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1、植物组织永久制片,一、徒手切片法 二、滑走切片法 三、离析法 四、压片法 五、石蜡切片法 六、冰冻切片法,石蜡切片法,石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是显微技术中最重要最常用的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片，便于进行器官的三维重构。此法多用手摇切片机切片。对于较硬的材料，也可以使用滑走切片机。 石蜡切片法的操作程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。,取材,选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。材料的大小不超过0.5lcm3。,固定,将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20
2、倍。固定是用化学试剂迅速杀死细胞的过程。目的是尽可能使细胞中的各个组分保持生活状态的结构，并固定在它们原来的位置上。常用的固定剂有：FAA 、卡诺和纳瓦兴固定液。 【FAA是Formalin-Aceto-Alcohol（福尔马林-乙酸-乙醇）混合液的缩写，配法：50%或70%酒精90毫升, 冰醋酸 5毫升, 福尔马林, 5毫升。柔软材料用50%酒精，坚硬材料用70%酒精配制。】,脱水,固定好的材料经各级酒精脱水至纯酒精。各级酒精的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l00%。（自动脱水机 ),透明,纯酒精中的植物材料用l2纯酒精和l2二甲苯混合液处理23h，转入纯二甲苯中，处理两次
3、。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料变得透明外，另一方面是将材料中的酒精除去。,浸蜡,使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于40左右的温箱中。随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止。时间大约l2天。,包埋,浸蜡后，在60的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h。然后将材料和石蜡一起倒人小纸盒中，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，再将小纸盒平放于冷水中，使其很快凝固。,修快和切片,按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。 用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时，把切片刀夹在刀架上，再把木块夹在固定装置上，调整固着位置，使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度，转动切片机切片。,粘片,粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上，加少许粘贴剂并涂匀。 再将带有蜡片的载玻片放在温台上，温台的温度在45左右，蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体，表面烤干后，转入30温箱放置一昼夜。,染色和封片,切片干燥后，可以选用不同的染色法染色。染色前先要进行脱蜡，使材料内外的石蜡溶解。然后根据配制染液的溶液情况，决定是否需要复水。下面以植物生物学中最常见的番红-固绿染色方法,
