《姜黄素防治细菌脓毒症小鼠的实验研究【医学论文】》由会员分享，可在线阅读，更多相关《姜黄素防治细菌脓毒症小鼠的实验研究【医学论文】（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、医学论文-姜黄素防治细菌脓毒症小鼠的实验研究【摘要】 目的 探讨姜黄素对大肠埃希菌引起的细菌脓毒症小鼠的保护作用。 方法 昆明种小鼠 90 只随机分为对照组、模型组和姜黄素组,每组 30 只。姜黄素组腹腔注射姜黄素固体分散剂,每天 1 次,连续 3 d。第 4 天,模型组和姜黄素组尾静脉注射 041184 大肠埃希菌标准菌悬液建立细菌脓毒症模型。8 h 后,每组处死小鼠 20 只检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子 (TNF )和一氧化氮(NO)含量,观察肝、肾、肺和肠等脏器病理改变,余下小鼠观察 24 h 生存率。 结果 姜黄素组血清AST、ALT
2、、TNF 和 NO 含量明显低于模型组(P0.05),病理检查见脏器损害亦明显减轻;24 h 存活率 90%,明显高于模型组(50%)。 结论 姜黄素可减少细菌脓毒症小鼠 TNF 、NO 和氧自由基的产生,减轻其脏器病理损害。 【关键词】 姜黄素 休克 脓毒 大肠杆菌 疾病模型 动物ABSTRACT: Objective To investigate the effects of curcumin(Cur) on bacterial sepsis induced by Escherichia coli(E.coli) in mice. Methods Sixty mice were divid
3、ed into 3 groups at random: a control group, an infected group and a curcumin group. Cur group: intraabdominal injection of curcumin solid dispersant(200 mg/kg) was given for three days. The infected group: 078 E.coli(5 1010cfu/L, 10 mL/kg) was administrated by intravenous injection to create the ba
4、cterial sepsis mice model. 8 hours after the injection, the level of AST, ALT, and TNF and NO of each group was measured and mice were sacrified to observe the pathological change of liver, ridney, lung and intestines. Results Curcumin can remarkably reduce the level of the AST and ALT in the serum
5、of the bacterial sepsis mice induced by E.coli(P0.05) as well as that of TNF (P0.05) and NO(P0.05). Meanwhile, it can significantly decrease the pathological change of liver. Conclusion Curcumin can play an important role to protect the mice from bacterial sepsis by ways of cytotoxic effects of NO,
6、TNF and oxygen free radicals.KEY WORDS: curcumin; shock,septic; Escherichia coli; disease models,animal福建医科大学学报 2008 年 7 月 第 42 卷第 4 期侯君艺等：姜黄素防治细菌脓毒症小鼠的实验研究脓毒症是由严重细菌感染引起的全身炎症反应综合征的晚期失代偿表现,是严重烧伤、创伤和感染的常见并发症，进一步发展可导致脓毒症性休克、多器官功能障碍综合症(multiple organ dysfuction syndrome, MODS)。1980 年以来,对于细菌脓毒症和 MODS 发生的
7、分子机制的研究,特别是对脂多糖(LPS)信号转导通路的深入研究,引发一系列阻断内毒素信号通路和对抗各种单一介质的治疗制剂的产生。但迄今尚没有一种制剂能够显着降低脓毒症性体克的临床死亡率1。姜黄素为姜黄的主要活性成分,具抗氧化、抗炎等药理作用,能减少各种炎症介质的合成和分泌2。笔者采用大肠埃希菌制备小鼠细菌脓毒症模型,探讨姜黄素预防给药对细菌脓毒症的保护作用。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物 清洁级雄性 ICR 小鼠 90 只,体质量(252)g,福建医科大学实验动物中心提供动物合格证号:SCXK(闽)200400023 。90 只小鼠随机分为对照组、模型组和姜黄素组,每组 30 只。
8、1.1.2 试剂与仪器 姜黄素(上海试剂三厂,批号:051105),自制为固体分散体制剂。041184 大肠埃希菌标准株(福建医科大学病原微生物研究所)。门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(中生北控生物技术股份有限公司)。NO 试剂盒(南京建成生物研究所,批号 20070510)。小鼠 TNF ELISA 试剂盒(深圳晶美生物公司,批号 20070610)。全自动生化分析仪(意大利 EosGravo 公司);酶标仪(550 型,美国 BioRad 公司);自动组织脱水机(TP1020,德国莱卡公司);生物组织自动包埋机(TB718E,湖北泰维医疗科技有限责任公司);
9、石蜡切片机(RM2235,德国莱卡公司)。1.2 方法1.2.1 给药 姜黄素组腹腔注射姜黄素 200 mg/kg,每天 1 次,连续 3 d；对照组和模型组给予等量生理盐水。第 4 天,模型组和姜黄素组无菌操作尾静脉注射大肠埃希菌041184 标准菌株悬液 51010cfu/L,10 mL/kg,制备细菌脓毒症模型3。1.2.2 检测指标1.2.2.1 血清 NO 及 TNF 测定 尾静脉注射后 8 h,每组处死 20 只,收集血清检测 NO 及 TNF 含量,NO 用硝酸酶还原法测定,TNF 用双抗体夹心 ELISA 法检测。1.2.2.2 血清 ALT、AST 测定 采用多功能生化分析仪
10、(意大利 EosGravo 公司)测定。1.2.2.3 病理组织学检查 切取肝、肾、肺、肠等脏器组织,10%甲醛固定,HE 染色,观察病理损害程度。1.2.2.4 生存率测定 密切观察注射细菌后 3 d 内小鼠的一般情况,记录死亡时间。根据公式计算生存率：生存率(%)=（72 h 存活的小鼠数/各组小鼠数）1001.3 统计学处理 数据用 xs 表示,组间及组内均数差异的显着性比较采用 t 检验。2 结 果2.1 血清 TNF 、NO 及 ALT、AST 模型组和姜黄素组血清 TNF 、NO 及 ALT、AST 含量明显高于对照组(P0.05),与模型组比较,姜黄素组血清 TNF 、NO 及
11、ALT、AST 含量明显降低(P0.05,表 1)。表 1 姜黄素对血清 TNF 、NO 及 ALT、AST 的影响（略）2.2 主要脏器病理学 对照组的肝脏结构正常，未见炎症细胞浸润，模型组肝脏损害明显,肝组织大量坏死,伴有大量炎症细胞浸润(图 1B),其它脏器病理改变较轻;姜黄素组肝组织结构尚清楚,变性坏死程度明显减轻,亦可见炎症细胞浸润(图 1C),其它脏器未见明显病理损害。 3 讨 论3.1 细菌性脓毒血症模型的建立 细菌性脓毒血症模型复制方法可分为细菌攻击模型和局部感染模型两大类4。通过注射细菌建立模型的方法不但可以使动物感染,又可以诱发动物内毒素中毒,能更好的模拟疾病的临床病理生理
12、变化。本实验经尾静脉注射大肠埃希菌后,小鼠血清炎症因子 TNF 和 NO 持续升高,肝功能指标 ALT、AST 急剧升高,病理检查可见多脏器损害,说明已成功制备细菌性脓毒血症模型。3.2 姜黄素药理作用 与细菌性脓毒血症发病有关的体液性炎性介质众多,各种炎性介质相互影响,构成了复杂的网络系统。TNF 是细菌性脓毒血症时一个早期的促炎因子,可以激活 NF B,可促使其它炎症介质大量过度释放,如诱导合成型一氧化氮合酶(iNOS)大量表达,合成反应极强的自由基 NO,直接或间接介导内毒素对组织器官的损伤5。在姜黄素的相关药理研究中,已有报道显示姜黄素可以通过抑制LPS 诱导产生抑制 B 激酶l 、抑
13、制 B 激酶2 活性,从而抑制 NF B的核内转移,减少 TNFa 的生成6。Marion 等也发现姜黄素体能够抑制由 LPS诱导的小鼠肝脏和腹腔巨噬细胞 iNOS 的基因表达,抑制巨噬细胞释放 NO7。本实验结果显示,姜黄素预防给药可显着降低细菌性脓毒血症小鼠血清 TNF 和 NO 含量,这可能是姜黄素抗细菌性脓毒血症的重要机制。此外,大量研究证明,姜黄素具抗氧化、抗炎、清除自由基,并对肝脏具有保护作用8。本实验结果显示,姜黄素预防给药可明显降低细菌性脓毒血症小鼠血清的 ALT、AST 的含量,减轻肝脏病理损害,明显的提高细菌性脓毒血症小鼠 72 h 生存率。【参考文献】1 Karima R
14、,Matsumoto S,Higashi H,et al. The molecular pathogenesis of endotoxic shock and organ failureJ. Mol Med Today, 1999,5(3):123132.2 Yadav V S,Sinqh D P,Sinqh V K,et al. Immunomodulatory effects of curcuminJ. Immunopharmacol Immunotoxicol, 2005,27(3):485497.3 David M,Ronald S. Efficacy of novel rifamyc
15、in derivatives against rifamycinsensitive and resistant staphylococcus aureus isolates in murine models of infectionJ. Antimicrob Agents Chemother, 2006,28(2):36583664.4 Parker S J,Watkins P E. Experimental models of Gramnegative sepsisJ. Br J Surg, 2001,88(1):2230.5 Bucova M. Role of cytokines in t
16、he development of local and systemic inflammation and septic shockJ. Vnitr Lek, 2002,48(8):755762.6 Biswas S K,McClure D,Jimenez L A,et al. Curcumin induces glutathione biosynthesis and inhibits NFkappaB activation and interleukin8 release in alveolar epithelial cells:mechanism of free radical scavenging activit
