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1、 申报号项目类别A学科名称学科代码某某省自然科学基础研究项目申请书项目名称：鳖甲煎丸对肝纤维化细胞因子及其相关细胞影响的研究申 请 者： 所在单位（签章）：某某大学 主管部门： 某某省教育厅 联系电话： 5962476 电子信箱： 通讯地址： XX市XX道1号 邮政编码： 2222222 申请日期： 2002 年 8 月 20 日某某省科学技术厅制填 报 说 明 1、“申请书”用于申请某某省自然科学基金项目，由申请者负责填写。填写前请先查阅有关某某省自然科学基金项目申请办法及规定。申请书各项内容，要逐条认真填写，表达要明确、严谨，实事求是。外来语要同时用原文和中文表达，第一次出现的缩写词，须注
2、明全称。 2、封面右上角“申报号”按照某某省科学技术厅分配的编号填写；“项目类别”栏由申请者填写, 申请项目属基础研究的此栏为“A”,属应用基础研究的为“B”。“学科名称”及“学科代码”请根据申报项目所属学科，按最新国家标准“学科分类与代码表”，填至三级学科分支。 3、基础研究是指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动；应用基础研究是指有广泛应用前景，但以获取新原理、新知识、新方法为主要目的的研究；“项目名称”应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）；“申请者”是指申请项目实际主持人。 4、在读（含在职）研究生和申请单位的兼职科研人员不得作为申请
3、者提出申请，但可作为项目组成员参加研究。 5、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的省级以上科学基金项目数, 不得超过两项。同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个项目。 6、不具有副高以上专业技术职务或硕士以上学位的申请者，须有两名具有正高专业技术职务的同行专家推荐。简表项目概况项目名称鳖甲煎丸对肝纤维化细胞因子及其相关细胞影响的研究申报学科名称1中医内科学代码13601011名称2中西医结合学代码236020起止年限 2001 年 9 月至 2003 年9月申请经费4万元项目主要成员姓名性别年龄学位职称(职务)现工作单位签章项目主要研究内容和目
4、标研究内容：本课题拟从实验及临床两方面进行研究： 1.实验部分：对实验大鼠免疫性肝纤维化模型分别给予鳖甲煎丸、丹参注射液、秋水仙碱进行预防和治疗。检测生化指标，用放免法检测血清纤维化指标，用免疫组化法检测肝组织TGF1、PDGF、BFGF、L、CD3、D、SMA、PP、Col、Col，用原位杂交法检测肝组织内TGF1RNA。 2.临床部分：选择慢性肝炎、早期肝硬化患者作为观察对象，分为鳖甲煎丸、丹参注射液、秋水仙碱组进行治疗，检测生化指标、血清纤维化指标、血清TGF1，部分病人作肝组织病理检测、上述细胞因子及相关细胞检测。目标 1.阐明细胞因子及相关细胞在肝纤维化发生发展过程中的作用，进一步揭
5、示肝纤维化的病理机制。 2.阐明鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理，为临床早期应用鳖甲煎丸预防肝纤维化提供依据。3.分析、比较鳖甲煎丸、丹参注射液、秋水仙碱3种药物的作用差异及毒副作用，为临床制定合理的治疗方案、恰当选药提供依据。一、本研究项目的立项依据和目标1、本项目研究的意义及同类研究工作国内外研究现状与存在的问题，并列出主要参考文献：肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征之一，也是慢性肝炎、肝硬化恶变的主要原因。肝纤维化的形成机理目前多认为是致病因子造成肝细胞（HC）损伤，引起枯否细胞激活，分泌多种细胞因子，随同血小板、肝窦内皮细胞和HC等分泌的多种细胞因子，与某些化学介质共同作用于肝星状细胞（H
6、SC），使其激活转化为肌成纤维细胞，通过旁分泌和自分泌作用，使HSC增殖、合成大量的细胞外间质（ECM），ECM的分泌增加，降解减少，以致使其在肝内大量沉积，肝纤维化逐渐形成。因此在肝硬化形成之前，早期着手抗肝纤维化治疗是治疗肝病的关键。随着肝纤维化的形成与分解机理的阐明，以及有关调节因子的发现，抗肝纤维化的研究正活跃起来，初步发现的肝纤维化可逆转的证据，显示了抗肝纤维化的可能性与美好前景。随着分子生物学技术的不断进步，肝纤维化的发生机制已从病理组织学的研究，发展到了细胞学的研究、细胞因子等分子水平的研究。目前研究已发现一些细胞因子与肝纤维化的形成有密切关系，其中最重要的是转化生长因（TGF）
7、，ECM的合成与降解主要由TGF调控，动物实验在肝纤维化过程中TGF1 及其蛋白表达不仅与、型胶原RNA表达量的变化一致，且早于胶原表达，体外实验表明TGF可以刺激肝储脂细胞（FSC）活化，合成ECM增多、降解减少。对病毒性肝炎肝组织进行免疫组化研究，随着肝纤维化程度的加重，TGF在肝组织中的表达逐渐明显，并随病情加重而增高，同时与血清PP、LN、HA、以及SMA和在肝组织中的表达成正相关。此外TGF可通过增强其它细胞因子的作用或增加FSC分泌其它细胞因子、表达相应的受体而促进FSC的增殖，它能选择性并呈剂量依赖性增加FSC表达血小板衍生生长因子（PDGF），提高FSC与PDGF的结合位点，从
8、而明显增强PDGF促进FSC增殖的作用。血小板衍生生长因子（PDGF）是一种普遍而强效的促分裂剂，目前的研究较少，国外的研究表明PDGF对FSC的活化、分裂和增殖等均有明显的促进作用，可使大鼠FSC细胞合成DNA较对照组增加18倍，进一步研究发现PDGFBB和PDGFAB是FSC的促分裂剂。碱性成纤维细胞生长因子（BFGF）在创伤愈合过程中促使肉芽组织和纤维形成的作用已经明确，其与肝纤维化的关系研究刚刚开始，有研究发现BFGF明显促进大鼠的FSC的分裂和增殖，增强FSC的游走性，BFGF是间质细胞的促增殖因子，且能促进多种细胞产生ECM。总之细胞因子与胶原沉积的关系是通过对胶原生成细胞的调节作
9、用而实现的。目前抗肝纤维化药物的研究主要有如下几方面：西药如干扰素、肾上腺皮质激素、秋水仙碱、青酶氨等，主要作用机理是抑制胶原合成、前胶原分子分泌以及胶原修饰酶的活性；不饱和卵磷脂、PHGF、钙通道阻滞剂、4脯氨酰羟化酶等的研究尚在初期阶段，缺乏对细胞因子的作用的研究报道。上述药物有的副作用较大，有的尚未能应用于人体，有的作用机制还未明了，开发一个有效而副作用少的治疗药物尚需长期努力。中医药治疗慢性肝炎、肝硬化有悠久的历史及特有的优越性。近年来的研究有单味药研究、复方研究及实验研究。单味药研究如丹参及丹参酚性酸、桃仁及苦杏仁甙、汉防己及汉防己甲素、甜瓜及葫芦素、齐墩果酸、甘草甜素及甘草次酸等。
10、复方研究主要集中在活血化瘀、清热利湿、疏肝理脾、补肾养阴之方剂，如血府逐瘀汤、小柴胡汤和大柴胡汤、当归补血汤、大黄蛰虫丸、软肝片、抗纤方、剔毒护肝方、肝纤康、扶正化瘀方、肝心康、861冲剂、319方脉络宁等。其中活血化瘀类方剂应用较多。从临床及实验研究结果来看，对临床症状、生化指标、血清学纤维化指标及病理改变等均有一定效果，表明中药可在多个环节抑制肝纤维化形成、促进胶原降解。诚然上述研究还存在一些不足，如抗纤维化研究多以实验动物为研究对象，与人体纤维化有一定差距；对照药多为秋水仙碱，尚缺乏中药之间的对照；有的科研方临床应用时间较短，治疗例数较少；或药物作用比较单一，难以对应本病较复杂的病机；中
11、药复方多集中在药效学方面，对药理作用的研究较少。本领域分子水平的研究也刚刚起步，尤其是对细胞因子的研究。近年始有人在动物和人体通过检测肝组织以及血清中的TGF来判断肝纤维化的程度；通过测定细胞因子判断IFN及其他的抗肝纤维化药物的疗效；中药861合剂能抑制实验大鼠TGFRNA在肝组织内的表达。细胞因子的研究在阐明肝纤维化发生机理、物作用机理及确定病情程度、判断药临床疗效等多方面具有重要意义，将是今后研究的热点课题。 鳖甲煎丸是张仲景金匮要略中治疗疟疾徵瘕的名方，有可靠的临床应用基础，临床用于治疗肝炎、肝硬化、血吸虫病及热病后所致肝脾肿大，该药对改善症状、消除肝脾肿大有确切疗效，用于治疗肝癌也有
12、一定效果。本方具有活血化瘀，软坚散结，利水祛湿,益气养血之功，功补兼施，作用全面，对应了本病复杂的病机，充分发挥了中药复方多途径抗肝纤维化的作用机制。近年来对鳖甲煎丸抗肝纤维化也有大组的病例观察，对静止性肝硬变40例患者的观察，治疗6个月后血中HPC、C、HA较治疗前明显下降,有显著性差异。对48例慢肝、肝炎后肝硬化，在常规中西药基础上加服鳖甲煎丸，临床疗效及血清肝纤维化指标的改善均优于常规治疗对照组。鳖甲煎丸对静止性肝硬化患者18例门脉血流动力学的观察，显示与治疗前相比有显著性差异，效果优于心得安对照组。对大鼠四氯化碳模型的研究表明鳖甲煎丸对改善肝功、血清学指标及减轻肝脏病理改变均有明确效果
13、。本课题组应用免疫性肝纤维化模型进行了研究，主要观察了鳖甲煎丸对ALT、AST、GT、ALP、TP、ALB、HA、PC、C以及病理形态学等内容。结果表明：鳖甲煎丸能有效地保肝降酶，抗肝细胞损伤，恢复肝细胞的功能，阻抑胶原的形成和促进胶原的降解，是一个疗效确切、起到综合作用的药物，可望成为一种多途径抗肝纤维化的复方中成药。本课题对其抗肝纤维化的机理进行更深入的研究，以核酸分子杂交和免疫组化技术对细胞因子及其相关细胞进行检测研究，探讨鳖甲煎丸阻止胶原形成抗肝纤维化的作用机理，并与中药丹参注射液、西药秋水仙碱作对照，比较它们之间的差别和优劣，为临床防治肝纤维化用药提供科学依据，并从分子生物学角度对仲
14、景方药研究进行深化。主要参考文献：1蔡卫民，陈峰近年来肝纤维化主要新进展临床肝胆病杂志，1998，14（2）：652Czaja MJ. Weiner FR, Flanders KC, et al. In vitro and in vivo association of transforming growth factor-1 with hepatic fibrosis. J Cell Biol,1989,108:2477.3Nakatsukasa H, Evarts RP, Hsia CC, et al. Transforming growth factor-1 and type I procollagen ranscripts during regeneration and early fibrosis of rat liver. Lab Invest 1990 63(2): 1711804Somasundaram R, Riecken EO, Schuppan D, et al. Matrix-binding of platelat-derived growth factor in hepatic fibrosis is mediated by col
