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1、 一电镜技术在肝病诊断中的意义 1代谢性疾病的诊断 2鉴别肝脏肿瘤组织来源 3评价肝脏对药物或毒物的反应 4为肝脏疾病研究提供信息 二肝脏的电镜检查注意事项 1肝细胞内富含蛋白水解酶离体后仍有活性要及 时冷固定。 2酶细胞化学或免疫电镜检查要经特殊处理。 3肝小叶不同区带肝细胞的形态及功能有一定差异 不同病理状况下不同区城的肝细胞受累情况也不相同 因此要半薄定位选择有意义的区域进行检查。 4电镜诊断必须结合临床资料和光镜观察结果避免 由于观察材料有限或非特异病变而导致误诊。 二、肝脏的超微结构及基本病变 一肝细胞 肝细胞呈多面体形直径约为20一30。肝细胞在肝脏组 织内形成肝板与肝血窦相邻故肝
2、细胞质膜因其功能和接 触环境的不同分为三种不同的表面。 1窦周间隙面肝细胞表面有许多细而长的微绒毛微 绒毛呈弯曲状且有分支 2毛细胆管面为两个或多个相对的肝细胞表面内陷出 现沟样细胞间隙即毛细胆管腔腔面有微绒毛两端有 紧密连接封闭管腔附近的胞质内富含网状微丝以促进 胆汁分泌。 3肝细胞间面相邻肝细胞接触的面形成紧密连接、 桥粒、缝隙连接等连接装置 可见少量微绒毛 二、肝脏的超微结构及基本病变 肝细胞器最丰富故常被作为生理、生化、药理和病理 学的研究对象。 1肝细胞核 大而圆居中直径5一11核内异染 色质少而分散且多位于核周核仁明显。 2肝细胞质 A. 细胞器 线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体微
3、体、细胞 骨架 B.肝细胞质内包含物糖原、脂质、蛋白质、分泌鞭粒和 色素颗粒等 二、肝脏的超微结构及基本病变 3肝细胞常见病变 1肝细胞肿胀和气球样变 2肝细胞嗜酸性变和嗜酸性小体 3肝细胞的固缩坏死又称调亡 4肝细胞脂肪变性 5肝细胞受损后可导致肝细胞窦面的微绒毛缩短、减少 或消失。有的微绒毛肿胀、形成大泡突人塞周隙造成 胞质丢失物质交换受阻。慢性肝病时肝细胞面可出现 微绒毛间隙增宽肝细胞窦面基底膜形成等。 肝细胞嗜酸性变 二、肝脏的超微结构及基本病变 二肝小叶的间质细胞 1内皮细胞是肝窦主要的边界成分 2.枯否细胞(Kupffer cell) 是肝内巨噬细胞又 称星状细胞 3. 贮脂细胞
4、三、代谢性疾病的超微结构特征 一Wilson病 肝豆状核变性。是一种常染色体隐性遗传铜贮积病。患者多为儿童、 青少年。由于铜篮蛋白缺乏铜结合不足或铜排人毛细胆管障碍引起 胆汁性铜排泄障碍造成过量的铜离子沉积损伤溶酶体膜水解酶 进入胞浆引起细胞变性、死亡。首先累及肝待肝饱和后再沉积于 中枢神经系统、虹膜等全身各处。 电镜下早期铜散在分布仅表现一些非特异性改变如脂滴、 糖原数量增多。中间阶段铜贮存增多细胞器出现病理变化线粒 体最具诊断价值表现为大小及形态不一基质中有大颗粒或晶体沉 着电子密度明显增高内外膜分离外池扩大胞浆中还可见许多 特征性多泡状圆形包涵体炎细胞反应显著并出现肝细胞灶性坏死。 晚期
5、阶段出现结节性肝硬化。 肝细胞内多数致密、多泡的颗粒聚集 早期以肝细胞线粒体变化为特征线 粒体增大内外膜分离基质致密。 基质颗粒增大嵴扩张 三、代谢性疾病的超微结构特征 二卟啉代谢性疾病 先天性缺乏卟啉合成酶或中毒而造成酶阻断 因而出现异型的卟啉在细胞内和溶酶体内聚集 损害受累细胞。电镜特征原卟啉色素结晶颗粒 为直的或弯曲的针状或索状结晶排列有序成 束状毛发状或 “星芒状“长约40一60nm,宽约6 一20nm。结晶可沉积于肝细胞中无界膜在 Kupffer细胞中存在溶酶体内还可沉积干毛细胆 管中 三、代谢性疾病的超微结构特征 三糖原贮积症 为先天性常染色体隐性遗传性疾病由于影响糖原的合成、分解
6、与碳 水化合物代谢的某些确缺乏或有缺陷导致细胞内糖原贮积此类疾病 肝脏病变明显的是I型和型。 1I型糖原贮积症该病主要是葡葡糖-6-磷酸酯酶缺乏所引起的疾 病。肝细胞质内大量散在糖颗粒堆积同时伴有大量脂滴形成。病变 进一步发展并有贮脂细胞增生、狄氏间隙胶原纤微增生及肝硬化。 2糖原贮积症由于细胞内溶确体酸性糖苷酶缺乏所致累及 全身所有组织。电镜下胞质中有大量散在分布的糖原颗粒贮积特 征性变化是单颗粒糖原聚集在肝细胞和枯否细胞的溶酶体内 胞质中 还有较多的残余溶酶体、自噬小体及髓样结构 三、代谢性疾病的超微结构特征 四1抗胰蛋白酶缺乏症 1-抗胰蛋白酶1-AT是肝细胞合成的糖蛋白具有抑制备种蛋白
7、 酶的特性。1-AT缺乏症是由于肝细胞制造的1-AT发生变异导致相 应分泌信号和受体作用缺陷以致酶不能从肝细胞输出潴留于肝细 胞内。1-AT缺乏病人可终生无恙但常在婴儿或儿童期发病个别 病人在成年期发病不仅有全小叶型肺气肿同时肝脏也可受累。 光镜下肝组织病理表现为慢性活动性肝炎或肝硬化肝细胞质中 有特征性的圆形小球PAS阳性以汇管区或肝硬化时假小叶周围肝 细胞中最多见。电镜下这些小球由无定形的物质构成位于扩张的 便面内质网中。 三、代谢性疾病的超微结构特征 五鞘脂贮积症 1Fabry病由于溶酶体半乳糖苷酶的同工酶缺乏所致。电镜下 肝和枯否细胞质内丰富的类脂包涵体外有单层膜结构包绕。包涵体 内含
8、有类脂质物质具有嗜锇性呈均质状高电子密度或板层体结构 或表现为中央部分为均质状周边部分为板层结构。 2尼曼-匹克病Niemann-Pick disease由干染色体隐性遗传所 致鞘磷脂酶缺乏使体内鞘磷脂不能水解而沉积于组织内。主要累 及肝、脾、骨髓、淋巴结。光镜下肝窦内和汇管区有大量枯否细胞 和巨噬细胞聚集细胞肿大胞浆泡沫状、核小居中称Pick细胞。 电镜下Pick细胞浆中含有许多球形小体直径可达2一3nm呈同心 田的板层样髓磷脂样图像结构。 三、代谢性疾病的超微结构特征 3高雪病Gaucher disease 本病是常染色体隐性遗 传所致的一种脑苷酶代谢障碍性疾病。由于吞噬细胞内缺 乏-葡萄
9、糖苷酶脑苷水解酶脑苷脂分解障碍在细 胞内堆积起来致使细胞体积增大成为Gaucher细胞。 脑苷脂脂主要蓄积在网织内皮系统。本病常发生干婴儿 为致命性疾病。光镜下肝内聚集大量高度肿大的载脂巨 噬细胞有的胞浆泡沫状有的胞浆出现红染条纹。电镜 下Gaucher细胞胞浆中满布梭形或杆状有膜的包涵物 内有许多平行的小管定向排列。这些小管由10-20根直 径为8nm的纤维组成横切面为圆形或卵圆形颗粒状基质。 狄氏间癌可见贮脂细胞及胶原纤维增生进一步可发展为 肝硬化。 三、代谢性疾病的超微结构特征 六胆色素代谢障碍 由于肝细胞摄取、结合或分泌胆红素的功能障碍使 血液胆红素水平增高造成黄疸称为高胆红素血症。本
10、 组疾病有家族性发病史。 1Gilbert综合征肝细胞摄人胆红素障碍或肝细胞 内缺乏葡萄糖醛基转移酶造成结合胆红素的功能部分受 损所致。 电镜下特征性变化有:肝窦表面微绒毛变短数 量减少质膜变平常形成碎片落入狄氏间隙或血窦内。 肝细胞滑面内质网增生。线粒体数量增多、体积增大出 现巨线粒体并有类结晶体形成。脂褐素颗粒数量增多。 肝细胞窦面微绒毛 消失 SER增生并囊 泡化 三、代谢性疾病的超微结构特征 2Dubin-Johnson综合征主要由于肝细胞排泄结合胆红 素先天性障碍导致病人出现间歇性或长期性慢性波动性 黄疸。血中结合性胆红素水平升高肝组织呈黑色。光镜 下可见肝细胞内散在大量棕色颗粒。特
11、别在毛细胆管周围 更明显肝小叶之间胶原纤维增生并有炎细胞反应。电 镜下1毛细胆管旁病变显著管闭明显扩张、增厚 附着有高电子密度的物质毛细胆管腔空虚胆管表面平 直微绒毛变短、断裂、数目减少。2肝细胞质内特 别是在毛细胆管周围见多量色素颗粒颗粒大多呈高电 子密度有界膜主要为颗粒状-细丝状物质具有蛋白 质性质。部分为电子密度较低的团块状脂样物质。 邻近毛细胆管的肝细胞面有多 数色素颗粒毛细胆管轻度扩 张伴有微绒毛变短 三、代谢性疾病的超微结构特征 3Rotor综合征 由于排出胆红素障碍造成结合胆红素 水平增高因而与Dubin-Johnson综合征相似但肉眼肝 细胞不呈黑色光镜下很少见到肝细胞内有色素
12、颗粒堆 积。电镜下病变界于前二种疾病之间毛细胆管病变与 Dubin-Johnson综合征相似而肝细胞窦面质膜变化、色 素颗粒及线粒体变化与Gilbert综合征相似但颗粒构成以 脂样物质较多。 四、酒精性肝病 是慢性酒精中毒的主要表现之一。可引起脂肪肝酒精性肝炎重者 可导致肝硬化。 脂肪肝是最常见的病变酒精性肝炎除肝细胞脂肪变外。还可见肝小 叶中央的嗜酸性、不规则玻璃样团块状物质被称为酒精透明小体 alcocholic hyaline body即马氏小体Mallory body,并见灶性肝 细胞坏死伴中性粒细胞浸润晚期可发生肝硬化。 电镜下脂肪变性分为大空泡性脂变中性脂及小泡性脂变类 脂前者多见
13、Mallory 小体为肝细胞损伤的细胞骨架积聚而成 呈细丝状可见平行排列或方向不一或中心融合成团块状周围 无界膜。线粒体增大、畸形正常基质颗粒消失有时有巨大线粒体 和类结晶体粗面内质网、高尔基体均可增生肥大。肝小叶中央性纤 维化肝小叶中央静脉壁增厚纤维化贮脂细胞增生活后期转化为 纤维母细胞胶原纤维形成旺盛。 酒精透明小体 由无定向排列的中间丝 组成周围无界膜 酒精透明小体 平行排列 无结构的致密班 网状排列 五、病毒性肝炎 电镜检查不仅对病毒性肝炎的研究具有很 重要的作用而且对病毒性肝炎特别是 两类慢肝炎即慢迁肝与慢活肝乃至肝炎肝 硬化的诊断也具有一定的参考价值。 五、病毒性肝炎 一急性病毒性
14、肝炎acute viral hepatitis 光镜下表现为肝细胞弥漫性肿胀气球样变。小灶性坏死及单核细 胞浸润。电镜下最常见粗面内质网扩张、线粒体肿胀溶酶体增多 面向狄氏间隙的肝细胞膜常有水肿或大泡形成及局部胞质溶解此为 光镜下的肝细胞水肿。肝细胞肿胀可压迫毛细胆管使其管腔狭窄。 有时毛细胆管扩张内有胆汁淤滞。部分肝细胞胞体缩小电子密度 增高核固缩或破损细胞器模糊不清即为光镜下的嗜酸性坏死或 嗜酸性小体。个别肝细胞坏死可以通过单个肝细胞质膜灶性破损 局部胞质溶解坏死也可嗜酸性坏死或单个细胞核及细胞质崩解成若 干小块即凋亡小体形成。肝窦中枯否细胞增生胞质中溶酶体增多。 汇管区炎细胞浸润明显主要
15、为淋巴细胞、组织细胞、中性粒细胞及 嗜酸性粒细胞甲型肝炎时浆细胞浸润比较明。 五、病毒性肝炎 二传性病毒性肝炎 chronic viral hepatitis 1. 慢性迁延性肝炎对肝组织超微结构变化不明显。线粒体增生见于 少数病例其基质密度增大形态不规则显著增大时可形成巨线粒 体其中见类晶体。滑面内质网增生在丙型肝炎时最为明显可呈 分支管状或囊泡状。乙型肝炎时内质网也扩张有时可见管状或圆球 形乙型肝炎表面抗原(HbsAg)颗粒这类肝细胞在光镜下呈毛玻璃样。 脂滴在丙型肝炎比乙型肝炎更多见。肝细胞核外形不整核膜皱缩 核异染色质减少而边集如为乙型肝炎则染色质松散区可见乙型肝炎 病毒核心抗原HbcAg。慢迁肝时肝细胞三个面的变化较肝细胞中 各种细胞器的变化更具有诊断价值肝细胞面间隙增宽并出现微绒 毛。毛细胆管面微绒毛减少管腔扩张。窦周间隙微绒毛轻度减少。 丙型肝炎时可见肝细胞间隙及窦周间隙中胶原纤维增多。肝窦内枯否 细胞、淋巴细胞数量增多尤其在丙型肝炎表现更突出但浸润炎细 胞多
