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1、 硕硕 士士 学学 位位 论论 文文 余甘子叶和桂圆抗老年痴呆病症余甘子叶和桂圆抗老年痴呆病症 药物原理的作用研究药物原理的作用研究 广西南宁广西南宁 研 究 生 ：研 究 生 ： 崔雯 导导 师师 ： 钟振国 教授 所 属 学 院 ：所 属 学 院 ： 药学院 专专 业业 ： 药理学学 研 究 方 向研 究 方 向 ： 神经药理学 完 成 日 期完 成 日 期 ： 2014 年 06 月 20 日 学 号：111047 学位类型：学术学位 分类号： R965 密 级： 公开 2 原原 创创 性性 声声 明明 本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下 独立进行研究所取得的成果。学位
2、论文中凡引用他人已经发表或 未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经 注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写 过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体， 均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 日 期： 关于学位论文使用授权的声明关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广西中医药大学有关保留使用学位论文的规定， 同 意学校保留并向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版， 允许 论文被查阅和借阅。 本人授权广西中医药大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保
3、存、汇编学位论文。 （保密论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名： 导师签名： 日 期： 日 期： 3 余甘子叶和桂圆抗老年痴呆病症药物原理的作用研究 中 文 摘 要 目的：目的：对余甘子叶和桂圆不同提取部位进行体外抗老年性痴呆 （AD）筛选，确定有效部位，并研究其抗AD相关药理作用。采用细胞 体外实验对药物提取分离部位进行体外筛选； 采用实验动物记忆行为 学指标探究有效部位对快速老化模型小鼠SAMP8记忆行为的改善作 用；探究其对SAMP8小鼠体内SOD、GSH-PX的影响，为研究和开发余甘 子叶和桂圆抗老年痴呆作用提供实验信息及科学依据。 方法方法 ：1.体外抗老年痴呆作用的研究：对中药余
4、甘子叶和桂 圆的有效部位进行体外筛选：采用 MTT 方法，直接体外给药测定中药 材有效部位对小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株细胞 PC12 增殖的影响，采用 25-35 片段损伤 PC12 细胞，造成体外细胞膜型，检测余甘子叶和桂 圆有效部位对小鼠 PC12 细胞的增殖作用，从中筛选出药效较强的有 效部位。 体外抗老年痴呆的作用研究：采用 MTT 方法，检测余甘子叶和桂圆 对25-35 片段损伤 PC12 细胞膜型的增殖作用 药物有效部位含药血清对体外25-35 片段损伤 PC12 细胞模型的影 响： 余甘子叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位含药血清对25-35 片段损伤 PC12 细胞模型均有比较明显的增殖作
5、用。10 %余甘子叶乙酸乙酯部 位含药血清和 10%桂圆水部位含药血清与空白含药血清比较，有显著 的意义 （P0.05） ，石油醚部位对 PC12 细胞没有药效，无任何促进或抑 制PC12细胞的作用；乙酸乙酯部位的与空白组相比有差异（P0.05） ；乙 酸乙酯部位对PC12细胞则有较弱的抑制作用，与空白组相比有显著性差异 （P0.05） ，实验 Hup-A 组高于模型组。 33 表8 乙酸乙酯部位迷宫适应性训练中各组小鼠的运动距离（ sx ） Table 8: Ethyl acetate parts of the maze adaptation between groups of mice i
6、n the movement distance（ sx ） 实验组别 N 运动距离（cm） 模型对照 8 2207.65 1357.43 正常组 8 3357.94 758.07 Hup-A 8 2712.32 567.99 高剂量 8 2645.23 781.46 中剂量 8 3145.72 978.99 低剂量 8 3001.79 815.09 表 9 水部位部位迷宫适应性训练中各组小鼠的运动距离（ sx ） Table 9: water parts of the maze adaptation between groups of mice in the movement distance
7、 （ sx ） 实验组别 N 运动距离（cm） 模型对照 8 2207.65 1357.43 正常组 8 3357.94 758.07 Hup-A 8 2712.32 567.99 高剂量 8 3203.42 956.98 中剂量 8 3123.41 798.12 低剂量 8 3074.23 220.69 3.33.3 定位航行实验定位航行实验 3.3.13.3.1 各组小鼠各组小鼠MWMMWM行为学参数行为学参数5 5 d d均值总体变化均值总体变化 5 d 均值总体变化潜伏期、 寻求次数、 停留时间的结果详见表 10， 表 11。 34 表 10 乙酸乙酯部位各组 MWM 行为学相关参数
8、5 d 均值总体比较（ sx ） Table 10: Ethyl acetate parts constituting the MWM behavior related parameters of the 5 d average overall comparison （ sx ） 实验组别 N 潜伏期（S） 寻求次数 停留时间（S） 模型对照 8 40.08 17.86 3.10 2.921 6.27 5.71 正常组 8 30.99 15.98 7.85 3.42 13.89 6.03 Hup-A 8 31.84 19.11* 7.35 3.52* 11.16 5.04* 高剂量 8 36.
9、51 18.78* 4.27 3.46* 11.00 6.92* 中剂量 8 34.12 19.76* 6.41 3.58* 12.55 3.30* 低剂量 8 33.38 20.01 6.24 3.46 7.10 4.01 注：与模型对照组相比，*P0.05） ，中剂量组和 Hup-A 组与模型组相 比有差异 （P0.05） ，Hup-A组与模型组比较有差异（P0.05） 。这表明高剂量 组、 中剂量组和Hup-A 药对SAMP8 模型小鼠的SOD水平具有保护作用， 能使 SOD 水平升高，具有增强机体抗氧化的能力。 （2）GSH-PX：由表 13 可知，桂圆水部位高剂量组和Hup-A 组通
10、过使 41 GSH-PX的水平升高使机体抗氧化能力增强。低剂量组与模型组比较有显著 性差异（P0.05） ，Hup-A组与模型组比较有差异（P0.05） 。 综上所述，桂圆水部位通过提高抗氧化酶 SOD、GSH-PX 水平起到清除 体内自由基，抗氧化，延缓衰老的作用。 4 4 讨论讨论 AD 患者的临床表现为相关行为能力障碍， 智力减退， 以及近期记 忆缺失，因此评价药物治疗效果及 AD 模型的重要指标之一，就是直 接客观的评价对学习记忆进行能力的改善作用 20,21。 4.4.1 1 对对 SAMP8SAMP8 小鼠学习记忆能力的改变小鼠学习记忆能力的改变 SAMP8 小鼠 22 ，23是由
11、日本的京都大学的教授经过 20 年近代的延 交培育而成，是目前研究老年性痴呆的较理想的模型，其快速的老化 自然产生与临床痴呆病症的渐进性的发生极为的相似 24,25。 虽然各实 验室采取不同的实验方法，但一般与正常老化的 R1 鼠相比，SAMP8 鼠在 8 月龄出现明显的学习记忆障碍是一定的 26。 在定位航行的实验 中显示造模使小鼠提取能力，加工的记忆存储能力均收到了严重受 损，小鼠的智能也发生严重的障碍 27，28。 4.24.2 药物有效部位药物有效部位部位组部位组对对 SASAMP8MP8 小鼠小鼠的的学习学习及及记忆记忆的能力的改善的能力的改善 余甘子叶乙酸乙酯部位：在小鼠的定位的航
12、行试验的 5 d 训练 中， 治疗的药物对模型组的小鼠的学习记忆的能力缺陷以及相关的行 为障碍，均具有不同程度上的改善的作用。其中的中剂量组的总体表 现明显的优于其他的各个给药组， 表现在 SAMP8 小鼠在逃避潜伏期上 的缩短，对逃避潜伏期的各个方面分析均较模型组差有差异；在停留 时间和寻求次数中的各天的成绩分析和成绩的提升的速率分析中表 明，中剂量组都优于其他各组。中剂量组组内训练成绩各天总体变化 较模型组明显。中剂量组总体表现与模型组相比在训练第 1 d 开始就 显示出优势，而且随着训练时间的延长，优势越来越明显；高、低剂 42 量组和 Hup-A 组较模型对照组在后 2、3 d 也显示
13、出优势。 综述， 余甘子叶乙酸乙酯部位的中剂量组的治疗对模型组的痴呆 小鼠在学习和记忆的能力上起到了一定的改善的作用。 桂圆水部位：在 samp8 小鼠的定位的航行实验的 5 d 训练中， 治疗的药物对模型组小鼠的相关行为障碍以及学习和记忆功能的缺 陷均具有不同程度上的改善的作用。 其中的高剂量组的总体表现在于 明显优于其他各个给药组，表现在 SAMP8 小鼠对逃避潜伏期的缩短， 在对逃避潜伏期各个方面的分析中均较模型组有差异； 在寻求次数和 停留时间各个的成绩分析以及成绩提升的速率分析表明， 高剂量组都 明显优于其他各组。 高剂量组组内训练成绩各天总体变化较模型组明 显。 高剂量组总体表现与
14、模型组相比在训练第 1 d 开始就显示出优势， 而且随着训练时间的延长，优势越来越明显；中、低剂量组和 Hup-A 组较模型组在后 2、3 d 也显示出优势。 综上所述， 可认为药物对快速老化痴呆小鼠模型的保护作用使其 学习记忆能力有改善作用。 桂圆水部位高剂量组的治疗对模型对照组 痴呆小鼠的学习记忆能力起到了改善作用。 4.34.3 药物抗氧化能力的影响药物抗氧化能力的影响 AD 是一种典型的神经系统退行性疾病，老化是中其最重要的危 险因素，其发病与自由基损伤有一定的相关性，因此 Markesbery 等 提出了 AD 发病的自由基学说 29,30。实验结果显示，余甘子中剂量组 和桂圆高剂量
15、组 SOD、GSH-PX 含量明显高于其他各组，Hup-A 组与模 型组比较具有比较明显的差异性，提示药物的有效部位对 AD 模型所 致的 SOD、GSH-PX 的水平低下是具有一定的保护作用的，能够增强一 些机体使其具有一定的抗氧化的能力， 而余甘子叶和桂圆的有效部位 则是通过清除生物体内的自由基从而发挥出其具有的抗痴呆的作用。 43 结结 论论 本课题通过体内外实验，结果显示： 一、体外实验显示余甘子叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位对A25-35建 立的AD细胞模型有防治作用，具有一定的促神经细胞增长活性。 二、 体内实验显示余甘子叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位能提高SOD、 GSH-PX含量发挥抗
16、氧化的作用，具有明显改善老年性痴呆小鼠SAMP8 的记忆行为的作用。 44 存在的问题存在的问题与展望与展望 在本课题研究中仍存在一些问题和不足， 在实验过程中耽误较多 时间造成一些不必要的浪费。 对 PC12 细胞的生长特性了解不够全面， 在其培养技术和方法存在较多问题。 今后还需从以下几个方面进行深入的研究： （1）更深入对余甘子 叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位进行分离提取， 寻找药理活性作用部位。 （2） 对余甘子叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位的抗老年性痴呆机制从体内 方面加以深入的研究； （3）探讨余甘子叶乙酸乙酯部位和桂圆水部位 药理作用的机制，更好地对其药理作用做出解释； 45 参考文献参考文献 1 国家药典委员会.中华人民共和
