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1、1HOLC 法测定排石合剂中芍药苷的含量叶文慧 1 陈露雨 1 范丽梅 2 陈思 3 胡春玲 4 通讯作者:李晖 （广东省妇幼保健院 511400）摘要：目的 建立用高效液相色谱法测定排石合剂中芍药苷的方法。方法 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液（30:70)为流动相；检测波长为230nm。结果 芍药苷浓度在 5.94g/ml594g/ml 之间线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为 99.12%。结论 该方法简便，准确，重现性好。关键词：高效液相色谱；排石合剂；芍药苷；含量测定排石合剂由金钱草 鸡内金 地龙 白芍 川牛膝 元胡 泽泻 茯苓 滑
2、石 小蓟 桃仁 红花 甘草 车前子等 13 味药材组成，为我院自制制剂，有清热利湿，理气活血，通淋排石之功效；主治各种泌尿系结石。包括肾盏、肾盂、输尿管、膀胱结石。参考相关文献参 1-12 ，本实验选择芍药苷作为指标成分，采用高效液相色谱法对该制剂中主要药物白芍的含量进行研究，其结果可为该制剂建立完善的质量标准提供一定的参考依据。1 仪器与试药1.1 仪器：Agilent 1200 高效液相色谱仪（紫外检测器）；岛津 LC-20A 高效液相色谱仪（PDA 检测器）；Sartorius BT125D 电子天平 对照品及来源：芍药苷（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337）含量为
3、 94.9%。1.2 试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。1.3 排石合剂（聊城市中医医院，批号：20140825,20140826，,20140827）2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液（30:70) 为流动相；检测波长为 230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。 2.2 样品制备2.2.1 供试品溶液的制备：精密量取本品 2ml，置 10ml 量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。22.2.2 对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml含 60g
4、的溶液，即得。2.3 方法学考察2.3.1 最大吸收波长的确定取芍药苷对照品溶液，用 PDA 检测器进行全波长扫描，在 230nm 和276nm 处有最大吸收，参考相关资料确定检测波长为 230nm。见图 1。图 1 芍药苷紫外吸收光谱2.3.2 精密度试验2.3.2.1 重复性 同一均匀供试品，连续取样 6 份，照设定的方法分别测定含量。试验结果表明，该方法重复性良好。结果见表 1。表 1 重复性试验结果1 2 3 4 5 6取样量（ml）2 2 2 2 2 2RSD%含量（mg/ml ）0.2832 0.2871 0.2847 0.2864 0.2833 0.2859 0.6%2.3.2.
5、2 中间精密度 结果见表 2表 2 中间精密度试验结果1 2 3 4 5 6取样量（ml）2 2 2 2 2 2RSD%含量（mg/ml）0.2851 0.2837 0.2864 0.2835 0.2842 0.2828 0.5%32.3.3 准确度试验 取已知含量的供试品适量，加入适量芍药苷对照品，制成低、中、高三个不同浓度的供试品溶液各 3 分，分别测定其含量，计算回收率。试验结果表明，该方法准确度符合规定。结果见表 3。表 3 回收率试验结果取样量（ml） 加入量（mg ） 测得量（mg） 回收率1 0.0594 0.2016 98.9%低1 0.0594 0.2035 99.2%1 0
6、.0891 0.2355 99.3%中1 0.0891 0.2367 98.7%1 0.1188 0.2639 99.1%高1 0.1188 0.2652 99.5%2.3.4 线性和范围取芍药苷对照品，加甲醇制成标准系列，分别测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。试验结果表明，芍药苷浓度在 5.94g/ml594g/ml 之间线性关系良好。测定结果见表 4。表 4 芍药苷线性关系考察结果1 2 3 4 5 6浓度（g/ml）5.94 29.7 59.4 118.8 297 594峰面积 81.275 412.083 811.17 1628.125 411
7、7.306 8119.541响应因子RSD%响应因子f13.683 13.875 13.656 13.704 13.863 13.669 1.6%标准曲线方程A= 13.784C-0.6019 r =1.00002.3.5 耐用性试验分别考察流动相比例变化 5、流动相 pH 变化 0.2、柱温变化 5、流速相对值变化 20等影响因素，按上述色谱条件进行测试；结果表明，样品中芍药苷含量几乎不受影响，试验条件适用范围广。结果见表 5。 4表 5 各影响因素对试验结果的影响1 2 3 4 5 6 RSD%不同比例含量（mg）0.2831 0.2854 0.2827 0.2865 0.2853 0.2
8、846 0.9%不同 pH 含量（mg）0.2863 0.2855 0.2837 0.2862 0.2841 0.2838 1.2%不同流速含量（mg）0.2852 0.2849 0.2853 0.2874 0.2838 0.2864 0.7%不同柱温含量（mg）0.2864 0.2829 0.2837 0.2851 0.2832 0.2858 1.1%2.3.6 专属性试验取不含白芍的阴性样品，依法测定，实验结果表明，阴性样品无干扰；PDA 检测器记录的色谱峰纯度检查，峰纯度匹配度 1000，表明峰纯度符合规定，该方法专属性良好。见图 2-4。图 2 芍药苷对照品 HPLC 色谱图 5图 3
9、 阴性样品 HPLC 色谱图图 4 排石合剂样品 HPLC 色谱图2.3.7 样品稳定性试验取本品 6 份，按样品制备项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。分别于 0h、6h、12h、24h 各进样一次，测定供试品中芍药苷的含量，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。试验结果表明供试品溶液在 24 小时内稳定性良好，能够满足测定需要。结果见表 6。表 6 供试品稳定性试验1 2 3 4 5 6 平均值RSD%取样量 2 2 2 2 2 2 / /0h 含量 0.2834 0.2852 0.2874 0.2822 0.2829 0.2831 0.2857 1.4%6h 含量 0.283
10、7 0.2846 0.2870 0.2835 0.2854 0.2829 0.2834 0.7%12h 含量 0.2835 0.2839 0.2854 0.2842 0.2831 0.2854 0.2863 0.9%24h 含量 0.2839 0.2861 0.2855 0.2848 0.2836 0.2826 0.2833 1.5%2.3.8 三批样品测定结果取本品 3 批，分别取样测定，结果见表 7。6表 7 3 批样品测定结果样品 1 样品 2 样品 3取样量 2 2 2 2 2 2含量 0.2852 0.2847 0.2832 0.2829 0.2838 0.2846平均含量 0.28
11、50 0.2830 0.28423 讨论白芍为排石合剂中的主要药物，芍药苷系白芍中含量较高的成分，故芍药苷作为该制剂质量控制的主要指标，采用 HPLC 法测定该制剂含量。经对比不同检测波长下色谱峰的强度和分离度，确认该制剂中芍药苷在230nm 检测波长有最大吸收，且干扰峰少，样品峰能达到很好分离，保留时间为 13.7min 左右，据此选择 230nm 作为测定芍药苷的检测波长。在流动相的选择上经多次试验结果表明甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液（30:70)为流动相可以有效改善芍药苷峰形，抑制峰拖尾，理论塔板数符合相关要求，因此流动相选择甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液（30:7
12、0)。本方法操作简便，结果可靠，重现性好，可用于排石合剂的质量控制。参考文献：1中国药典2010 年版一部，s,北京；中国医药科技出版社，2010；7252张燕平,马跃,李淑平;高效液相色谱法测定少腹逐瘀颗粒剂中芍药苷的含量J;中国中药杂志;2001 年 04 期3王爱武,赵雪梅;高效液相色谱法测定当归散中芍药苷含量J;时珍国医国药;2001 年 05期4杨士友,孙备,黄世福,吕凌,田军;白芍中白芍苷提取和纯化工艺的研究J;安徽医药;2004年 01 期5张军平,冯广武; HPLC 法测定女金胶囊中芍药苷的含量 J;药品评价;2004 年 05 期6李勇军;何迅;刘丽娜;兰燕宇; 王爱民;王永
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