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1、实验九、白血病的实验室诊断 （设计性实验）,北华大学医学院 血液检验教研室,实验目的 1、通过实验初步了解临床白血病的诊断和 鉴别诊断的步骤和流程。 2、熟悉血细胞化学染色的方法、结果判断 和临床意义。,实验安排,学生根据病例，设计实验室诊断流程,教师指导学生实验的选择、操作,学生根据实验结果，诊断疾病,教师总结实验,给出病例，病例讨论,病 例 某患者，男，27岁，近一个月经常小腿痛，三天前突然高热39.5，服药无效后前来就医，贫血貌，查体：口腔粘膜有溃疡，颈部有出血点，胸骨压痛，淋巴结肿大。,白血病典型的临床特征： 发热、贫血、出血、组织浸润,出血点,血常规,Hb ：67g/L WBC：96
2、109/L 涂片中有大量原始细胞, 占52%。 PLT ：75109/L,白血病的诊断鉴别诊断的步骤,结合临床症状,怀疑患者是白血病,血常规、血象检查,骨髓象检查,细胞化学染色,染色体检查,细胞免疫检查,骨髓活检,骨髓象检查,实验材料: 患者骨髓涂片 实验方法: 瑞氏染色 显微镜检查,步骤1,过氧化物酶染色 临床应用： 鉴别急性白血病类型 实验原理： 过氧化物酶可以使过氧化氢释放出新生态氧， 氧使无色的底物四-甲基联苯胺氧化成蓝色， 该物质又自行氧化成棕色或棕黑色化合物， 固定在酶存在的部位胞浆中。,步骤2,4-甲基联苯胺法,试剂 1、四-甲基联苯胺混合试剂： 取1% TMB乙醇溶液5ml，加
3、亚硝基铁氰化钠饱和溶液 50l，混匀。 2、稀过氧化氢（新鲜配置） 3、瑞氏染液 材料 患者新鲜骨髓涂片,操 作 步 骤 1、取新鲜干燥的骨髓涂片，滴加新配置的四-甲基联苯胺混合试剂0.5ml，1分钟。 2、再加稀过氧化氢溶液0.7ml，混匀，染色6分钟。 3、倾去染液，待干，瑞氏染液复染1520分钟。 4、流水冲去染液，待干，镜检。,注意事项,1、血片或骨髓片必须是新鲜的，否则，过氧化物酶活性会下降。 2、过氧化氢必须新鲜配置，浓度适当。 3、四-甲基联苯胺有毒，避免接触皮肤。,结果判断 1、阴性：胞浆中无棕黑色颗粒（如：急淋） 2、弱阳性：胞浆中细小的兰色颗粒，分布稀疏（如：急单） 阳性：胞浆中棕黑色颗粒稍粗，分布较密。 （如：急粒） 强阳性：胞浆中棕黑色颗粒粗大，密布整个胞浆。（如：急粒）,骨髓象,骨髓增生极度活跃，同一类原始细胞占90%以上，核染色质细致，有核仁。有些细胞胞体略小。其它系列受抑制，数量均减少。,实验小结,实验结果,过氧化物酶阳性： 颗粒稍粗，分布较密。,急性粒细胞性白血病,急性粒细胞性白血病未分化型(M1),原始细胞90%,病例诊断步骤,临床症状疑似白血病,血常规检查支持白血病,骨髓象检查诊断白血病,鉴别急性白血病类型,实 验 作 业,对病例进行诊断，写出诊断流程和依据。,思 考 题,如何鉴别急性白血病？,
