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1、 第 18卷 第 6期 医 学 研 究 生 学 报 Vol. 18 No. 62005年 6月 Journal of Medical Postgraduates Jun. 2005 论 著 白 细 胞 介 素 1 刺 激 脑 微 血 管 内 皮 细 胞 释 放前 列 腺 素 E2的 经 时 变 化郭 建 友 , 霍 海 如 , 赵 保 胜 , 刘 洪 斌 , 李 兰 芳 , 郭 淑 英 , 姜 廷 良(中 国 中 医 研 究 院 中 药 研 究 所 唐 氏 中 药 研 究 中 心 ,北 京 100700)摘 要 : 目 的 :探 讨 白 细 胞 介 素 1 ( IL21 )刺 激 体 外 培
2、养 的 大 鼠 脑 微 血 管 内 皮 细 胞 释 放 前 列 腺 素 E2 ( PGE2 )的 经 时变 化 。 方 法 : 30 ng/m l浓 度 的 IL21 刺 激 体 外 培 养 的 大 鼠 脑 微 血 管 内 皮 细 胞 ,分 别 于 刺 激 后 0. 5、 1、 2、 4、 8、 12和24 h收 集 细 胞 外 液 ,用 酶 联 免 疫 法 ( EL ISA)测 定 各 时 间 点 细 胞 外 液 PGE2含 量 ,并 对 各 相 应 时 间 点 的 内 皮 细 胞 进 行细 胞 计 数 。 结 果 : 空 白 组 内 皮 细 胞 计 数 值 随 时 间 延 长 而 持 续
3、性 增 加 , 12 h趋 于 稳 定 ; IL21 刺 激 组 细 胞 计 数 值随 时 间 延 长 也 相 应 增 加 , 12 h基 本 趋 于 稳 定 ,虽 各 时 间 点 细 胞 数 绝 对 值 略 少 于 空 白 组 ,但 两 者 无 统 计 学 差 异 ( P 0. 05)。 由 于 细 胞 的 不 断 生 长 ,空 白 组 PGE2含 量 也 在 不 断 地 增 加 , 12 h为 (10. 80 1. 46) pg/m l,达 最 大 值 , 24 h为 (9. 72 2. 78) pg/m l,有 所 下 降 。 加 入 IL21 刺 激 后 8 h,细 胞 外 液 PGE
4、2含 量 已 开 始 明 显 增 加 , 12 h为 (16. 93 2. 98) pg/m l,达 最 大 值 ,与 空 白 组 比 较 ,有 显 著 性 差 异 ( P 0. 05). A s rCMEC grew, PGE2 of control group increased constantly and reached thetop level (10. 80 1. 46) pg/m l at 12 h, then decreased to (9. 72 2. 78) pg/m l at 24 h. 8 h after IL21 addition, PGE2 of IL21 grou
5、p increased obviously. It reached the top level (16. 93 2. 98) pg/m lat 12 h, and has significant difference with control group ( P 0. 05)。表 2 IL21 刺 激 后 CMEC计 数 的 经 时 变 化 (x s, 1 104 /ml)Table 2 Cell number of IL21 stimulated rCMEC at differenttime point ( x s, 1 104 /m l)刺 激 时 间 点 ( h) 空 白 组 ( n =
6、 6) IL21 刺 激 组 ( n = 8)0. 5 10. 83 0. 85 10. 78 0. 801 12. 23 0. 71 12. 00 0. 872 13. 98 1. 12 12. 90 1. 204 15. 30 1. 59 14. 15 1. 418 17. 48 1. 54 16. 10 1. 2012 18. 85 1. 60 17. 48 1. 4224 18. 45 0. 97 17. 80 1. 333 讨 论VEC作 为 血 管 内 膜 的 主 要 结 构 ,在 创 伤 修 复 、血 管 生 成 等 一 系 列 生 理 和 病 理 过 程 中 起 重 要 作 用
7、 ,VEC的 研 究 已 经 成 为 当 今 生 物 学 、 医 学 研 究 的 热点 8 。 以 培 养 的 脐 静 脉 内 皮 细 胞 研 究 多 种 疾 病 的发 病 机 制 及 药 物 治 疗 的 靶 点 ,如 研 究 其 释 放 PGE2与发 热 的 关 系 已 见 有 报 道 4 。 但 CMEC作 为 血 脑 屏障 的 结 构 基 础 ,它 与 普 通 VEC (如 脐 静 脉 内 皮 细 胞 )相 比 ,具 有 内 皮 细 胞 紧 密 连 接 和 胞 饮 作 用 微 弱 等 特点 ,更 适 合 用 于 研 究 血 脑 屏 障 、 脑 血 管 疾 病 及 为 新 药筛 选 提 供
8、 实 验 模 型 。 在 研 究 发 热 的 中 枢 病 理 变 化时 ,与 脐 静 脉 相 比 , CMEC为 更 适 宜 的 研 究 对 象 。 在我 们 的 实 验 中 ,选 用 大 鼠 CMEC,用 内 源 性 致 热 因 子IL21 刺 激 ,观 察 其 释 放 PGE2的 经 时 变 化 ;同 时 考 虑到 由 于 细 胞 增 殖 使 空 白 组 PGE2含 量 也 会 相 应 发 生变 化 ,我 们 对 各 个 时 间 点 进 行 细 胞 计 数 。 结 果 显 示由 于 细 胞 的 增 殖 ,空 白 组 的 PGE2含 量 在 不 断 地 增加 ,当 细 胞 生 长 稳 定 后
9、 ,空 白 组 的 PGE2含 量 趋 于 恒定 。 CMEC在 加 入 IL21 刺 激 后 ,释 放 的 PGE2是 逐渐 升 高 、 而 后 缓 慢 下 降 的 过 程 ,其 中 12 h是 内 皮 细胞 释 放 PGE2的 峰 值 。 这 一 结 果 有 助 于 确 定 PGE2的最 佳 测 定 时 间 ,为 进 一 步 测 定 PGE2通 路 上 几 个 关 键酶 的 测 定 时 间 提 供 参 考 和 依 据 ,有 助 于 进 一 步 对 发热 机 制 的 研 究 和 探 讨 。国 内 学 者 多 认 为 环 磷 酸 腺 苷 ( cAMP)是 中 枢 发热 介 质 ,而 国 外 文
10、 献 多 认 为 是 PGE2。 从 PGE2受 体水 平 的 研 究 结 果 已 证 实 其 在 发 热 过 程 中 起 着 重 要 的中 介 作 用 9 。 本 实 验 观 察 到 在 IL21 刺 激 下 , CMEC释 放 PGE2具 有 经 时 变 化 的 过 程 ,表 明 CMEC参 与 构成 产 生 PGE2的 信 号 转 导 系 统 ,为 IL21 PGE2 发热 这 信 号 传 导 通 路 提 供 了 佐 证 。参 考 文 献 : 1 B latteis CM, L i S. Pyrogenic signaling via vagal afferents: whatstimu
11、lates their recep tors? J Auton Neurosci, 2000, 85 ( 123) :66271. 2 B latteis CM, Sehic E, L i S. Pyrogen sensing and signaling: oldviews and new concep ts J . Clin Infect D is, 2000, 31 ( Supp l5) : S1682S177. 3 Ivanov A I, Romanovsky AA. Prostaglandin E2 as a mediator of fe2ver: synthesis and cata
12、bolism J . Front B iosci, 2004, 9 ( 2 ) :197721993. 4 郭 甫 坤 ,李 亦 蕾 ,吴 曙 光 . NF B调 控 IL21刺 激 人 脐 静 脉 内 皮细 胞 合 成 PGI2 J . 细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志 , 2000, 16 ( 1) :41242. 5 王 建 春 ,毛 宝 龄 ,钱 桂 生 . LPS、 TNF2 、 IL21 对 人 脐 静 脉 内 皮细 胞 COX22表 达 的 影 响 J . 中 国 病 理 生 理 杂 志 , 2004, 20(2) : 1542157. 6 Baiguera S, Conc
13、oniMT, Guidolin D et al. Ghrelin inhibits in vitroangiogenic activity of rat brain m icrovascular endothelial cells J .Int J MolMed, 2004, 14 (5) : 8492854. 7 Defazio G, L ivrea P, GiorelliM et al. Interferon beta21a downreg2ulates TNF alpha2induced intercellular adhesion molecule 1 exp res2sion on
14、brain m icrovascular endothelial cells through a tyrosine ki2nase2dependent pathway J . B rain Res, 2000, 881 ( 2 ) : 2272230. 8 Nakas2Icindic E, Zaciragic A, Hadzovic A et al. Endothelin inhealth and disease J . Bosn J Basic Med Sci, 2004, 4 (3) : 31234. 9 Oka T. Prostaglandin E2 as a mediator of fever: the role of p rosta2glandin e ( EP) recep tors J . Front B iosci, 2004, 9 ( Supp l) :304623057.(责 任 编 辑 :李 风 华 ; 英 文 编 辑 :郭 联 庆 )505 第 6期 郭 建 友 ,等 白 细 胞 介 素 1 刺 激 脑 微 血 管 内 皮 细 胞 释 放 前 列 腺 素 E2的 经 时 变 化
