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1、第三章 热带兰繁殖,本章主要内容,热带兰普通无性繁殖技术 分株繁殖 扦插繁殖 切茎繁殖 高位芽繁殖 热带兰组培微繁 热带兰有性繁殖 热带兰种子特性 无菌播种繁殖 热带兰工厂化生产,第一节 热带兰无性繁殖,分株繁殖 将连接假鳞茎的匍匐茎分开或切断，然后分别繁殖的方法,a. 留用三,适用对象：复茎类热带兰 繁殖时间：植物休眠期后，新芽形成但是没有伸展之前。多为春季。也可在花后新芽未长出时。 分株操作：将匍匐茎切断，断面涂抹木炭粉或墨汁，防细菌感染。丛生类型的可以直接掰开。然后分别种植。,注意点： 兰头 ( 假鳞茎 ) 必须露出土面 , 不可埋在基质下 , 否则易烂头。 栽培基质勿压得太紧。若基质间
2、的空隙 太小 , 会引起烂根。 由于根系较多 , 种植时切勿强行屈折根系 , 应顺其自然 , 把植株向同一方向旋转。 换盆分株前基质宜稍干 , 以便脱盆 , 并可防止伤及根系 。 换盆后不应施肥，在盆底留空洞栽植法34 周后方可施肥。 分株用的刀具等应消毒。 每节至少两个假鳞茎。,特点 操作简单，成活率高，增株快，开花较早，确保品质特性等优点。 繁殖系数小,扦插繁殖 适用大多数合轴型或单轴型热带兰 繁殖材料 花后的假鳞茎（如春石斛） 花凋谢后的花序梗（如鹤顶兰属）,特点 方法简单，成活率高，繁殖系数较高，开花较早，确保品质特性等优点。 有一定限制，只适用于一些具有较长假鳞茎的种类。,切茎繁殖
3、单轴型兰花，如万代兰、火焰兰、蜘蛛兰等 将上部带叶茎段剪下另行栽植，而留下的“无头”母株在基部叶腋处可以萌发新的植株 特点 简单 成活率高 可保留原品系的优点 繁殖系数低,高位芽繁殖 多用于石斛类 当高位芽长出新根和兰头时，可分割下来种植。 蝴蝶兰花梗上具潜伏腋芽，适宜时也可产生小苗。,高位芽,蝴蝶兰的高位芽诱导 花后的花梗节间上用刀刻伤， 涂生根粉或稀释1万倍的吲哚乙酸， 约半月后高位芽出现，越到8周后行成完整芽。,第二节 热带兰组织微繁,热带兰组织培养历史 1902年, 德国植物学家G.Haberlandt发表植物细胞培养论文，提出植物细胞培养学说,认为单一细胞可以发育成为独立的个体; 1
4、922年,Kundson成功在含糖培养基上用种子培养出兰花幼苗,建立一套兰花种子无菌萌发的方法与培养基配方,此法为今后的杂交育种和兰花工业发展提供了必备的条件; 1935年,Cappellati认为,维生素C是兰花种子发芽所必需的.他进一步证实,兰花新鲜种子可以无菌萌发,但陈旧的种子需加入生长激素才能发芽;,以上Hos Burgeff, Kundson, Cappellati等人的研究结果被总结为:在适合 矿物质营养,可溶性糖和适宜的PH条件下,兰花种子可以无菌萌发.,1943年, White出版第一本组培专著植物组培培养手册,组培技术进一步普及; 1948年,美国科学家F.Skoog与崔澄发
5、现腺嘌呤或腺苷/生长素比例是控制芽和根形成的主要条件之一,完善了激素调控理论; 1949年,Gavino Roter首先地兰花组织培养获得成功,他将蝴蝶兰茎节接上于Kundson C培养基上获得再生苗; 1957年,Hans首次采用兰花茎尖为外植体培养获得成功,认为此法对兰花无性繁殖行之有效; 1958年,Steward实验证实细胞全能性假说.植物组培技术进入实用阶段;,1960年,G.Morel 进行了兰属(Cymbidium)的茎尖离体培养,实现了去病毒与快繁的两个目的.此种通过茎尖PLB再生植株,称为PLB再生方式.这一方式(技术)很快被欧美东亚许多国家的花卉生产企业所应用,实现了兰花工
6、业化生产,形成了特有的兰花工业,中国兰花组织培养历史回顾 1960年,吴应祥开始研究兰花种子无菌萌发; 1959年迄今,徐锦堂等人用共生菌萌发法解决兰科植物天麻的人工种植,取得举世瞩目的成就; 1973年,王熊用建兰,春兰,蕙兰,虎头兰等茎尖建立快繁无性系,获得再生植株,并首次报道诱导建兰根壮茎试管内开花; 1980年以后,国兰与洋兰的组培与快繁报道激增,热带兰组织培养实验室设计与设备 主要设备 超净工作台 高压灭菌锅 组织培养架 镊子、解剖刀等 玻璃器皿 其他，如天平、冰箱等,超净工作台,高压灭菌锅,组织培养架,实验室设计 化学实验室：放置组培所需的设备与药品，如冰箱、恒温箱、摇床等 灭菌室
7、 接种室：超净工作台、紫外灯等 培养室 缓苗区,灭菌室,接种室,培养室,热带组培主要概念 外植体 explant：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体 愈伤组织 callus：指植物细胞在组织培养过程中形成的无一定结构的组织团块，在适宜的条件下，愈伤组织可再分化，形成芽、根，再生成植株。 原球茎 PLB (protocorm-like body)：兰科植物种子萌发时不出现胚根,而是原胚的萌动和膨大,种皮一端破裂,突破种皮的胚呈小圆锥状,称为原球茎。在兰科的组织培养中也会出现类似的结构。,石斛原球茎,热带兰组织培养主要流程 配制培养基 灭菌 外植体采取与消毒 接种 不定芽
8、、愈伤组织、PLB的诱导 愈伤组织、PLB分化 增殖 长根 完整植株,培养基成分 大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 碳水化合物 植物生长调节剂 琼脂或其他支撑物 其他添加物，如活性炭、抗生素等,MS培养基成分,培养基灭菌 高压灭菌：121 ，20分钟 过滤灭菌：滤膜、注射器 培养基凝固,蝴蝶兰组织培养技术 茎尖和花梗组织培养,花梗腋芽或顶芽,诱导营养芽,不定芽,茎尖 根尖 嫩叶,剥离茎尖,增殖,生根,完整植株,PLB诱导,增殖,生根,完整植株,PLB诱导,增殖,生根,完整植株,茎尖组织培养,叶片组织培养,外植体 最好是试管苗的叶片 切取叶片上表面朝上放置 叶基部比叶中部繁殖率高，叶尖不能繁殖
9、 培养条件 初期1个月左右采用暗培养比较好 培养基 MS、kyoto、改良KC等,花梗节间培养,第三节 兰花种子繁殖,兰花种子繁殖历史 1838年,德国植物学家Schleiden发表植物发生论论文，提出植物细胞学说; 1840年,Link首先证实了兰科植物根部具有内生真菌; 1886年,Wahrlich对来自世界各地的500多种兰花进行研究,证实内生真菌普遍存在,并研究了真菌在寄主细胞内的消解变化;,1899年,法国Bernard发现兰花种子萌发需要真菌侵染,提出真菌共生萌发假说.并于1902-1909年,公布了这方面的成果,认为真菌能改进兰花种子和幼苗的营养状态,初步证实共生萌发假说. 19
10、00年,德国Hos Burgeff认为,真菌可侵染正常种子,他分离并命名了许多真菌,提出了真菌的消解是提供营养物质给兰花的重要途径的理论.他还研究了兰花根系被侵染的方式,指出多种兰科植物通过真菌获取碳源的增加与叶片面积减少是平行的,有时还伴有光合色素的减少;,以上的研究结果,发展与完善了当时的种子繁殖兰花的共生萌发法,并在许多兰花中得到应用. 1959年,Hos Burgeff出版发行兰花根菌专著; 1922年,Kundson成功在含糖培养基上用种子培养出兰花幼苗,建立一套兰花种子无菌萌发的方法与培养基配方,此法为今后的杂交育种和兰花工业发展提供了必备的条件;,1935年,Cappellati
11、认为,维生素C是兰花种子发芽所必需的.他进一步证实,兰花新鲜种子可以无菌萌发,但陈旧的种子需加入生长激素才能发芽; 以上Hos Burgeff, Kundson, Cappellati等人的研究结果被总结为:在适合 矿物质营养,可溶性糖和适宜的PH条件下,兰花种子可以无菌萌发.,兰花种子的特点 小 数量极多 由一百个细胞所构成的一团未分化的胚，它缺少一般种子具备的胚乳或子叶等贮藏养份的组织或器官，更缺少已分化完成的幼根及芽顶等 自然条件下与真菌共生才能萌发,A万代兰Vanda B上须兰Epipogum untans C血叶兰Haemaria discolor D坛花兰Acanthophippium sylhetense E通草兰Galeola lindleyana F通草兰（另一种）G.altissima G香荚兰Vanilla planifolia,无菌播种过程 果荚消毒 种子接种 原球茎诱导 原球茎增殖 完整小苗 出瓶,培养基 MS,1/3MS,改良KC 花宝培养基,第四节 热带兰工厂化生产,工厂化要素 大规模接种室 大面积组织培养室 用于炼苗的栽培设施 工厂化流程,
