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1、NY 82.15 1988 中华人民共和国农牧渔业部部标准 果汁测定方法 胡萝卜素的测定 NY 82.15 1988 本标准等同采用国际果汁联盟 IFJU 分析法。No.44(1972)总类胡萝卜素和 胡萝卜素的测定。 1 原理 利用甲醇石油醚将果汁中的总类胡 萝卜素抽提出来,经氧化铝柱层析 ,使 胡萝卜素与其它色素分离,将洗脱液于 450nm 波长处进行比色测定。 2 试剂 2 1 甲醇(京 Q/HG 10 1506 1976) :分析纯。 2 2 石油醚: ( HG 3 1003 1976) :分析纯,沸程 60 90。 2 3 硫酸钠( GB 639 1977) :分析纯。 2 4 石英
2、砂:过筛,用浓盐酸浸泡,除 去铁质,再以稀氨水浸泡,最后用蒸馏水冲洗至中性,烘干备用。 2 5 氧化铝( HGB 3413 1962) :分析纯,用 8%水使部分失活。 2 6 标准 胡萝卜素溶液: 溶解 20mg 胡萝卜素于少量氯仿中, 用石油醚 ( 2.2) 稀释至 50mL, 用时吸取 2mL 再以石油醚稀释至 100mL,浓度为 8g/mL。 注:用氧化镁代替氧化铝,效果也很好。 3 仪器 3 1 分析天平:感量 0.0001g。 3 2 分光光度计。 3 3 层析柱: 2 ,L25 的层析柱。 3 4 分液漏斗: 250mL。 3 5 过滤器。 3 6 真空浓缩器。 3 7 容量瓶:
3、 50mL、 20mL。 3 8 移液管: 5mL、 10mL、 25mL。 4 测定程序 4 1 提取 准确称取 10g 果汁于烧杯中,加入 30 40mL 甲醇和石油醚溶液( 1 1) ,搅拌,过滤。转移滤液至分液漏斗 中,加入甲醇和石油醚溶液( 1 1)重复提取,直至石油醚相呈无色。 4 2 洗涤 加蒸馏水 100mL 于分液漏斗中, 旋摇使提取液中的甲醇溶于水中, 静置澄清,放掉下面含有甲醇的水层。经反复洗涤,直至提取液中的甲醇与石油醚完全分离。 加入无水硫酸钠干燥石油醚层,然后过滤到 200mL 容量瓶中,用石油醚洗涤硫酸钠,洗涤液并入容量瓶中,再用石油醚稀释至刻度。 4 3 浓缩
4、中华人民共和国农牧渔业部 1988 01 27 发布 1988 08 01 实施 中华人民共和国农牧渔业部 发布 实施NY 82.15 1988 取 175mL 提取液真空浓缩至 5mL 左右。 为清除痕量残留的甲醇, 再取 10mL石油醚,真空浓缩至 2 3mL。重复两次。 4 4 柱层析及洗脱 层析柱中, 氧化铝的填充高度为 8 。 先用 8%的水使部分失活。 再加入纯石油醚,当石油醚流出至液面刚好填过氧化铝层为止。将浓缩提取液加入层析柱中,使各种色素在柱上逐渐分离,而石油醚淋洗液则由下端流出。 当加入约 25mL 石油醚后, 胡萝卜素馏分便到达柱子的下限。此时,可再加入 25mL 石油醚
5、淋洗, 将馏出液收集在 25mL 量筒中, 转移至 50mL 容量瓶中, 并用石油醚洗涤量筒数次, 合并洗涤液 于容量瓶中, 最后用石油醚定容。 4 5 比色测定 标准曲线的绘制:用浓度为 8 g/mL 的标准胡萝卜素溶液配制成一系列浓度为 0.2、 0.4、 0.8、 1.2、 1.6、 2.0、 2.4 g/mL 的石油醚溶液,用纯石油醚作空白, 用 1cm 比色皿, 于 450nm 波长处测读吸光值。 以吸光值为纵坐标, 浓度为横坐标,绘制标准曲线。 用同样方法测读提取液的吸光值。从标准曲线中查出其含量。 5 结果的表示和计算 胡萝卜素的含量表示为 mg/100mL 试液,取两位小数。对浓汁应表示为 mg/100g 试液,取两位小数。 附加说明: 本标准由北京农业工程大学负责起草。 本标准主要起草人:张坤英。 中华人民共和国农牧渔业部 1988 01 27 发布 1988 08 01 实施 中华人民共和国农牧渔业部 发布 实施