活性污泥总dna提取方法

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(1)所加的提取缓冲液终浓度: Sodium phosphate buffer 100 mM pH8.0 Tris-HCl 100 mM pH8.0 EDTA 100 mM pH8.0 CTAB 1 (w/v) NaCl 1.5 mol/L (2) 提取步骤: 配制 10 ml 提取缓冲液; 取 0.6ml 样品均分到三个 2ml EP 管,10,000 rpm 离心 10 min; 倒去上清液, 然后加入 2ml 提取缓冲液, 吸打混匀, 在液氮和 65 水浴中反复冻融三次; 加入溶菌酶(终浓度 1 mg/ml)和蛋白酶 K(终浓度 0.2 mg/ml),37温 浴 30 min,最后加入终浓度为 2的 SDS,混合均匀; 在 65 水浴中放置 60 min,期间每 10 min 颠倒混匀一次; 处理后的样品 10,000 rpm 离心 10 min,将上清液转移到另一个干净 的 EP 管(注意勿将沉淀物带入); 在上清液中加入等体积的氯仿, 上下颠倒 EP 管混匀, 10,000 rpm 离 心 10 min,重复一次; 取上清到另一个干净的 EP 管,加入 0.6 倍体积的异丙醇,混匀, 10,000 rpm 室温离心 10 min,弃上清; 75乙醇洗涤沉淀块两次,在室温下自然干燥,用适量灭菌双蒸水 溶解,20 冰箱保存。 0.8%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 质量。

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