乙酸乙酯，加入石油醚使产物结晶析出，抽滤，干燥. 合成路线如图 1 所示. 进行核磁共振氢谱(1HNMR)鉴定.1.2.2FUDRA 稳定性考察反相高效液相色谱法(RPHPLC)测定 FUDRA 的含量. 流动相甲醇水(3575)；流速：1 mL/min；检测波长：268 nm；保留时间：(5.50.1) m
11、in；温度：25. 配制 FUDRA 系列浓度标准液，分别进样 20 L，以峰面积（A）对浓度（c）进行线性回归，在 0.5100.0 mg/L 范围内有良好的线性关系，回归方程为 A=-454.22+33317c，相关系数r=0.9999，P0.05(n=5). 高、中、低三种浓度的平均回收率为 102.4% (RSD=2.21%). 精密吸取 FUDRA(8.75 mg/L)甲醇液 1 mL，加到 9 mL 37水浴预热的 pH 分别为 4.5,6.8, 7.4,7.8 的缓冲液中,混漩振荡 1 min 后,置入 37水浴中,于不同时间点取样 20 L 进样，测定残留 FUDRA 浓度.
12、以浓度的自然对数对时间进行线性回归，求反应速率常数和 FUDRA 水解半衰期. 为评价FUDRA 在体内转化为 FUDR 的速度，进行了 FUDRA 在小鼠血清及不同组织匀浆中的水解动力学研究. 小鼠眼眶取血后处死，迅速取出肝、肾、肺组织. 血浆离心 10 min（14 000 g），取上清液 0.5 mL 加 pH 6.8 的缓冲液 4.0 mL；肝、肾、肺组织称质量，加五倍量 pH 6.8 的缓冲液,匀浆，离心 10 min（14 000 g），取上清液 1.0 mL，加 pH 6.8 的缓冲液 4.0 mL，混匀. 向 37水浴中预热的血清及组织匀浆稀释液中加入 FUDRA 贮备液（87
13、 mg/L）各 1.0 mL，漩涡混合 1 min，于不同时间取样 200 L，加甲醇 500 L，混合 1 min，离心 5 min（14 000 g），取上清液 20 L 进样，测定残留药物浓度. 以浓度的自然对数对时间进行线性回归，求 FUDRA 水解速率常数和半衰期.1.2.3FUDRA 分配系数(P)的测定精密量取 FUDRA 的正辛醇溶液（84 mg/L） 5 mL，加入用正辛醇饱和过的磷酸盐缓冲液（pH 6.8） 5 mL, 混合 5 min,HPLC 法测定两相 FUDRA 浓度；用正辛醇饱和过的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）配制 FUDR 溶液（120 mg/L），精密量取该液
14、 5 mL，加入正辛醇 5 mL, 混合 5 min,RPHPLC 法测定两相中 FUDR 浓度. P=C 醇/C 水,C 醇表示在正辛醇中的浓度,C 水表示在水中的浓度.1.2.4FUDRASLN 的制备在单因素考察的前提下，利用薄膜超声分散法通过均匀设计优化制备工艺. 精密称取 FUDRA 10 mg，大豆磷脂 90 mg 于 100 mL 圆底烧瓶中，加入 15 mL 氯仿溶解. 旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上形成一层薄膜. 加入 60 g/L 甘露醇水溶液 10.0 mL，水浴超声两次，每次 30 min，分装于安瓿中.1.2.5FUDRASLN 的形态学研究取 FUDRASLN 胶体溶
15、液适量，加适量水稀释，滴加在铜网上，用 20 g/L 的磷钨酸钠液染色，用 JEM2000Ex 型透射电子显微镜观察并拍照，统计 100 个纳米粒的粒径.1.2.6FUDRASLN 的包封率和载药量的测定采用凝胶层析法. 精密量取FUDRASLN 胶体溶液 0.5 mL 上柱，洗脱液为蒸馏水，每 3.0 mL 收集一次，流速为 0.5 mL/min，层析温度为室温. HPLC 法测定固体脂质纳米粒中药物含量. 另取 0.5 mL FUDRASLN 胶体溶液，置 50 mL 的容量瓶中，甲醇溶解，定容. HPLC法测 FUDRA 浓度 C0. 包封率=（C 透C0）100%，载药量=（包封的 F
16、UDRA 质量纳米粒总质量）100%.统计学处理： 考察时间与 Ln(C/C0100)之间的线性关系，用 SPSS 11.0对数据进行相关分析，计算 Pearson 相关系数 r，检验水准 =0.05.2 结果得片状结晶 0.30 g，产率 91，mp 177.0179.0 . 1HNMR（400 MHz，CDCl3） =9.35(s,1H,NH)；7.66(d,1H,C6H)；6.31(t,1H,C1H)；5.22(m,1H,C3H)；4.42(m,1H,C4H)；4.29(m,2H,C5H)；2.53(m,1H,C2H)；2.18(m,1H,C2H)；2.15(s,3H,CH3CO)；2.12(s,3H,CH3CO).2.1FUDRA 在不同 pH 缓冲液中的稳定性 pH 对 FUDRA 稳定性影响较大. FUDRA 在弱酸性溶液中较稳定，在弱碱性溶液中水解较快. 由相关系数 r 可见，水解为表观一级反应（表 1）.表 1 氟尿苷二乙酸酯在不同 pH 缓冲溶液
