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1、自身抗体测定在风湿病 诊断中的意义,自身抗体与分类命名,自身抗体（autoantibodies）： 各种原因造成B细胞产生针对自身组织成分的抗体。生理性（亲和力、滴度、阈值），病理性。 分类： 按照自身抗体在体内分布分为器官/组织特异性抗体和非器官/组织特异性抗体。按照基质不同分为细胞特异性抗体和非特异性抗体等等。细胞抗体主要为非器官/组织特异性抗体，组织抗体主要为器官/组织特异性抗体。 命名： 以抗体在细胞和组织位置命名（胞浆、核、核仁、线粒体），以靶细胞和靶组织命名等等。 以患者名字命名（Sm、Ro） 以疾病名字命名（SS-A、Scl-70） 以抗原的化学性质命名（RNP、DNA） 以抗原
2、的部位命名（Anti-mDNA）。,自身抗体检测方法 免疫荧光法（ immunofluorescence , IF) 酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay ,ELISA) 放射免疫法(radioimmunoassay , RIA) 被动血凝法(passive hemagglulination , PHA) 颗粒凝集法(particle agglutination , PA) 对流免疫电泳法(countercurrent immunoelectrophoresis , CIE) 免疫双扩散法(agar gel double immunodiffusi
3、on , ID or DID) 免疫印迹法(immunoblotting , IB) 免疫沉淀法(radioimmuno precipitation assy , RIP) 斑点酶免疫渗透试验(dot immunoenzyme filtration assy , DIEFA) 斑点金免疫结合试验(dot immnuogold filtration , DIGFA),间接免疫荧光法,原理,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关 斑点型：与抗ENA有关 周边型：与抗dsDNA有关 核仁型：4-6sRNA 着丝点型：在SD及CREST中出现,ANA：均质型,EUROIMMUN
4、,抗核抗体,ANA：斑点型,EUROIMMUN,抗核抗体,ANA：核膜型,EUROIMMUN,抗核抗体,Westernblot HEp-2 cell extract,免疫印迹法检测ENA,原理,国内现状,自身抗体的测定不普遍 欠规范 对其意义了解尚少 缺乏研究,自身抗体测定准确率欠佳的原因分析,1. 测定方法不规范 底物选择(鼠肝、Hep-2); 试验方法(IIF、ELISA、IB) 2. 试剂(盒)标准化问题 厂家不同，质量参差不齐 3. 技术人员专业水平 严格的培训；操作方法及结果判定的差异,表1 放置4 1d、3d、5d、7d、14d时血清APF转阴率 Table 1 Lost of p
5、ositive rate of APF after serum had been separately stored for 1,3,5,7,14days at 4,a P0.01 vs controls,表2 室温分别放置1d、2d 、3d、5d、7d时血清APF的转阴率 Table 2 Lost of positive rate of APF after serum had been separately stored for 1,2,3,5,7days at room temperature,a P0.01与对照组转阴率的比较值,2、抗原底物在不同温度保存不同时间对血清APF的检出率影响
6、 将抗原片于4保存至3天时已出现APF的检出率的丢失（10%），无统计学意义；到5天后已有35%的检出率的丢失，具有统计学意义（P0.05）；放置7天后检出率的丢失为40%，统计学意义显著（P0.01）； 放置14天检出率的丢失已有一半（见表3）。而在-20下保存2周内检出率无变化。,表3 4时 抗原底物保存时间对血清APF的检出率影响 Table 3 Influence of time of antigenic substrate be stored on the occurrence of APF in serum,a P0.05 vs controls, b P0.01 vs contr
7、ols,2004年抗体结果正确率分析,参加 医院,85.2,75.4,62.7,61.1,2002-2004年质控结果的比较,dsDNA,抗,自身抗体,检测的正确率,2002,2003,2004,ANA检测的意义,有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗体；抗ScL-70 是SD的标记抗体，抗Jo-1是PM/DM的标记抗体 观察疾病活动度和治疗反应 研究发病机理,几种核抗原分子特性,几种核抗原分子特性,抗核抗体新概念（FANA） 传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称 狭义定义 现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸(
8、nucleic acid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称 广义定义 靶抗原分布： 细胞核 细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期,ANA由来,中性粒细胞,DNP(DNA-Histone) + 抗DNP + 补体,均质体,LE细胞,LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物 过敏，慢活肝等亦可阳性。抗DNP取代LE细胞的检测,+,抗核抗体的分类,1. 抗DNA抗体,抗双链DNA (dsDNA) 抗体 抗单链DNA (ssDNA) 抗体 抗左旋DNA (z-DNA) 抗体,2. 抗组蛋白抗体,总组蛋白抗体（AHA） H1、H2a、H2b、H3、H4,3.
9、抗非组 蛋白抗体,抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、RNP、SSA、SSB、Scl70、Jo-1、pM-1、PCNA、RANA、Ku、Mi-1、-2抗体、DNP抗体等。,抗着丝点抗体(ACA),4. 抗核仁抗体: 抗5rRNA、核小体、U3nRNP、Nor-90抗体。,5. 抗其它细胞成分: 线粒体、中心体等。,抗核抗体,类风湿因子 （Rheumatoid Factor）,抗人或动物的IgG的FC片段抗体。其本身是免疫球蛋白，因此，RF有IgG、IgM、IgA型等。RF无种族和种属特异性 与DNP及半抗原（二硝基苯）有交叉反应。7S IgM(IgG)-RF主要参与关节外症状的免疫复合物形成，
10、且与疾病活动性有关,如何评价类风湿因子,是诊断RA的标准之一，不是唯一标准，并非RA特有 作为血清阴性脊柱关节病区分标准 正常人2%阳性，老年人可达5%阳性 RF与其他蛋白、半抗原有交叉反应 多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM）感染疾病（SBE，TB，hepatitis）,肝硬化，弥漫性肺纤维化，结节病等均可阳性 病后半年才产生，有关节外表现者，滴度高。持续高滴度RF预示疾病严重，预后差,类风湿关节炎的自身抗体,名 称,敏感性(%),特异性(%),类风湿因子 RA33/36抗体 Sa抗体 抗角蛋白抗体 抗核周因子 抗CCP抗体 抗CB10抗体 抗BiP抗体,50-70 25-45
11、37 33 38-62 60-70 72 70,86 93.6 78-97 87-92 70-90 96 70-88 92,自身抗体与 风湿病,62.3,74.3,84.3,40,50,60,70,80,90,RF,CCP,RF/CCP,敏感度（%）,不同抗体检测的敏感度,聚丝蛋白 抗体群,不同抗体在RA诊断中的意义,聚丝蛋白 抗体群,系统性红斑狼疮的自身抗体,抗 体 敏感性 (%) 特异性 (%),抗核抗体 (ANA) dsDNA抗体 抗Sm抗体 膜DNA抗体 核小体抗体 U1RNP抗体 SS-A 抗体 SS-B 抗体 抗心磷脂抗体 类风湿因子 PCNA抗体 组蛋白抗体 核蛋白抗体,80 9
12、5 99 94 92 87-94 70 40 75 30 95 50 50,99 70 25 78 85 50 25-35 15 20-40 25 5 30-80 58,自身抗体与 风湿病,抗双链DNA抗体 （短膜虫免疫荧光法 1:5）,抗组蛋白抗体 （酶联免疫吸附法X2SD),系统性红斑狼疮 50% 其他结缔组织病 23-30% 服异烟肼12月以上 53% 服苯妥因钠6月以上 18% 服他巴唑6个月 0 活动期SLE 90.2%阳性,抗H1 H2A H2B H2A-H2B H3 H4 系统性红斑狼疮 + + + + + + 长期服异烟肼 + + + + + + 类风湿关节炎 + + + +
13、+ + SLE以IgG型抗组蛋白抗体为主，而长期服烟肼及RA病人以IgM型为主,抗组蛋白抗体 （免疫印迹法）,几种ENA的由来及同义词,Sm：病人名：Smith RNP: u1RNP或nRNP Nuclear Ribonucleoprotein SSA: RO Sjogrens syndrome A SSB: La, Ha, Sjogrens syndrome B Jo-1: 病人John ScL-70: Scleroderma,常见结缔组织病的抗核抗体的阳性率,ANA dsDNA Histone Sm n RNP SSA SSB ScL-70 Jo-1 着丝点 核仁 SLE 90 （62）
14、50 （25）40 39 10 0 0 0 6 SS 50 15 30 0 14 （75）（59） 0 0 0 9 SD 75 5 27 0 12 19 5 30 0 （20）（39） PM/DM50 13 0 5 0 0 0 (20) 0 10 RA 23 10 23 0 0 20 5 0 0 0 15+,+有指端硬化 ANA 1:40（+），抗dsDNA30%(或1：5）（+）,磷脂抗体 （Phospholipid antibody）,多见于SLE（70%），SS、白塞病、自身免疫性血小板减少、真性红细胞增多、免疫性血管炎、习惯性流产、恶性肿瘤、多发性硬化、传染性疾病、肾上腺出血和Addison病均可阳性,抗磷脂抗体检测,包括：狼疮抗凝物；抗心脂抗体，梅毒血清试验假阳性。 抗磷脂抗体还有抗磷脂氨酸（Anti-phosphotidyl serine）和抗磷脂酸（Anti-phosphtidil acid）抗体等。,抗磷脂抗体检测,磷脂基因中具有抗原性：心磷脂、磷脂碱、酰丝氨酸、酰肌醇脂和酰乙醇脂等 2GP1
