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1、临床医学论文-PCR 检测输血传播病毒 DNA 的临床应用【关键词】 输血传播病毒【摘要】 目的 检测临床病人输血传播病毒（TTV）的感染情况。方法 应用 PCR 法对 613 例急慢性肝炎临床标本和 100 例健康体检者检测 TTV DNA，同时检测 HBV DNA 和 HCV RNA。结果 TTV DNA 阳性率为 3.1%（19/613），HBV DNA 阳性率为 38.5%（236/613），HCV RNA 阳性率为 11.9%（73/613）。19 例TTV DNA（+）中有 4 例合并 HBV DNA（+），3 例合并 HCV RNA（+）。健康体检者检出 2 例 TTV DNA（
2、+）。HBV DNA（+）、HCV RNA（+）和 HBV DNA（-）HCV RNA（-）人群 TTV DNA 的检出与健康体检者进行比较，差异无显着性（P0.05）。结论 TTV DNA 与 HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群无明显相关性。【关键词】 输血传播病毒；肝炎病毒，乙型；肝炎病毒，丙型；聚合酶链反应【Abstract】 Objective To detect the infection state of TTV of clinical patients.Methods The 613 clinical specimens of acute and chronic
3、hepatitis and 100 healthy volumteers were detected for TTV DNA by PCR.Meanwhile,HBV DNA and HCV RNA were detected.Results The positive rate of the detection of TTV DNA was 3.1%（19/613）.The positive rate of the detection of HBV DNA and HCV RNA was respective 38.5%（236/613） and 11.9%（73/613） in all sp
4、ecimens.4 HBV DNA and 3 HCV RNA were also detected in 19 TTV DNA positivity.2 TTV DNA were detected in healthy volumteers.There was no significant difference between HBV DNA positivity,HCV RNA positivity,HBV DNA negativity,HCV RNA negetivity and healthy volumteers.Conclusion The TTV DNA is not corre
5、lated to HBV DNA positivity or HCV RNA positivity.【Key words】 transfusiontransmitted virus;hepatitis B virus;hepatitis C virus;polymerase chain reaction在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中，有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继 1995 年发现庚型肝炎病毒（HGV）后，1997 年日本学者 Nishizawa等1报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒，暂时称
6、为输血传播病毒（TTV）。1998 年，Okamoto 等2报道了 TTV 全序列。为了解临床病人 TTV 的感染状况，本文用 PCR 法对急慢性肝炎临床标本进行了TTV DNA 的检测，同时检测 HBV DNA 和 HCV RNA。现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 标本来源 613 例肝炎患者血清标本均来自肝炎门诊及传染科住院病人，其中男 379 例，女 234 例，年龄 1965 岁。另选择 100 例健康体检者作为对照组，HBsAg（-），抗 HCV（-），肝功能血清指标正常，B 超影像学检查正常。分离血清 0.5ml 置-20保存备用。1.2 HBsAg、抗-HCV 的检测 HB
7、sAg 试剂盒由上海科华公司提供，抗-HCV IgG 试剂盒由河南华美生物工程有限公司提供，采用 ELISA 法，严格按试剂盒说明书进行操作。酶标仪为美国宝特 Bio-TekELX800。1.3 TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA 的检测 TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA PCR 试剂盒均由河南华美生物工程有限公司提供。每次 PCR 扩增设置阴性、阳性对照。PCR 扩增仪为 PE9600 型。2 结果613 例肝炎患者中 TTV DNA 阳性率为 3.1%（19/613），HBV DNA 阳性率为38.5%（236/613），HCV RNA 阳性率为 11.9%（73
8、/613）。19 例 TTV DNA（+）中有 4 例合并 HBV DNA（+），3 例合并 HCV RNA（+），没有发现三者同时阳性的病例。健康体检者检出 2 例 TTV DNA（+），未检出 HBV DNA（+）和 HCV RNA（+）。HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和 HBV DNA（-）、HCV RNA（-）人群 TTV DNA 的检出与健康体检者进行比较，差异无显着性（P0.05）。详见表 1。表 1 不同人群 TTV DNA 阳性检出情况略3 讨论由于 TTV 为单链 DNA 病毒，目前多采用传统 PCR 或套式 PCR 方法来检测TTV DNA。本文采用半套
9、式 PCR 方法对急慢性肝炎临床标本和健康体检者进行TTV 感染的检测，结果显示 236 例 HBV DNA（+）者中有 4 例发现 TTV DNA（+），73 例 HCV RNA（+）者中有 3 例发现 TTV DNA（+），未发现 TTV DNA、HBV DNA和 HCV RNA 三者同时（+），提示 TTV 与 HBV 和 HCV 不存在相关性。本文 613 例临床标本 TTV DNA 阳性率为 3.1%，10 例健康体检者 TTV DNA 阳性率为 2.0%，远低于国内、外的报道35。Naoumov 等3在 72 例慢性肝炎患者中检出了 18 例 TTV DNA 阳性（25.0%）。蔡
10、澍等4的资料显示，TTV DNA 在正常献血人群、HBsAg 阳性人群和抗-HCV 阳性人群中其检出率都在10%17%。杨建荣等5的资料显示，TTV DNA 阳性检出率在健康体检者、乙肝患者和丙肝患者分别为 28.3%、31.7%和 25.0%。从表 1 表明，HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和 HBV DNA（-）HCV RNA（-）人群 TTV DNA 的检出与健康体检者进行比较，差异无显着性（P0.05），结果提示，TTV 的感染与HBV、HCV 无明显的联系，其致病性与肝炎的关系可能与其它因素有关，是否在一定条件下转化成致病因素有待进一步探索。TTV 在本地区是否存在
11、变异，还有待进一步探索。这也可能与采用不同序列的 PCR 系统有关。Okamoto 等6对报道的众多 TTV DNA 序列进行同源性比较，不同 TTV 基因型的某些片段序列存在很大的差异性，TTV 至少可分为 16 个基因型，因此，采用不同序列的 PCR系统可影响 TTV 的检出率。有关 TTV 的流行病学、生物学特征还有待于进一步的研究。【参考文献】1 Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus（TTV） associated with elevated transaminase levels in posttransfus
12、ion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophys Res Commun,1997,241:92-97.2 Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus（TTV） associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Hepatol Res,1998,10:1-16.3 Naoumov N,Petrova E,Thomas M,et a
13、l.Presence of a newly described human DNA virus （TTV）in patients with liver disease.Lancet,1998,352:191-195.4 蔡澍,李国明,罗均,等.PCR 和 ELISA 检测不同人群 TTV 的感染状况.河北医药,2004,26:135-136.5 杨建荣,陈晓东,陶志华.荧光定量 PCR 检测 TTV 方法学建立及临床应用.华中医学杂志,2004,28:17-18.6 Okamoto H,Takahashi M,Nishizawa T,et al.Marked genomic heterogeneity and frequent mixed infection of TT virus demonstrated by PCR with primers from coding and noncoding regions.Virology,1999,259:428-43.
