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1、,高三生物一轮复习辅导与测试,选修一 生物技术实践,第四章 生物化学与分子生物 学技术实践,首页,尾页,上页,下页,1蛋白质的分离与提纯 2.从生物材料中提取某些特定的成分 3.PCR技术的基本操作和应用,首页,尾页,上页,下页,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,课时训练,微课助学,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,1DNA的粗提取与鉴定,单向,溶解度,0.14 mol/L,酒精,DNA,释放DNA,吸水涨破,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,1DNA的粗提取与鉴定,蓝
2、色,NaCl,DNA,冷酒精,二苯胺,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,2多聚酶链式反应扩增DNA片段,DNA模板,引物,DNA聚合酶,三十,变性,延伸,指数,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,3血红蛋白的提取和分离实验,(1)常用的分离方法： 法、凝胶电泳法等。 (2)基本原理： 凝胶色谱法：也称 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。 电泳：利用待分离样品中各种分子 的差异以及分子本身的大小、 的不同，使带电分子产生不同的迁移速度。,凝胶色谱,分配色谱法,相对分子质量的大小,带电性
3、质,形态,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,较小,血红蛋白,透析,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,凝胶色谱,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,(1)(2009高考江苏卷)提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞( ) (2)(2011江苏卷改编)用菜花替代鸡血作为实验材料进行“DNA的粗提取与鉴定”，其实验操作步骤相同( ) (3)(2009高考江苏卷)用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质( )
4、(4)(2009高考江苏卷)蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA( ) (5)(2011高考江苏卷)利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色( ) (6)(2010高考山东卷)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的PCR技术( ),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,(7)(2009高考广东卷)PCR反应包括多次循环，每次循环包括三步：变性、复性和延伸( ) (8)(2014唐山一模)PCR中加入的引物有两种，其作用是使DNA聚合酶能够从引物
5、的5端开始连接脱氧核苷酸( ) (9)(2014临沂一模)DNA变性后，当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，称为复性，PCR技术利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合( ) (10)(2011高考广东卷)猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂( ),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,(11)(2011高考广东卷)血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测，在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢( ) (12)(20
6、09高考江苏卷)蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化( ) (13)(2011高考山东卷)电泳法纯化蛋白质时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其相对分子质量越大，电泳速度越快( ) (14)(2010高考江苏卷)利用透析法纯化蛋白酶时，应以蒸馏水作为透析液( ),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,1DNA与蛋白质在不同NaCl溶液中溶解度不同,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,2.比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课
7、助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,2.比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,2.比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,3.分离DNA、PCR技术、分离蛋白质三者比较,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,3.分离DNA、PCR技术、分离蛋白质三者比较,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和
8、蛋白质技术,1下列关于DNA的粗提取实验和血红蛋白的提取实验，叙述正确的是( ) A前者选择鸡血细胞作为材料较好，后者选择哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料较好 B样品预处理时，前者静置1天处理除去上清液；后者需要加入清水，反复低速短时间离心洗涤，至上清液无黄色 C在DNA粗提取实验中，往2 mol/L氯化钠溶液中加入蒸馏水析出DNA时，应该缓慢加入，直到出现黏稠物为止 D洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐等,解析,鸡血细胞有细胞核，适于提取DNA；哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多细胞器，适于提取血红蛋白。提取血红蛋白的实验中，洗涤红细胞时，不能加清水，应该加入生理盐水，否则细胞提早释
9、放出血红蛋白与杂质混合，加大提取难度。DNA初次析出时，加清水至黏稠物不再增加为止。洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于血红蛋白的分离和纯化。,A,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,2凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术，对高分子物质有很好的分离效果，目前已经被多个领域广泛应用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答问题： (1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是_，原因是_ _。 (2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由_替代。,首页,尾页,上页,下页,考点突破,
10、高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,(3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是 _。 (4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体_(填 “相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱 液的流速要求是 _。 (5)若选用Sephadex G75，则“G”表示_， 75表示_。,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,解析,(1)用凝胶色谱技术分离各种不同蛋白质时，大分子物质由于直径较大，只能分布于颗粒之间，所以向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔，在向下移动的过程中，从一
11、个凝胶颗粒内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒内，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，所以大分子物质先洗脱出来。(2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由尼龙网和尼龙纱替代。,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,解析,(3)在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干、露出凝胶颗粒的现象。一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。(4)洗
12、脱液应与浸泡凝胶所用液体相同，且洗脱液流速要稳定，以免干扰洗脱结果。,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点一 DNA和蛋白质技术,答案,(1)a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶间隙移动，路程较短，移动速度较快 (2)尼龙网和尼龙纱 (3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 (4)相同 保持稳定 (5)凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围 凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,1提取玫瑰精油实验,水蒸气蒸馏,首页,尾页,上页,下页,
13、考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,2提取橘皮精油的实验,(1)方法：一般采用 法。 (2)实验流程：,无榨,压榨,过滤,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,3胡萝卜素的提取,纸层析,不溶于,易溶于,萃取,石油醚,干燥,过滤,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,(1)(2010高考山东卷)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，可选用蒸馏、压榨和萃取等方法从油料作物中提取。( ) (2)(2011高考山东卷)柚皮易焦糊，宜采用压榨法提取柚皮精油，该过程得到的
14、糊状液体可通过过滤除去其中的固体杂质。( ) (3)(2012高考山东卷)萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是防止有机溶剂挥发。( ) (4)(2014青岛一模)水蒸气蒸馏法是植物芳香油提取的常用方法，其中提取柠檬芳香油常用水中蒸馏法。( ) (5)(2008高考宁夏卷)从胡萝卜中提取胡萝卜素，可用有机溶剂作为溶剂。( ),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,(6)(2008高考宁夏卷)从胡萝卡中提取胡萝卜素常用的方法是萃取法。用这种方法提取胡萝卜素的主要步骤是：粉碎、干燥、萃取，过滤、浓缩。( ) (7)(2008高考宁夏卷)在胡萝卜
15、颗粒的加热干燥过程中，应选择较高的温度以便于充分干燥。( ) (8)(2008高考宁夏卷)提取的胡萝卜素可通过纸层析法进行鉴定，在鉴定过程中需要用标准样品对照。( ) (9)(2008高考宁夏卷)一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成正比。( ),首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,首页,尾页,上页,下页,考点突破,高考演练,微课助学,课时训练,考点二 植物有效成分的提取,易误警示,不同的物质提取方法不同,不同物质的提取是根据其理化性质的不同来进行的，因此在提取物质时，应先确定该物质的理化性质，然后再选择适宜的提取方法进
