实验诊断学课件教学

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1、实验诊断学课件教学,牡丹江医学院检验系 实验诊断学教研室,第八章 临床常用免疫学检查,第一节 血清免疫球蛋白检测,第二节 血清补体检测,第三节细胞免疫检测,第四节 肿瘤标志物检检测,第五节 自身抗体检测,第六节 感染免疫检测,第一节 血清免疫球蛋白检测,免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌；存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。Ig因其功能和理化性质分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类,第一节 血清免疫球蛋白检测,本节重点及习题,一、免疫球蛋白G检测,二、免疫球蛋白A检测,三免疫球蛋白M检测,四、免疫球蛋白E检测

2、,五、血清M蛋白检测,一、免疫球蛋白检测 免疫球蛋白G(IgG)为人体含量最多和最主要的Ig 占总免疫球蛋白的70-80 对病毒、细菌和寄生虫等都有抗体活性 是唯一能够通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。,临床意义 1生理性变化：孕期22 28周间胎儿血IgG浓度与母体血浓度相等，出生后母体IgG逐渐减少，随后逐渐增加，到16岁前达成人水平 2 病理性变化 IgG 增高 是再次免疫应答的标志。常见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、感染以及自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎等,参考值7.016.6g/L,单纯性IgG增高:主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多发

3、性骨髓瘤(MM),可见到IgG、lgA、lgD或IgE增高 IgG降低2.IgG降低 见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病 也见于重链病、轻链病、肾病综合征、病毒感染和免疫抑制剂患者。 儿童较成年人低，女性稍高于男性,二、免疫球蛋白A检测 免疫球蛋白A(IgA)分为血清型以与分泌型IgA(SIgA)两种。前者占血清总Ig的1015,后者在外分泌系统中有更重要的免疫功能 呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴样组织合成大量的SIgA SIgA与这些部位的局部感染、炎症或肿瘤等病变密切相关。,参考值 成人血清IgA为0.73.5g/L SIgA 唾液平均为0.3g/L 泪液为30 80g

4、/L 初乳平均为5.06g/L 粪便平均为1.3g/L,临床意义1 生理性变化 随年龄增加而增加，到16岁前达成人水平 病理性变化 IgA增高:见于IgA型MM、SLE、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹和肾脏疾病等 2.IgA降低:见于反复呼吸道感染、非 IgA型MM、重链病、轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。,三免疫球蛋白M检测 免疫球蛋白M(IgM)是分子质量最大的Ig,约占血清总Ig的510 IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子 天然同族凝聚素(抗A、抗B)、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类 参考值 成人血清IgM 0.5 2.6g/L,临床意义 生理性变化 从孕20周起，

5、胎儿自身合成大量IgM，胎儿和新生儿IgM浓度是成人水平的10，8-16岁前达成人水平 病理性变化 IgM增高:见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等 单纯IgM增高提示为病原体引起的原发性感染 ，若脐血中IgM0.2g/L时，提示宫内感染 此外,在原发性巨球蛋白血症时,IgM呈单克隆性明显增高 2.IgM降低:见于IgG型重链病、IgA型MM、先天性免疫缺陷症、免疫抑制疗法后、淋巴系统肿瘤和肾病综合征等,四、免疫球蛋白E检测 免疫球蛋白E为血清中最少的一种Ig,约占血清总Ig的0.002 它是一种亲细胞性抗体 与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关 参考值ELISA法为0.10.

6、9mg/L,临床意义 生理性变化 婴儿脐血IgE水平很低，12岁时达成人水平 病理性变化 IgE增高:见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿关节炎，以及各种过敏性疾病 如异位性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、间质性肺炎、荨麻疹、嗜酸性粒细胞增多症、疱疹样皮炎、寄生虫感染等,IgE降低 见于先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症 恶性肿瘤 长期用免疫抑制剂 共济失调性毛细血管扩张症等,五、血清M蛋白检测 M蛋白(M protein)或称单克隆免疫球蛋白 它是一种单克隆B细胞增殖产生的、具有相同结构和电泳迁移率的、免疫球蛋白分子及其分子片段 参考值蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法:正常人为阴性,

7、临床意义 检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病,见于 多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为 IgA型，IgD和 IgE罕见，也有IgM型的报道 巨球蛋白血症(Waldenstrom症):存在大量单克隆IgM,重链病：出现Ig重链(、和重链) 轻链病：出现单克隆游离轻链 半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段 7SIgG病：为恶性M蛋白病等。,第二节 血清补体检测,补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白 它由传统途径的九种成分C1(Clq、C1r、C1s)C9；旁路途径的三种成分及其衍生物,B、D、P、H、I等因子组成,补体、体液因子或免疫细胞共同参与灭活

8、病原体的免疫反应 也参与破坏自身组织或自身细胞而造成的免疫损伤 补体的检测可了解补体功能以及体内免疫反应、免疫损伤等状态。,第二节 血清补体检测,本节重点 及习题,一、总补体溶血活性检测,二、补体C1q检测,三、补体C3检测,四、补体C4检测,五、补体旁路B因子检测,一、总补体溶血活性检测 总补体溶血活性(total hemilytic complement activity,CH50) 以溶血素(抗体)致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)激活待测血清中的C1 引起补体活化的连锁反应,在绵羊红细胞上形成多分子的聚合物,影响其膜表面的结构与功能,最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关 一

9、般以50溶血作为检测终点(CH50),较为灵敏、准确 参考值试管法为 50100kU/L,临床意义主要反映补体传统途(C1C9)活化的活性程度。 CH50增高 见于急性炎症 组织损伤 某些恶性肿瘤.,CH50减低:更有意义 见于各种免疫复合物性疾病 如肾小球肾炎 自身免疫性疾病(如SLE) 感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病 重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等,二、补体C1q检测 补体comlement）C1q是构成补体C1的重要组分 C1是:一个C1q分子、2个C1r分子和2个C1s分子构成的钙离子依赖性复合物 目前常规检测Clq 参考值ELISA法为0.180.19g/L,临床意义 C

10、lq增加:见于骨髓炎、类风湿关节炎、痛风、过敏性紫癜等 Clq降低 见于SLE和混合型结缔组织疾病 重度营养不良、肾病综合征、重症联合免疫缺陷等,三、补体C3检测 补体C3是一种由肝脏合成的2-球蛋白 由和两条多肽链组成 C3在补体系统各成分中含量最多 是传统途径和旁路途径被激活的关键物质 参考值成人0.81.5 g/L,临床意义 1 生理性变化 随年龄的增长而增长 病理性增高 增高:见于急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等 减低:见于大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎活动期、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝坏死等 因此检测C3对这些疾病诊断有

11、价值,四、补体C4检测 补体C4是一种多功能1-球蛋白 在补体传统途径活化中，C4被C1s水解为C4a、C4b C4a、C4b在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等方面发挥作用 参考值0.200.6g/L,临床意义 升高:见于各种传染病、急性风湿热、结节性动脉周围炎、皮肌炎、关节炎和组织损伤等 降低:见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、I型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化症、类风湿关节炎、IgA性肾病、遗传性IgA缺乏症,五补体旁路B因子检测 补体旁路factorB因子是一种不耐热的球蛋白,5030分钟即可失活。它可被D因子裂解为Ba、Bb两个片段 Bb与C3b结合构成旁路途径的C

12、3转化酶 B因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分,又称C3激活剂前体,参考值0.100.4 gL 临床意义同补体旁路途径溶血活性检测 增高见于某些自身免疫性疾病、肾病综合征。慢性肾炎、恶性肿瘤 减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血,第三节 细胞免疫检测,一 T细胞亚群的检测 一T细胞花结实验 二T细胞转化实验 三T细胞分化抗原测定 二 B细胞分化抗原检测 三 自然杀伤细胞免疫检测 四 细胞因子检测,一T细胞花结形成试验 T细胞表面有特意性绵羊红细胞E受体和T细胞识别受体TCR其中E受体曾广泛被用做鉴定和计数T细胞的标志。T细胞表面的E受体，可与绵羊红细胞结合成花结样细胞，称E玫

13、瑰花形成实验ERFT此实验花结形成实验因其操作简便易行曾被广泛使用，但影响因素较多，因此逐渐被检测CD抗原方法所取代,二T细胞分化抗原测定 T细胞表面有多种特意性抗原。WHO1986年统称其为白细胞分化抗原cluster differentiation，CD CD3代表总T细胞， CD3/ CD4代表T辅助细胞Th， CD3/ CD8代表T抑制细胞Ts等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗兔或羊抗鼠IgG反应，在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率,参考值 免疫荧光法IFA CD3为63.110.8 CD3/ CD4（Th为42.89.5 CD3/

14、CD8 （Ts为19.65.9 CD4 CD8 Th / Ts 为2.20.7： 流式细胞术 CD3为6185 ； CD3/ CD4（Th 2858 ； CD3/ CD8 （Ts为1948； CD4 CD8 Th / Ts 为0.92.0；,临床意义 CD3降低：见于自身免疫性疾病。SLE 类风湿关节炎 CD3/ CD4（Th降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、爱滋病 CD3/ CD8 （Ts降低 见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。 CD4/ CD8 CD8 Th / Ts 比值降低：见于爱滋病 监测器官移植排斥反应CD4/ CD8 Th / Ts 比值增高 CD3 CD4 CD8较高且有CD

15、1 CD2 CD5 CD7增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞性白血病,二 、B细胞分化抗原检测 B细胞是在鸟类法氏囊bursa of Fabricius或其同功器官骨髓 bone marrow内发育成熟的细胞，因此称为法氏囊或骨髓依赖的淋巴细胞，简称B细胞。 B细胞受抗原刺激后可分化为产生抗体的浆细胞， B细胞是体内唯一能产生抗体免疫球蛋白分子的细胞,参考值流式细胞术：CD19+11.743.37 临床意义 升高：见于急性淋巴细胞白血病B细胞型，且有SmIg、HLA-D表达、慢性淋巴细胞白血病等 降低：见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。,第四节 肿瘤标志物检测,肿瘤标志物(tumor marker)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各个阶段的表型及基因特征性。主要包括蛋白质类。糖类物质和酶类肿瘤标志物。,附图,第三节 肿瘤标志物检测,一、蛋白质肿瘤标志物的检测,(一)甲种胎儿球蛋白测定,(二)癌胚抗原测定,(三)组织多肽抗原测定,(四)前列腺特异抗原测定,第四节 肿瘤标志物检测,一、蛋白质肿瘤标志物的检测 二、糖脂肿瘤标志物检测,本节重点及习题,