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1、1目一国阮人、细胞因子是指机体细胞合成和分泌的小分子多肤类因子,它们具有调节机体的生理功能和免疫功能,因而有可能利用基因工程技术进行生产,用于治疗肿瘤、感染、免疫低下、造血功能障徨等疾病。目前己研制成功或正在研制的基因工程细胞因孙类药物主变有促红细肉生成素(EPO)、集落刺激因子(CF)、干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF)、趋化因子、生长因子(GF)和凝血因子(F)等。巳25的tcyXwee史e伟EPO是最早发现并首先运用于临床的造血生长因子,1985年成功表达了重组人促红细胞生成素(rhEPO)。rhEPO成为当前研究开发最成功的基因工程药物。EPO是一种主要由肾脏
2、和中枢神经系统等部位合成分泌的多功能缘盎白澡轲,是作用于红系祖细胞的造一生长因子,对神经元的许多功能也具有重要的调控作用。、在胚胎早期,EPO由肝生成,然后逐淀向肾转移,出生后主要由肾小管间质细胞分泌。EPO的产生与机体供氧状况有关,低氦可刺激EPO的产生。1巳i61*天然存在的EPO分为两种类型,a型含35%的糠基,B型含26%的糖基。两种类型在生物学特性、抗原性及临床应用效果上均相同。*人类EPO含有166个氨基酸,相对分子质量为34400,hEPO上有4个半胱氨酸(7,29,33,161),在7一161,29一33之间以工硫键相连,这对维持hEPO的生物学活性有重要作用。糖基化对稳定EP
3、O的体内活性具有重要作用,若缺乏糖链,则EPO在体内迅速被水解而失活。/刑EPO主要通过促进骨髓中红系祖细胞的存活、增殖和分化以调控红细胞的生成。*促进系祖细胞的增殖、分化和成熟*谋控神经元部分功能*对细胞内锈浓度也有明显的调节作用v*天然的hEPO制品一般是从贫血病患者尿中提取的,所以药源极为虱乏,不能满足需要。因此,在20世纪80年代就开始hEPO的研究,从胎儿肝中克隆出hEPO基因,并研制成功hEPO。1985年美国FDA批准rhEPO作为治疗肾性贫血的药物。*研制hEPO的主要环节包括:获得人促红细胞生成彗羞蹇和建立重组人促红细胞生成素的有效表达Ee、构建基因组噬萌体文库克隆EPO基因
4、血细胞中提取基因组DNA一BamHI酶切一回收酶切片段一插入噬茨体EMBL3载体中一构建基因组噬菜体文库一PCR方法从基因组模板中扩增EPO基因片段为探针一筛选完整EPO基因的插入片段一克隆*人工化学合成的方法获得EPO基因:对部份氨基酸序列进行修改*利用PCR技术扩增EPO基因,人胎肝中提取总mRNA一RT-PCR技术克隆hEPO基因*为了获得分子结构和生物学f天然EPO相似的hEPO,送用哺乳动物细胞表达系统,如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达系统、非洲绿猴肾细胞COS7表达系统、纠仓鼠股(BHK细胞表达系统。目前国内外首选CHO细胞表达系统用来表达生产hEPO。CHO细胞表达系统,CHO细
5、胞表达系统能准确进行转录后重组蛋白的加工修饰,糠基化蛇白在分子结构和生物学汪性方行与天然蜀自十分自属于成纤维细胞,很少分泓自身的内源蛋白,而表达的外源产物是胞外分泌的,这样便于产物的下游分离纯化;在CHO细胞内重组基回能高效扩增和表达,CHO细胞贴壁生长,日具有较高的耐受剪切和渗透压能力,可以迹行恬浮谊莽。“昆虫细胞表达系统、乳腺表达系统。胀功能衰竭所致的贫血:这种病只有靠连续输血维持生命,但输血又使病人面临病毒感染和血过量的危险。EPO右刺激红细胞生成,免去慢性肾衰竭病人的输血。*癌性贫血,肿瘤引起的贫血或接受化疗、放疗所引起的瓯血。*结缔组织病贫血,类风湿性关节炎和红斑狼疮所致的贫血。*量增生异常综合征贫血:促进骨髓造血状况改。hEPO在治疗各种因素所引起的贫血中疗效是肯定的,并且长期应用无毒性、无器官功能障碍、无过敏反应或抗体形成。但是也些副作用,塔常见的是血压升高,有的疾病治疗过程中还出现静脉血栓形成、出现高钾血疳、头痛、水滢留等。*应该特别逵谋,虽然使用促红细胞生成紧能描高约细胞的含量,可增强人体的机能,但长时间或大剂量使用会产生上述严重的副作用,千万不要将此药作为兴奋剂。国际奥委会早在20世纪80年代就已宣布运动员禁用EPO来提高运动成绩。但是近年来仍有一些运动员滥用hEPO,成为运动员中最为常用的兴奋剂之一。
