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1、体外诊断试剂生产和质量控制要点,主讲人:顾燕黎 上海科华生物工程股份有限公司,体外诊断试剂产品介绍,一酶联免疫诊断试剂产品 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 二快速诊断试剂产品 人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法） 三PCR核酸诊断试剂产品 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 四临床化学诊断试剂产品 葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）,一.酶联免疫诊断试剂产品,【产品名称】 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 【包装规格】 96人份/盒 【预期用途】 本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或血浆类标本。,酶联免疫法反应原理,双抗体
2、夹心法,双抗原夹心法,抗-HBs,抗-HBs-HRP,HBsAg,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）的原理,采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。,试剂盒组份,主要生产设备,生产工艺流程图,合并,分装,纯化,包被,结酶,纯化,配制,配制,配制,抗-HBs血清,酶标用抗-HBs,抗-HBs-HRP,酶结合物,反应板,包板用单抗-HBs,单抗-HBs腹水,正常人血清、阳性
3、血,阴、阳性对照,显色剂、终止液、洗涤液,TMB、硫酸、吐温20,成品,半成品,滴配,半成品检定,成品检定,外购原辅料控制,原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。 采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品的质量产生不良影响。,自制主要原料生产和质量控制要点,工艺用水 抗原 抗体 酶标记物,基因工程HBsAg生产和质量控制要点,基因工程HBsAg质量标准,效价： ELISA 纯度：采用SDS-PAGE 功能性实验 ：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性 蛋白浓度：用双缩脲法测定,单抗-HBs生产和质量控制要点,单抗-H
4、Bs质量标准,纯度 ：采用SDS-PAGE法 蛋白含量 ：采用Lowry法 效价 ：ELISA效价 功能性检测：免疫活性、稳定性,多抗-HBs生产和质量控制要点,多抗-HBs的质量标准,纯度 ：SDS-PAGE法检定 蛋白含量 ：Lowry法 效价 ：对流电泳法测定效价 功能性检测：免疫活性、稳定性,多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点,辣根过氧化物酶质量标准,溶解性 ：应符合要求 PH值 ：应符合要求 活性测定 ：应符合要求 RZ值：应3.0,多抗-HBs-HRP质量标准,免疫活性 稳定性试验,反应板制备生产和质量控制要点,反应板制备,包被液配制 质量控制点：包被缓冲液pH 测定方法：用p
5、H计测定,反应板制备,反应板的包被 质量控制点：包被液量的准确性 要求：100l/孔 操作： 将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。 连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。,反应板制备,反应板的包被 质量控制点： 反应板包被放置的温度及时间的控制 要求： 2-8冷库包被过夜。 操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注明产品名称、批号和时间，放入2-8冷库包被过夜。,反应板制备,反应板的洗涤、加封闭液
6、质量控制点：液量的准确性 要求: 洗板液量：200l/孔 封闭液量：250l/孔,反应板制备,反应板的封闭 质量控制点： 封闭温度：370.5 封闭时间：2小时 操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。,反应板制备,反应板的抽干 质量控制点：抽干机的真空度、温度 要求： 真空度：低于100Pa，维持4小时以上 温度：202,反应板制备,铝箔袋的热封 质量控制点： 房间的湿度：40% 铝箔袋的密封性： 端面刀封温度2105 中封刀封温度2105 操作： 房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开
7、去湿机进行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。 铝箔袋的密封性：在线袋袋检。,反应板制备,反应板的抽检 质量标准： 阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阳性。 阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阴性。 最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定， HBsAg adr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。 精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%）应不高于15%（n=10）。,阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点,阴、阳性血清的灭活,要求： 灭活时间：1小时 温度：60 操作
8、：将血清置水浴箱内。随时注意测量血清温度，当血清温度到达60时，开始计时至规定时间止。,阴、阳性对照的配制控制,阴性对照的配制 质控点：阴性对照OD值 要求：OD值0.050 阳性对照的配制 质控点：阳性对照OD值 要求：OD值1.000,通用试剂制备的生产和质量控制要点,显色剂B的配制,质量控制点： 1 溶液配制的准确性 用pH计测定溶液pH值应符合要求 用电导率仪测定溶液电导率应符合要求 2 配制、分装环境：避光 3 配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装,显色剂A的配制,质量控制点： 1溶液配制的准确性 用pH计测定溶液pH值 用电导率仪测定溶液电导率 2配制后溶液存放：72小时内进
9、行分装,终止液的配制,质量控制点： 溶液配制的准确性： 用婆美计测定溶液的比重应符合要求,洗涤液的配制,质量控制点： 溶液配制的准确性 用pH计测定溶液pH值 用电导率仪测定溶液电导率,酶结合物制备生产和质量控制要点,半成品检定质量标准,物理检查 试剂空白 阴性对照 阳性对照 阴性参考品符合率 阳性参考品符合率 最低检出量 精密性 稳定性实验 :,试剂的分装、贴签生产和质量控制要点,除菌过滤 质量控制点：过滤膜的起泡点实验 要求：滤器灭菌12130分钟；0.22m滤芯泡点3.5bar,分装,质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性 要求： 分装液量应大于等于标示量 ； 分装好的试剂瓶应无漏液现
10、象。,贴签,质量控制点：批号打印的准确性 要求：批号等打印正确、清晰 操作： 贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、平整等。 合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。,合并包装生产和质量控制要点,成品检定质量标准,物理检查 试剂空白 阴性对照 阳性对照 阴性参考品符合率 阳性参考品符合率 最低检出量 精密性 稳定性实验,成品入库,入库 控制点：产品放行报告；入库数 要求： 凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告中所报数量一致。,P2生物安全实验室管理,人员卫生 进入P2实验室必须加穿洁净防护服
11、，带一次性乳胶手套和一次性口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。 生物安全柜 实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。 消毒及灭菌 所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消毒处理，能高压的选择121高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废物塑料袋中。 实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好标识，建立台帐。,二.金标产品,【产品名称】 人类免疫缺陷病毒(HIV
12、1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法) 【包装规格】 50人份/盒 【预期用途】 本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体的快速检测。,金标产品检验原理,本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗体等，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。 若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原HIV抗体HIV包被抗原”复合物而凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV
13、抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。,主要组成成份,HIV(1/2)抗体胶体金试纸条/板 50 Tests 样品稀释液（磷酸盐缓冲液） 1瓶4.0ml/瓶 说明书 1份,金标产品主要生产设备,金标产品生产工艺流程图,氯化金,胶体金,标记抗原 HIVgp36 HIVgp160,金标记抗原,金反应垫,烧金,标金,喷金,干燥,包被抗原 HIVgp36 A抗原,检测线包被液,抗HIVgp160单抗,质控线包被液,配制,配制,反应膜,划膜,干燥,试纸大板,组装,试纸条,切割,试纸板,封装,氯化钠等,配制,样品稀释液,待检成品,合并,出厂成品,检定,滴配,滴配,检定,半成品检定,半成品检定,成
14、品检定,分装、帖签,物料,质控点,工序,关键工序,gp160抗原制备的生产和质量控制,gp160抗原质量标准,物理性状：为澄清溶液 纯度：采用SDS-PAGE 分子量 ：免疫活性 稳定性,gp36抗原制备的生产和质量控制,gp36抗原质量标准,纯度 分子量 功能性试验 稳定性,gp41抗原制备的生产和质量控制,gp41抗原质量标准,纯度：采用SDS-PAGE法检定应符合要求 分子量 功能性试验 稳定性,抗HIV单抗制备的生产和质量控制,单抗质量标准,纯度 分子量 功能性检测 稳定性试验：37放置15天，检测上述标本，可达到上述功能性检测标准。,金反应垫制备的生产和质量控制要点,金反应垫的制备,
15、胶体金的制备 控制点：胶体金颜色、波长的控制 要求： 胶体金颜色：红色； 波长：5284nm,金反应垫的制备,金标抗原的制备 质量控制点：GP160和GP36抗原标记时 pH值、颜色、波长的控制 要求：用PH计测定，pH值：6-7； 颜色：红色 波长：5334nm,金反应垫的制备,滴 配 质量控制点：金标抗原的灵敏度和特异性 要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品 测定方法：适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。用HIV快速诊断试剂国家参考品检验，应符合要求。,金反应垫的制备,喷 金 质量控制点：包被液量的准确性 要求：2l/mm 方法： 将待包被的玻
16、璃纤维放置于面板，开始包被，每张玻璃纤维应用目测法检查加液是否完整。连续5张玻璃纤维检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100张金反应垫应抽1张作过程检查。,金反应垫的制备,金反应垫的抽干 质量控制点：真空度、时间的控制 要求： 真空度：低于100Pa 时间：维持2小时以上,金反应垫的保存 质量控制点：金反应垫的存放 要求：避光、干燥（湿度30% ） 操作： 用目测法检测保存金反应垫的铝箔袋的密封性。 存放金反应垫的干燥柜 每天监测湿度2次。,金反应垫的制备,金反应膜制备生产和质量控制要点,金反应膜制备,质控线包被液的配制 控制点： 包被缓冲液pH值及包被浓度 要求： 包被缓冲液pH值：用pH计测定 包被浓度：用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求,金反应膜制备,检测线包被液的配制 质量控制点： 包被缓冲液pH值及包被浓度 要求： 包被缓冲液pH值：pH计测定 包被浓度：用核酸
