地红霉素肠溶片释放度测定方法的研究【药学论文】

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1、药学论文-地红霉素肠溶片释放度测定方法的研究【摘要】 目的 对地红霉素肠溶片释放度测定的三种方法进行系统的研究和比较，并建立其最佳测定方法。 方法 分别采用 口 占 吨氢醇显色法、硫酸显色法以及高效液相色谱法测定地红霉素肠溶片的释放度，对每种方法进行方法学的研究和验证。 结果 采用三种方法均可以准确地测定地红霉素肠溶片的释放度，不同方法测得结果差异较小。 结论 硫酸显色法因试剂易得，操作简便，快捷、准确，将其作为最佳测定方法。 【关键词】 地红霉素Study on methods for the release determination of dirithromycin entericcoa

2、ted tabletsABSTRACT Objective Three methods by which the release of dirithromycin enteric-coated tablets were determinated and compared. Methods Xanthydrol coloring method，sulfuric acid coloring method，and HPLC method were developed for determination of the release of dirithromycin enteric-coated ta

3、blets. Result All of these methods can be used to determine the samples precisely，and difference of the results among them is slightly. Conclusion Sulfuric acid coloring method is inexpensive，simple，rapid and precise，and it is regarded as the optimal method.KEY WORDS Dirithromycin; Enteric-coated ta

4、blets; Release地红霉素（dirithromycin）是一种新的第二代红霉素类大环内酯类抗生素，由红霉环胺与脂肪醛酸缩合而成。地红霉素通过阻碍细菌转肽过程，抑制细菌蛋白质的合成。体外试验证明地红霉素对临床上多种常见致病菌有抗菌作用。地红霉素具有与红霉素相似的抗菌谱，其特点是药动学性质优良，半衰期长达 2050h，不良反应相对较轻1，2 。美国 Lilly 公司的产品于 1993年 9 月在西班牙上市，1996 年通过美国 FDA 批准，并收入美国药典 USP23。目前国内有多家研制的地红霉素肠溶片和肠溶胶囊获准生产并用于临床。对于地红霉素肠溶片释放度的测定方法，美国药典（USP23

5、）中采用了 口 占 吨氢醇显色法 3 ;我国的试行药品标 准中采用了硫酸显色法;另外，还可以采用含量测定的 HPLC 法进行释放度的测定 4 。我们对这三种方法分别进行了方法学研究，并对三种方法测得的结果进行了比较。1 仪器与试药 1.1 仪器ZRS-8 型智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）;Shimadzu UV-2401PC 型紫外-可见分光光度计;Shi-madzu 高效液相色谱仪（LC-10ATvp 泵、SPD-10Avp 可见紫外检测器、SCL-10Avp 控制器）;AE200 电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。1.2 试药地红霉素对照品（纯度 99.83%）为自制，并由中

6、国药品生物制品检定所标定;地红霉素肠溶片（规格:0.25g）为自制产品;10% 口 占 吨氢醇甲醇溶液购自北京恒业中远化工有限公司;乙腈、甲醇为色谱纯;盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠及硫酸等均为分析纯。2 方法与结果2.1 口 占 吨氢醇显色法在采用 口 占 吨氢醇显色法测定本品释放度的过程中发现，完全依照USP23 中的显色条件，方法的线性和耐受性不佳;经过改良显色条件，可使方法具有较好的线性和显色稳定性。其它条件如对照品溶液的浓度、检测波长等则与 USP23 中条件相同。2.1.1 美国药典中的显色条件 精密量取待测溶液 0.50ml，加入 0.50ml乙酐，混匀。然后加入 5.0

7、ml 冰乙酸，静置 5min，加入 0.50ml 口 占 吨氢醇试液，放置 30min 使显色。2.1.2 改良后显色条件 精密量取待测溶液 1.0ml，加入 0.10mol/L 盐酸溶液 4.0ml，摇匀，再加 口 占 吨氢醇试液 10.0ml，混匀，于沸水中加热5min，于冰浴中冷却，再于室温放置 15min。 口 占 吨氢醇试液的配制 取 10% 口 占 吨氢醇甲醇溶液 0.02ml，置100ml 量瓶中，加冰乙酸 20ml 及盐酸 1ml，摇匀，用冰乙酸稀释至刻度。2.1.3 标准曲线的制备 精密称取地红霉素对照品适量，用 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成 0.07、0.14、

8、0.21、0.28、0.35、0.42、0.49 和0.56mg/ml 的标准溶液。分别精密量取 1.0ml，按上述方法进行显色，测定540nm 波长处吸收度。以吸收度 A 对标准溶液浓度 C（mg/ml）进行回归，得标准曲线方程为:A=1.8452C-0.0042，r=0.9998。2.1.4 溶液室温放置稳定性试验 取上述 0.28mg/ml 的标准溶液于室温下放置，分别于 0、1、2、4、6 和 8h 精密量取 1.0ml 进行显色，测定。结果表明溶液的吸收度在 4h 内变化不大。2.1.5 回收率试验 精密称取地红霉素 11、14 及 17mg，分别置 50ml 量瓶中，加入处方量的空

9、白辅料，用 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。分别精密量取续滤液 1.0ml，按上述方法进行显色，于 540nm 波长处分别测定吸收度。计算测得量及回收率，结果见 Tab.1。2.1.6 测定法 取本品，先以盐酸溶液（91000）900ml 为溶剂，采用篮法，转速 100r/min，经 2h，每片肠溶膜均不得有裂缝或软化现象;继以磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml 为溶剂，45min 时取溶液 10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取地红霉素对照品适量，用 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解，并稀释成 0.28mg/ml 的溶液，作为对照品溶液;精密量取上述溶液各 1

10、.0ml，加入0.10mol/L 盐酸溶液 4.0ml，摇匀，再加入 口 占 吨氢醇试液 10.0ml，混匀，于沸水中加热 5min，于冰浴中冷却，再于室温放置 15min。以空白试剂溶液作对照，于 540nm 波长处测定吸收度，以两者的比值计算释放百分率。2.2 硫酸显色方法 采用显色条件与地红霉素肠溶片试行标准中规定的相同条件，即以（75100）硫酸液 5ml 为显色试剂，室温下反应 1h，检测波长为 482nm。2.2.1 标准曲线的制备 精密称取地红霉素对照品适量，用 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成 32、64、96、128 和 160g/ml 的标准溶液。分别精密量取 5.

11、0ml，加入（75100）硫酸液 5ml，摇匀，室温下放置 1h，测定482nm 处吸收度。以吸收度 A 对标准溶液浓度 C（g/ml）进行回归，得标准曲线方程为:A=0.0064C-0.0766（r=0.9993）。2.2.2 溶液室温放置稳定性试验 取上述 96g/ml 的标准溶液于室温下放置，分别于 0、1、2、4、6 和 8h 精密量取 5.0ml，进行显色，测定。结果表明，溶液的吸收度在 4h 内变化不大。2.2.3 回收率试验 精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素 80、100 和 120g/ml 的溶液，分别精密量取 5.

12、0ml，按上述方法显色，测定 482nm 处吸收度。计算测得量及回收率，结果三个剂量的回收率分别为 99.6%、100.2%和 99.1%，对应的 RSD 分别为 0.8%、0.6%和 0.5%。2.2.4 测定法 取本品，按照 2.1.6 项下所述方法操作，取磷酸盐缓冲液（pH6.8）为释放介质，45min 后取溶液 10ml，滤过，精密量取续滤液 2ml，加入磷酸盐缓冲液（pH6.8）稀释至 5ml，作为供试品溶液;另精密称取地红霉素对照品适量，用磷酸盐缓冲液（pH6.8）溶解，并稀释成 100g/ml 的溶液，作为对照品溶液;精密量取上述溶液各 5.0ml，按 2.2.4 项下所述方法显

13、色，测定482nm 处吸收度。以两者的比值计算释放百分率。2.3 高效液相色谱法（HPLC 法）2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Diamond-C 18 （4.6mm250mm，5m）;流动相:乙腈甲醇磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 1.41g 与磷酸氢二钾 6.91g，加水至 1000ml）（441937）;检测波长205nm;流速 2ml/min;柱温 40;进样量 10l。系统适用性试验依照 USP23 中地红霉素肠溶片含量测定项下方法进行。根据试验结果规定，地红霉素 16R 异构体峰与 9（S）红霉胺峰之间分离度 R12 不得小于 5.0，地红霉素 16R 异构体峰与 16S

14、 异构体峰之间分离度 R23 不得小于 2.0。2.3.2 空白辅料及溶剂的干扰试验 试验结果表明，空白辅料及溶剂（pH6.8磷酸盐缓冲液）均在 2min 之前出峰，不干扰样品的测定。2.3.3 标准曲线的制备 精密称取地红霉素对照品适量，加 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成 0.05、0.10、0.20、0.40 和 0.60mg/ml 的标准溶液。分别吸取 10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积 A 对浓度 C（mg/ml）进行回归，得标准曲线方程为:A=553934C+894.69（r=0.9999）。2.3.4 溶液稳定性及精密度 取上述 0.20mg/ml

15、的标准溶液于室温条件下放置，分别于 0、1、2、4 和 6h 吸取 10l，进行测定，结果表明，6h 内峰面积变化不大，RSD 为 0.75%。0 时连续进样 6 次，记录色谱图，量取峰面积，计算其相对标准偏差，RSD 为 0.66%。2.3.5 回收率试验 精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加 pH6.8 磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素 0.20、0.25 和 0.30mg/ml 的溶液，分别吸取 10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算测得量及回收率。结果表明，三个剂量的回收率分别为 100.0%，99.7%和99.4%，对应的 RSD 分别为 0.5%、

16、0.6%和 0.5%。 2.3.6 测定法 分别吸取 2.1.6 项下所述供试品溶液和对照品溶液10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算释放百分率。2.4 供试品释放曲线的绘制取地红霉素肠溶片 6 片，依据中国药典 2005 年版 二部附录 X D 释放度测定法第二法，采用篮法，先以盐酸溶液（91000）900ml 为溶剂，转速100r/min，经 2h，每片肠溶膜均不得有裂缝或软化现象;继以 pH6.8 磷酸盐缓冲液（900ml）为释放介质，转速为 100r/min。分别于 5、10、20、30、45 和60min 取样，分别精密量取续滤液适量，按上述三种方法分别处理溶液，并测定数据，计算每片在缓冲液介质中的释放量，每个时间点均以测得的六片释放量均值作为该时间点的释放量，绘制释放曲线，并比较不同测定方法所得释放曲线间差异（Fig.1）。结果表明，用上述三种释放度测定方法测得的地红霉素肠