喉癌切缘中eIF4E、p53、ras和c-myc表达与预后的研究【医学论文】

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1、医学论文-喉癌切缘中 eIF4E、p53、ras 和 c-myc 表达与预后的研究作者：雷文斌， 苏振忠 文卫平， 柴丽萍， 蒋爱云， 廖冰 【摘要】 【目的】 探讨 eIF4E、p53、ras 和 c-myc 在喉癌切缘中的表达及其与预后的关系。 【方法】 42 例临床分期为、期的喉癌患者被分别行手术治疗，共得喉癌切缘标本 112 个，采用免疫组化的方法检测肿瘤原发灶和切缘中 eIF4E、p53、ras 和 c-myc 的表达。【结果】 喉癌原发灶 eIF4E、p53、ras和 c-myc 阳性率分别是 100%(42/42)，57.1%（24/42），40.5%(17/42)和33.3%（

2、14/42）；手术切缘 eIF4E、p53、ras 、c-myc 和两个以上基因阳性率分别是 42.8% (18/42)、14.3% (6/42)、9.5%（4/42），9.5%（4/42）和21.4%（9/42），生存分析提示切缘 eIF4E、 p53 或两个以上基因阳性组复发率高，5 年生存率低；COX 回归分析提示切缘 eIF4E 表达阳性与预后相关。【结论】喉癌切缘 eIF4E 阳性的患者复发率高，预后不良。eIF4E 在喉癌手术切缘的表达可考虑作为预测喉癌预后的独立风险指标。 【关键词】 喉肿瘤； eIF4E； p53；ras； c-myc； 预后Abstract: 【Objecti

3、ve】 To investigate the expression and prognosis significance of eIF4E, p53, ras, and c-myc in laryngeal cancer surgical margins. 【Methods】 Forty-two cases of laryngeal cancer patients whose clinical stage were or underwent surgical procedure and 112 pathological negative surgical margin specimens we

4、re gotten. Immunohistochemical method was used to detect expression of eIF4E, p53, ras, and c-myc of the tumor primary sites and surgical margins. 【Results】 100% (42/42) tumor primary sites were found eIF4E positive , 57.1% (24/42) in p53, 40.5% (17/42) in ras and 33.3% (14/42) in c-myc. The rate of

5、 positive margin of eIF4E, p53, ras, c-myc and more than two genes were 42.8% (18/42), 14.3% (6/42), 9.5% (4/42), 9.5% (4/42), and 21.4% (9/42), respectively. Kaplan-Meier survival analysis showed that the recurrent rate of the cases with eIF4E, p53 or more than two genes positive margin were higher

6、 than those of negative, and their five years survival rate was lower. Cox regress survival analysis showed that expression of eIF4E in surgical margin were related to survival. 【Conclusion】 Laryngeal cancer patients with eIF4E positive margin would have a higher recurrent rate and worse prognosis.

7、The expression of eIF4E of surgical margin may be used as an independent prognosis-correlative tumor marker of laryngeal cancer.Key words: laryngeal neoplasms; eIF4E; p53; ras; c-myc; prognosis喉癌是常见的恶性肿瘤之一，治疗以手术和放疗为主，喉癌治疗后复发仍常见报道。目前研究认为 eIF4E、p53、ras 和 c-myc 等癌基因与喉癌的发生相关1-5。本研究拟通过对本院既往多年喉癌患者的手术切缘标本进

8、行上述指标表达的检测，结合临床资料，利用多因素模型，探讨与喉癌预后相关的独立指标，以期更准确地预测喉癌复发的风险，指导综合治疗方案的实施。1 材料与方法11 临床资料选取 1994 年 1 月 1 日2001 年 5 月 1 日间在我科进行手术治疗，临床与病理资料齐全的喉癌患者 42 例，男 40 例，女 2 例，平均年龄 60（S=9）岁，年龄范围 3983 岁，所有病例均为首次手术，术前均未做过放疗和化疗，原发灶均为鳞状细胞癌，术中留取手术切缘标本 112 个，全部病理学检查阴性，切缘不含有黏膜上皮的病例弃用。病理类型：高分化鳞癌 23 例，中分化鳞癌 13例，低分化鳞癌 6 例。声门上型

9、 12 例，声门型 26 例，跨声门型 4 例。TNM 分期：T2N0M0 11 例 T3N0M0 22 例，T2N1M0 2 例，T3N1M0 7 例。42 例患者中垂直部分喉 18 例，扩大垂直半喉 15 例，水平部分喉切除术 6 例，喉水平垂直部分切除术(喉 3/4 切除术) 3 例。颈淋巴结清扫术 17 例：功能性颈清扫术 10 例，择区性颈清扫术 7 例，42 例患者中 18 例术后复发（经病理证实），单纯局部复发 13 例，局部复发伴颈部淋巴结转移 4 例，局部复发伴远处转移 1 例，为肺转移。随访时间为 18 至 119 个月，平均 63 个月。本组资料中死于原发肿瘤或转移的 9

10、 例，自然死亡 4 例，气管瘘口阻塞窒息导致死亡 1 例。12 实验材料p53 单克隆抗体工作液：由 DAKO 公司提供，产品编号 M7001；eIF4E 鼠抗人单克隆抗体 IgG1，购于 BD 公司（编号 610269），工作浓度为 150，购于Santa-Crus 公司。P21ras 鼠抗人单克隆抗体，由 DAKO 公司提供，产品编号M0637；c-myc 鼠抗人单克隆抗体，由 DAKO 公司提供，产品编号 M3570。三步法免疫组化检测试剂盒，产品编号 PV-9000，购于北京中山生物技术有限公司。13 切缘留取的方法在喉癌手术时，于肿瘤残留风险较大处定向取材，切取少量带黏膜的组织作为手

11、术切缘，手术切缘距肿瘤肉眼边缘约 510 mm。标本常规置于 10%福尔马林液中固定，随后石蜡包埋。14 实验方法所有 42 例喉癌患者的原发灶和切缘标本都同时切 5 张玻片，分别用于 HE染色、p53、elF4E、c-myc 和 ras 免疫组化染色。所有切片都采用双盲法由两位病理科医生阅片。p53、c-myc 和 ras 组以 PBS 代替一抗作阴性对照，已知原发灶阳性切片作阳性对照；手术切缘阳性的染色标准是切缘黏膜的基底细胞中可以看到5%的细胞有相应的 p53、elF4E、c-myc 和 ras 特征的染色；同一病例多个切缘中只要有一个阳性，则为切缘该指标阳性。15 统计方法用 SPSS

12、 12.0 软件对结果进行处理。切缘分子指标表达与复发的统计分析采用卡方检验；喉癌预后的因素如年龄切缘分子指标等行 Kaplan-Meier 单因素生存分析;单因素生存分析提示有统计学意义的因素再进行多因素 COX 回归分析。2 结 果21 四种基因在喉癌原发灶的表达eIF4E 在所有标本中表达阳性，p53 阳性 24 例，阴性 18 例，ras 阳性 17例，阴性 25 例，c-myc 阳性 14 例，阴性 28 例。22 手术切缘四种基因表达阳性的免疫组化特征阳性手术切缘黏膜的基底细胞中可以看到5%的 p53、elF4E、c-myc 或ras 的阳性细胞（图 1）。eIF4E 阳性细胞胞核

13、周围或（和）胞浆呈淡黄色或棕黄色染色，胞核没有着色； p53 阳性细胞胞核呈棕黄色染色，胞浆没有着色；ras 阳性细胞胞浆呈淡黄色或棕黄色染色，胞核没有着色；c-myc 阳性细胞胞核和胞浆呈淡黄色或棕黄色染色。23 切缘阳性与复发率42 例患者中 18 例术后复发（经病理证实），单纯局部复发 13 例，局部复发伴颈部淋巴结转移 9 例，局部复发伴远处转移 1 例，为肺转移；由于后两组例数少，合并为一组进行统计分析。手术切缘 eIF4E、p53、ras 、c-myc 和两个以上基因阳性率分别是 42.8% (18/42)、14.3% (6/42)、9.5%（4/42），9.5%（4/42）和 2

14、1.4%（9/42）。结果提示喉癌手术切缘 eIF4E 阳性组复发率高，差别有显着性的（2=7.29, P=0.007）； 手术切缘 p53 阳性组复发率高（2=4.68, P=0.030)； 手术切缘 ras 或 c-myc 阳性和阴性组复发的差别没有统计学意义(P 0.05)。切缘中有两个以上基因阳性的共 10 例，其中 8 例局部复发，达 80%，两组的差异比较， 2=9.91, P=0.02。24 喉癌预后的单因素分析将可能影响喉癌预后的因素如年龄、临床分期、在喉癌切缘表达等指标进行 Kaplan-Meier 生存分析。手术切缘 eIF4E 阳性组与阴性组生存率的差异有显着性（P0.0

15、5）。生存分析也提示没有统计学意义，由于 c-myc 和 ras 在喉癌原发灶的表达也较低，我们认为这两个不宜作为喉癌切缘的分子肿瘤指标。喉癌手术切缘 eIF4E 阳性可能预示喉癌复发风险高和生存率低。eIF4E 在喉癌手术切缘的表达可考虑作为预测喉癌预后的独立风险指标。34 喉癌手术切缘多基因改变的意义肿瘤的发生常涉及多基因参与，是一多阶段、多步骤的复杂过程，在各种致癌因素作用下导致原癌基因激活或抑癌基因失活，这些基因突变的累积最终导致癌变。切缘中单一癌基因的改变不一定都发展为癌肿，在原发灶切除后人体正常的免疫机制有可能在这些细胞发生癌变之前将其修复或杀死，同时癌前病变在主癌灶切除后也可能向

16、正常上皮转化。这可能是本组中部分切缘分子生物学指标阳性而没有复发的原因之一。本研究提示切缘中多个癌基因的改变预示着复发的风险更高，预后差。【参考文献】WENDEL H G, DE STANCHINA E, FRIDMAN J S, et al. Survival signalling by Akt and eIF4E in oncogenesis and cancer therapy J. Nature, 2004, 428(6980): 267-269.ZHU N, GU L, FINDLEY H W, et al. Transcriptional repression of the eukaryotic initiation factor 4E gene by wild type p53 J. Biochem Biophys Res Commun, 2005, 335(4): 1272-1279.RINKER