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1、分子伴侣理论 在制造胰岛素中的应用,甘李药业有限公司 甘忠如博士,2,主要内容,胰岛素的生产 胰岛素的质量控制 探讨,3,胰岛素制造的历史进展,4,重组人胰岛素表达方法的进展,80年代初，A、B链分别表达，分别纯化 80年代末：胰岛素原法 90年代：分子伴侣理论的应用,5,A、B链分别表达法,6,胰岛素原法,7,胰岛素原法的缺点,工艺复杂 复性率低：人胰岛素原有6个巯基要形成3个二硫键，有15种可能的组合，其中只有一种构象具有活性,8,人体内胰岛素表达图示,分子伴侣(Molecular Chaperone),分 子 伴 侣: 是一类蛋白质,其功能是帮助新合成 的蛋白质形成正确的二硫键及正确的
2、构象。(全过程称为蛋白质复性) 分子伴侣分为: 分子间伴侣和分子内伴侣； 二 者 区 别: 分子间伴侣和被复性的蛋白质没有化 学键连接;而分子内伴侣则是和被复性 的蛋白质通过共价键连在一起,待复性 完毕后再切开。,甘李药业分子内伴侣理论在胰岛素生产中的应用,复 性,融合蛋白,酶 切,A链,B链,分子内伴侣,分子内伴侣,分子内伴侣在胰岛素和类似物生产中的作用,保护胰岛素在大肠杆菌内不被分解 提高胰岛素表达量 提高复性收率 简化胰岛素和类似物的生产步骤,13,甘李公司生产工艺和国外公司的比较,国外公司工艺,无C肽胰岛素原融合蛋白,发酵,正确构象无C肽胰岛原纯品,胰岛素粗品,胰岛素纯品,复性,酶切,
3、解离A、B链,纯化,甘李公司工艺,正确构象无C肽胰岛原粗品,纯化,共31步,共17步,14,Drug Biotechnology Regulation edited by Yuan-yuan H. Chiu, John L. Gueriguian P221-262 Production-Scale Purification Processes Walter F. Prouty Lilly Research Laboratories, Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana,引自,15,16,判别胰岛素质量的标准,通用标准（药典标准） 纯度标准胰
4、岛素制造过程中的金标准,18,判别胰岛素质量的标准,通用标准（药典标准） 纯度标准胰岛素制造过程中的金标准,19,胰岛素制造的历史进展,20,用HPLC测定胰岛素效价误差小于5% （传统的小鼠惊厥法，误差20%） HPLC能检测出小于0.1%的杂质,分析型高效液相层析（HPLC） 是胰岛素质量控制的最重要的工具,21,分析型HPLC,22,不同厂家胰岛素及类似物HPLC图谱比较 原图谱,23,不同厂家胰岛素及类似物HPLC图谱比较 8倍放大图谱,24,不同厂家胰岛素及类似物HPLC图谱比较 80倍放大图谱,25,传统胰岛素纯度分类方法,单峰胰岛素 单组分胰岛素,26,探讨,胰岛素价格与国家经济
5、水平没有相关性 不同剂型胰岛素的使用量与当地糖尿病治疗水平的相关性,27,重组人胰岛素在一些国家的零售价,跨国公司在各国的胰岛素销售价格和当地的经济水平无关系 中国市场进口人胰岛素的价格和美国相近，但高于其他发展中国家5-6倍,28,埃及购买胰岛素发票,1埃镑1.6人民币,29,2005年第一季度天津海关胰岛素进口量,进口胰岛素制剂23.2吨，价值2519万美元 分别比去年同期增长61%和84.6 摘自中国医药报：2005.5.10,30,2003年中国胰岛素市场份额,2003 IMS data,31,2003年中国市场人胰岛素不同类别制剂 市场份额（）,2003 IMS data,32,2003年上海市场人胰岛素不同类别制剂 市场份额（）,2003 IMS data,33,2003年北京市场人胰岛素不同类别制剂 市场份额（）,2003 IMS data,34,2003年底美国市场人胰岛素不同类别制剂市场份额,Primary care physician,32.0%,23.0%,20.5%,26.0%,35,36,37,38,39,谢谢！,
