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1、 和 地中海贫血的遗传筛查和产前诊断 Genetic Screening and Prenatal Diagnosis for and thalassemia in Guangdong Meizhou 2006, December 07 徐湘民 南方医科大学，医学遗传学教研室 南方医院产前诊断和遗传病诊断技术中心 Southern Medical University,地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一,中国南方不同高发地 区人群携带率 1 23%,研究背景,中国南方和地贫的人群携带率,珠海,韶关,广州,汕头,湛江,广东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查,西,南,东,北,中,Journa
2、l of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.,广东省人群中地贫的携带者频率,广东省人群中地贫的携带者频率,广东省年高风险妊娠预测数据（95%CI） 重型或中间型地贫： 645 （480，835） Barts胎儿水肿综合征：1714 （1498，1945） 血红蛋白（Hb）H 病： 1677 （1467，1901）,广州市主要出生缺陷的发生率 (1998-2001),地贫纯合子：致死性出生缺陷,重型地贫:胎儿水肿综合征 早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症 无理想治疗方法,重型地贫 出生后1年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗
3、可维持,代价昂贵,研究地中海贫血的意义 重症地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题 通过产前诊断阻止重症患儿出生是首选预防措施 WHO优先推荐在发展中国家实施预防的遗传性疾病 预防地贫是中国南方高发区减少出生缺陷的战略需求,研究背景,应用于地贫 控制的人群筛查策略 基于医院水平的预防计划 基于社区水平的预防计划 扩展的家系筛查计划,中国南方地贫人群预防的首个前瞻性筛查计划, 时间：1993.01.01 2003.12.31 基于医院的预防计划: 广州市妇婴医院 占广州市出生数的 1 / 17 策略：孕期杂合子筛查 结合现行的孕期健康产科检查实施,地贫携带者筛查及产前诊断流程,筛查结果,异常血红
4、蛋白筛查结果,广州市妇婴医院 1993-2003 筛查计划的结果,( contd ),筛查发现的阳性孕妇或阳性夫妇 地贫1 地贫 地贫 地贫 5.7% 3.6% 4.4% 1.8%,Total of 4503 couples screened,54例Barts水肿儿和Hb H病,18例重型地贫,2804 1783 198对 83对,产前诊断：187 例 地贫 82例 地贫,广州市妇婴医院 1993-2003 筛查计划的结果,产前诊断结果,地中海贫血的产前诊断, 胎儿取样技术 DNA诊断技术 -地贫的诊断 -地贫的诊断,羊膜穿刺 (amniocentesis) 抽取胎儿样品示意图,DNA诊断技术
5、, 多重PCR （multiplex PCR） 等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO） 反向点杂交 （RDB） 变性高效液相色谱（DHPLC） 多重引物延伸DHPLC（multiplex PE / DHPLC）,用于 和 地贫产前诊断的方法 (1993-2003 ),胎儿脐带血血红蛋白电泳图谱,Diagnosis Patient 1 Barts hydrops fetalis Patient 2 Hb H disease Patient 3 thal trait,本实验室应用的主要技术,采用Gap-PCR进行-SEA地贫基因缺失的基因分型,-SEA地贫缺失的基因分型结果,与美国商品化UBI试剂
6、盒的对比研究,中国南方地贫突变的变异类型和位置,EXON 1,IVS 1,EXON 2,EXON 3,IVS 2, Fragment size: A = 453 bp B = 364 bp C = 423 bp One set of PCR conditions,DHPLC 分析人珠蛋白基因: 三个PCR片段扩增,IVS2,3 UTR,A,B,C,DHPLC的三种 操作模式 非变性分析（ 50 C ） 双链DNA大小测定 半变性分析（ 52-78 C ） 突变鉴定 全变性分析（ 78-80 C ） Oligo和RNA分析,PCR产物的半变性分析（ 52-78 C ）,Wild type Mut
7、ant Heteroduplexes Homoduplexes,Reference Samples,PCR Products,DHPLC 检测地贫突变的结果,DHPLC 检测地贫突变的结果,DHPLC 检测地贫突变的结果,RDB analysis: application to rapid prenatal diagnosis for eight thalassaemia mutations.,Genotype Father CDs41-42 (CTTT) / N Mother IVS-2-654 (CT) / N Fetus CDs41-42 / IVS-2-654 Normal contr
8、ol N / N,83 例 地贫高风险胎儿产前诊断结果,( contd ),266 例高风险妊娠的产前诊断结果,* Three Hb H disease involved,269 (95.7%) 孕妇实施产前诊断 187 地贫 83 地贫(1双胞胎),72(26.7%) 孕妇要求终止妊娠 54 重型地贫 18 重型地贫(1双胞胎),69 重型地贫被预防 51 水肿胎 18 重型地贫(1双胞胎),12 孕妇不接受产前诊断,197例孕妇继续妊娠,3 例HbH病出生,2例水肿胎出生,广东省和地中海贫血预防模式研究 现场：广东省四会市 时间：2001.1-2005.12 人口: 40万 目标: 为制定
9、2006年广东省全境地贫 预防计划提供方法和经验,产前遗传学的临床和公共卫生问题 利用有效的公共卫生教育资源，首先使医生 和公众了解更多的地贫知识和知晓选择遗传 服务及其对待产前诊断的态度是我们面临的 一个重要课题； 2.为满足大规模预防工作的需要，我们须大力 加强专科医生,遗传咨询师，及其他相关专业 人员的培训工作;,3.预防监测系统建立过程中，要特别注重转诊、 病例登记、实验室质量控制的把关; 4.政府在组织、基础建设、制定政策法规和行 政管理上的主导作用是推动预防计划的关键 因素。,( contd ),结论, 我们建立的基于医院水平的孕妇人群的筛查 计划可有效的降低和地贫的出生率 本计划中建立的遗传服务平台可扩展到我国 其它高发地区开展 和地贫的监测和预防,
