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1、2019/1/14,1,免疫测定(ELISA法）室内质量 控制 新疆肿瘤医院检验科 黄艳春,2019/1/14,2,质量控制方法是用来监测检验方法的 分析性能，警告检验人员存在的问题。检验过程的质量控制一般是通过检测质控品来实施。根据质控品的统计数值来判断检验结果的质量，以确定是否需要做系统的纠正，检验结果是否发出。,2019/1/14,3,作好室内质控的前提是：, 实验室设施、仪器设备及管理 理想的试剂和操作方法 人员培训,2019/1/14,4,实验室设施、仪器设备及管理,血清学实验室图示,2019/1/14,5,为保证仪器检测的质量，应规定其使用人员均需经过培训,经考试合格后方可上岗，每
2、个检验仪器应做到专人保管并有使用、维护和校准记录。,2019/1/14,6,酶标仪维护保养程序,2019/1/14,7,检验科离心机消毒记录 离心机名称： 年 月份 日期 周次 消毒操作内容 操作人 第一周 1、0.1%84消毒液擦洗离心机内外部及离心机盖一遍。 2、若出现明确污染，用0.5%过氧乙酸擦洗离心机内外 部及离心机盖两遍。 3、0.5%过氧乙酸浸泡离心机内试管套筒30分钟。 4、用清水擦洗离心机内外部及离心机盖一遍。,2019/1/14,8,检验科冰箱温度质控记录 冰箱名称： 温度范围： 年 月 日期 温度 1234567891011121314151617181920212223
3、2425262728293031 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 温度记录 负责人签名,2019/1/14,9,检验科温箱温度质控记录 温箱名称： 温度范围： 年 月 日期 温度 12345678910111213141516171819202122232425262728293031 38 37.5 37 36.5 36 35. 5 35 34.5 34 33.5 33 温度记录 负责人签名 备注,2019/1/14,10,仪器设备的校准方法,一、适用仪器：全自动酶免系统 二、校准项目：加样量；孵育温度；测量读数。 三、仪器型号和用户：全自动酶免仪、医院,2019/1/14,1
4、1,四、校准流程： 1、加样量 使用纯水，加样针加样量分别设置为10ul和100ul，用精密天平称重加样纯水的质量 ，换算为体积，重复试验10次，计算10次加样量的准确度和变异系数（CV值，），判断是否需要校准。 2、孵育箱温度 设定孵育箱温度为37，温度稳定后，用测温装置连续测定孵育箱的温度和微孔板温度梯度，并进行自动校准。 3、测量读数 使用标准测量板对读数进行测量并校准。 校准专用设备为原厂提供。 五、校准时间：年月日,2019/1/14,12,加样器（移液器）每年至少校准1 次，并做好记录。 方法：称重法校准，吸取刻度指定 量的水，万分之一天平称重后计算 吸取量是否准确，一般应在10
5、以内。,2019/1/14,13,仪器设备的校准周期,仪器设备 质控方法 频 度 失控标准 酶标仪及全自 预防性维护 每年2 次 不符合要求 动酶免分析系 及校准 统 恒温箱或恒温 温度检测 每次实验 不符合要求 设备 加样器及全自 校准 每年1 次 不符合要求 动加样设备,2019/1/14,14,理想的试剂和操作方法,按照试剂盒说明书操作即可吗? 操作中影响测定结果的关键环节 写出具有可操作性的SOP,2019/1/14,15,1.质检记录，商品试剂有药准字号 2.四种体外诊断试剂有“批批检”贴签 3.自配试剂及其校正必须符合SDA卫药政发（92）91号要求 ，在充分考虑质量的前提下，应尽
6、可能选用和检验仪器相配套的试剂。如使用其它商品试剂时应作相应的对照实验并有可行性的报告记录 4.有操作卡 5.应记录配方 6.校准验证记录 7.称量配制日期 8.配制、校准验证者签名,2019/1/14,16,人员培训,培训所涉及的范围:仪器设备使用、维护和校准；试 剂、方法原理；质量管理体系；相关法律法规、相关 领域的新技术、新理念和新进展；实验操作技能等。 如何培训：讲座、讨论、自学和参加培训班等。 培训的评估：书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等。 对培训者的评估：培训者的背景、资历、在相关领域 内的成就、所接受过的相关领域外部培训情况等。,2019/1/14,17,室内质控概念的
7、理解 质控品的选择 如何做质控图 质控规则如何选？,2019/1/14,18,质控品：定性测定的室内质控品，除了试剂盒附带的阴阳性对照外，实验室还应该选择至少2个室内质控品，其中一个为弱阳性质控品，接近Cutoff值，S/Co值应该为24之间（以乙肝表面抗原测定为例，建议用0.5ng的质控品）；另一个为阴性质控品。理想的质控品应为：人血清基质，无传染性；瓶间变异小，CV应小于1；冻干品解冻后的稳定性，28时不少于24小时，零下20时不少于20天；有效期应在1年以上；在一年内使用一个批号的质控品，便于比较结果。,2019/1/14,19,测定频度：每台仪器，每次检测患者样本时至少测定一次室内质控
8、品；ELISA测定每块板都要测定室内质控品。（加酶标版图）,2019/1/14,20,室内质控方法,最常用的是Levey-Jennings质控图，又称均值标准差质控图（XS),以监测分析的精密度 用弱阳性质控血清S/CO 值在天内、 天间反复测定20次，计算均值（X)、标准差（S）和变异系数(CV),绘制XS质控图，得到均值线（X)、警告线（X2S)和失控线（X3S)。,2019/1/14,21,均数 是算术平均数（arithmetic mean）的简称，总体均数用希腊字母表示，样本均数用拉丁字母 X表示，是一组变量值的数值上的平均，即算术平均数是获得结果之和除以结果个数。,2019/1/14
9、,22,标准差计算公式：,标准差表示结果分布的宽度在质量控制误差限（控制限），通常是建立在实验室自己结果的标准差基础上。,2019/1/14,23,变异系数（Coefficient of variation, 简记为CV）：是标准差与平均值之比用百分数表示。 变异系数计算公式为：,2019/1/14,24,质控图绘制,采用弱阳性质控品的S/Co值作质控图。,2019/1/14,25,质控判定规则：定性测定为弱阳性的质控品不能测定为阴性；阴性质控品不能测定为阳性。重复性的判断规则为1 2S（警告限），1 3S（失控限）。CV值要求国产试剂应25%，进口试剂的CV值应10%。 通常质控规则以符号A
10、L来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，L为控制限，通常用均 值或均值13SD来表示。 当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失 控。 常用的13S质控规则，其中1为原式中的A，3s为原式中 的L，表示均值3s，其确切的含义为：在质控测定值 中，如果有一个测定值超出均值3s范围，即可将该批 测定判为失控。,2019/1/14,26,质控判定规则 l2s 表示有1次控制结果超出均数2个标准差范围。,2019/1/14,27,13s：1个质控测定值超过X3s质控限.此规 则对随机误差敏感,2019/1/14,28,22s:2个连续的质控测定值同时超过X+2s或X-2s质
11、控限.此规则主要对系统误差敏感。,2019/1/14,29,R4s: 在同一批内最高质控测定值与最低质控测定值之间的 差值超过4s。此规则主要对随机误差敏感。,2019/1/14,30,41s: 4个连续的质控测定值同时超过X+ls或 X-ls。此规则主要对系统误差敏感。,2019/1/14,31,10X：10个连续的质控测定值落在均值(x)的同一侧。 此规则主要对系统误差敏惑。,2019/1/14,32,7T：7个连续的控制测定呈现出向上或向下的 趋势。,2019/1/14,33,小结,质控品：定性测定的室内质控品，除了试剂盒附带的阴阳性对照外，实验室还应该选择至少2个室内质控品，其中一个为
12、弱阳性质控品，接近Cutoff值，S/Co值应该为24之间（以乙肝表面抗原测定为例，建议用0.5ng的质控品）；另一个为阴性质控品。 测定频度：每台仪器，每次检测患者样本时至少测定一次室内质控品；ELISA测定每块板都要测定室内质控品。 质控图绘制：定性测定可采用弱阳性质控品的S/Co值作质控图。 质控判定规则：定性测定为弱阳性的质控品不能测定为阴性；阴性质控品不能测定为阳性。重复性的判断规则为1 2S（警告限），1 3S（失控限）。CV值要求国产试剂应25%，进口试剂的CV值应10%。,2019/1/14,34,失控情况处理及原因分析 -临床实验室质量控制的薄弱环节,（一）失控情况处理 如发
13、现质控数据违背了控制规则，操作者应填写失控记录或失控报告单。上交专业室主管(组长)。由专业室主管(组长)做出是否发出与失控质控品相关的那批患者标本检验报告的决定。,?,2019/1/14,35,(二)失控原因分析,失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误,如取错试剂、用错校准物、质控品有问题或失效。仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数不当等等。失控信号一旦出现就意味着与失控质控品相关的那批患者标本报告可能作废。此时。首先要尽量查明引起失控的原因，如果是假失控，可由权威人士决定、签字后发出报告。如是真失控，最好是纠正原因后，全部标本重作，质控品测定合格
14、后再签字发出。,2019/1/14,36,当得到失控信号时，可以考虑采用如下步骤去寻找原因： 1.立即重测定同一质控品 此步主要是用以查明是否为人为误差或偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内(在控)。如果重测结果仍不在允许范围，应进行下一步操作。 2.打开一瓶新质控品，重测失控项目 如果新开的质控血清结果正常，那么原来的质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。,2019/1/14,37,3.检查仪器状态 检查管路、进样系统和检测系统是否需要清洁。进行仪器的维护和保养，重测失控项目。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。 4.检
15、查试剂 是否为配套试剂？对使用非配套检测系统的实验室应评价系统的有效性并提供实验数据，尤其是测定异常标本时。如不是试剂问题，进行下一步。 5.用新的校准液重新校准仪器 建议使用配套校准物或校准实验室提供的定值新鲜血，若同时在常规工作中使用静脉和末梢血的要对两种模式进行校准，排除校准的问题。 6.与仪器厂家联系请求帮助 如果前五步都未能得到在控结果，可能是仪器出现了较大故障，应与仪器厂家联系请求他们的技术支援。,2019/1/14,38,当得到失控信号时,重做同一质控物（人为差错、偶然误差） 新开一瓶质控物（质控物使用、保管） 新开另一批号质控物（质控物使用、保管） 重新校准（校准错误） 进行仪器维护，更换试剂（仪器、试剂） 请专家帮助,2019/1/14,39,利用质控品进行质量控制的局限性,质控品价格昂贵 质控品不稳定 质控品可能显示出不同于患者标本的特征 通常其监测分析阶段，忽略分析前阶段,2019/1/14,40,失控原因 实验表现 S/Co值 处理方法 质控品因素 加入质控品量错误（多或少） 质控孔
