《溯源性和标准化》ppt课件

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1、患者标本检验结果 的溯源性和标准化,冯仁丰,一、基本概念,溯源性,溯源性 traceability 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。VIM：1993，定义6.10,溯源性,临床检验的目的： 对患者新鲜标本检验报告可靠的结果。 临床检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求: 精密度：重复性好； 准确度：和参考方法具有可比性。,溯源性,临床检验公认：在参考实验室内，由具有认可资格的操作人员使用参考方法、或以参考品为标准，对新鲜标本进行的检测结果是

2、参考值结果。 参考实验室的所有参考方法是手工方法；或使用参考品校准的方法，在实现参考值的传递上非常烦琐。在日常检测中，无法使用这样的参考方法或参考品进行大量患者标本的检测，出报告。,溯源性,现实问题是：是否可以让常规的检测系统，对患者标本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。这就是通过一条不间断的比较链（方法学比较），使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准；或和参考方法检测值联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各组分（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化程序，实现溯源性。,标准化,1972年，由ISO出版TR

3、BSanders主编的标准化的目的与原理一书对标准化下的定义是：“标准化是为了所有有关方面的利益，特别是为了促进最佳的、全面的经济并适当考虑到产品使用条件与安全要求，在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”,标准化,和临床检验的实践和需求结合起来，可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商和临床实验室的所有努力，进行有序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。,标准化涉及的内容,严格的质量管理； 训练有素的人员； 良好的必要设备和环境要求； 所有开发、研制、生产的每个步骤都有具体明确的规程，并严格实施； 有详细记录； 每个产品有完整

4、文件资料，证实产品的性能、溯源性、使用要求、产品生产工艺、产品许可、包装和说明、技术支持、质量评估等。,理解临床检验的特点,1检验的检测对象是患者标本，而且一定绝大多数是新鲜的标本。实验室使临床和病人满意的是检验结果的可靠性。实现结果可靠性的质量管理有许多内容。在保证收集和处理的标本质量、在检验后不存在处理检测数据和发出报告的差错前提下，获得可靠结果的主要阶段是分析过程的质量。,理解临床检验的特点,2临床检验的习惯是对每份患者标本只做一次检测，就发出报告；而且，无法知道每个标本内究竟内含多少分析物。因此，度量检验的分析质量不能以工业上的多次采样、多次检测或测量、取均值和预定标准比较等方式来观察

5、。,理解临床检验的特点,3患者结果可靠性的含义是准确度。国际上准确度的定义为：检测结果和被检测物/分析物真值间的一致性。（VIM93-3.5）。注：a）作为结果，在真值和该值间的差异，通常表示为相同的计量单位；此时，表示差异的更确切的词为“不准确度”。b）可以使用“可接受的参考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11）c）特别是对每个标本只作一次测定时，差异不仅包括分析过程的不准确度，也包括了分析过程的不精密度。NCCLS,理解临床检验的特点,4检验质量的首要问题是分析过程（即检测的）精密度。定义为：各个重复检测值间的一致性。度量精密度的指标是不精密度。也即：临床要求结果的重复性好。

6、自动化分析仪的推广应用，极大地改善了检验中不精密度的水平。提高了检验的效率。 因此，获得检测结果的可靠性关键成为分析过程的不准确度。,理解临床检验的特点,5.认识到保持检验必需的自动化仪器、试剂、校准品、和操作程序的固定组合，是实现溯源性的前提。否则，一事无成。因此，要使检验结果的量值和参考系统结果一致，也就是对涉及检验的检测系统各组分的标准化。,理解临床检验的特点,6.完成检验所需要的仪器、试剂、校准品、和操作程序的组合为检测系统。 只有使检测系统的组合固定下来，才能使检验结果具有明确的性能。 实现检验结果溯源性的重要前提，也只能在检测系统中予以体现。,检测系统的要素,检测系统的要素,校准品

7、,试剂,分析仪,理解校准品,1衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点： 不精密度、 不准确度、 患者结果可报告范围、 分析灵敏度。,理解校准品,使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高；在优良试剂盒的配合下，患者结果的可报告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。这样，结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品值的调节。因此，实现新鲜患者标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。,理解校准品,2标准品 传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品(Standard)。 标准品的定值由称量和容积计算确定。检定不合格即报废，决不可将实测值

8、替代修正。,理解校准品,3校准品和定值 为了克服因纯标准液和患者样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与患者样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。,理解校准品,可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。,理解校准品,（1）校准值随方法而异 校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能倚赖于分析方法。校准品的校准值必须取决于分析方法或检测系列。,理解校准品,（2）新鲜患者标本是最佳校准品 须明确的，所有用于

9、检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测患者新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。,理解校准品,使用校准品的目的，是使检测系统对患者标本检测结果，实现溯源性。(在计量单位一致的前提下，检验结果的量值和参考系统对患者标本检测的结果量值具有可比性。） 校准品定值方案在系列标准化内容中，是一个最突出的课题。 实现患者结果的溯源性，必须在校准品定值过程中，自始至终使用患者新鲜标本。 坚持使用方法学比较实验，反复传递和验证结果的可靠性。,标化,校准品标准化的 大致内容和步骤,实现溯源性的必备条件,1建立“公司一级参考品”：准备多个混和血清，经离心、过滤等处理后，各个混和血清分装成小包装。-7

10、0保存。试验说明，这样保存的血清复融后具有的性能和新鲜血清相似。由参考实验室使用参考方法，或采用参考品对这些血清定值，使血清具有参考值。所以，这些血清组是产品标准化的“一级参考品”。,实现溯源性的必备条件,对“公司一级参考血清”的参考值定值，选择国际上知名的参考实验室委托定值。这些参考实验室在国际上的数量很少，每个实验室只是对某一个或几个项目接受定值委托，费用昂贵。但是，这是校准品定值的依据。,2设立公司内部使用的“一级校准品”：由于参考系统或参考材料的使用常常是很有限的，因此，必须设立内部使用的参考系统（或材料）复制品即设立厂商一级校准品（Master Calibrator）。,实现溯源性的

11、必备条件,除了一级校准品外，还需要建立生产用的应用校准品（Working Calibrator）、日常供应的校准品为商品校准品（Business Calibrator）。所有各种校准品的原料要求和加工制备工艺一样。只是在定值方案上有区别。,实现溯源性的必备条件,3自始至终以方法学比较实验为确定、验证、或传递定值的手段。因此，除了上述的混和血清组外，随时还需要实际的新鲜患者标本，供方法学比较用。,实现溯源性的必备条件,4确定定值的实验室：按照德国法律规定，为Roche诊断公司控制品和校准品确定定值的实验室，遵从法律上接受委托的质量导则和管理要求，所以完全符合专业实验室的规定。选择合适的实验室是定

12、值质量的先决条件。,实现溯源性的必备条件,5确定公司产品对患者标本检测结果可溯源的参考方法或参考品。 （和什么参考系列比较？）,实现溯源性的必备条件,校准品的溯源性依据（示例）,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,1参加定值的实验室数量：在上世纪的80年代，德国诊断厂商协会（German Diagnostics Manufacturers Association, VDGH）依据大量研究，提出一个高效而可靠的定值测定模式。“VDGH模式”要求每个校准品每个项目的结果至少由6个实验室各做5个天间样品的测定。,要求每个实验室同时进行“未知控制品”的检测。只有负责靶值设定的Roche诊断公司

13、，知道“未知控制品”的定值。所有被评估的参加实验室必须能“回收”这个值。 各实验室同项目的精密度不一；而且数据分布不呈正态分布。因此，确定靶值的做法是：将所有实验室结果合在一起，去除5的极值后的中位数为定值。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,2公司一级参考品和一级校准品的标准化 患者样品总是使用于参考标准化中。始终使用单一献血员血清或混合血清。 这些人来源的样品或者直接用参考方法检测；或者在罗氏诊断分析系统上，经参考品校准后检测得到参考值。以后它们作为参考血清组（公司一级参考品）服务于公司一级校准品校准值的定值。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,在参考标准化中为了避免未

14、处理过人样品稳定性问题，单个供体样品只使用一次。混合人血清的参考方法值最多被认可6个月（-70 保存） ；需要重新用于参考标准化时，应重确定。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,公司一级校准品的基体大致和各批市售校准品（常规校准品）相当；另外，这些一级校准品储存于-70，并定期检查稳定性。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,几乎所有的分析物，确定溯源性的程序归纳如下：用参考方法、或以参考品为校准品，对人血清的检测。公司一级校准品以这些参考方法值标准化。市售校准品和控制品则以公司一级批号校准品（真实性控制）在罗氏诊断分析系统上作校准。这样保证了在这些系统上确定的患者结果值的溯

15、源性。每个分析仪平台（罗氏/日立、COBAS INTEGRA）对每个方法各自都以相同方式，按照该参考系统程序标准化。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,校准品定值的两种方式： 相对于参考方法的标准化（有公认的参考方法和/或参考品）； 相对于参考品的标准化（没有公认的参考方法，但是有公认的参考品）。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,参考方法示例,总胆固醇测定 确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法； 参考方法为改良Abell-Kendall方法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）； 常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物

16、酶、Trinder显色终点法）。 美国NIST建立的标准参考品有： 纯胆固醇SRM911；冻干人血清SRM909。,相对于参考品标准化示例,14种特定蛋白测定 公认参考品为CRM470。 可以适用的检测方法为：放射免疫扩散、免疫透射比浊、和免疫散射比浊。 没有指定这些项目的参考方法。,（1）相对于参考方法的参考标准化 测定参考方法值，如ID-MS参考方法，一定要在认可的参考检测实验室，如ZRI（Reference Institute of Bioanalysis）以参考方法作检测，每次对使用的510个混合血清检测，但是检测费用非常昂贵。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,每个混合血清由约100个供血员血液组成。混合血清中的各个分析物浓度或活力，尽可能分布于整个相应的检测范围。混合血清内不可添加任何处理过的材料，也不可用氯化钠溶液稀释。以确保在参考标准化中使用的样品，和天然的患者血清没有任何差别。另外，使用天然的人材料，能对出现在校准品的任何基体效应进行补偿。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,系