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1、化学原料药质量研究 及原始记录常见问题讨论,余立 ,特性研究-理化、稳定性,对照品研究-标化、校正因子,方法研究-建立、验证,原料药研究的特点,杂质研究-工艺、残留溶剂,1,4,3,2,建立标准时要考虑的问题,Growth,2008 2007 2006,2005 2004 2003,2002 2001 2000,常见研究误区以及供参考的经验和体会,新版药典动态对化学原料药质量研究的影响,研发原始记录中常见问题及改进建议,主要讨论内容,Click to edit title style,杂质控制,微粒控制,安全性 控制,注射剂所用的原辅料应从来源及工艺等生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要
2、求。,标准 增项,杂质谱的比较,供注射用原料质控变化重点提示,杂质控制力度大幅度提高,未修订品种,盐酸阿糖胞苷,* 性状项下还有熔点和比旋度项，,第一次飞跃,第二次飞跃,有关物质的研究 杂质质控理念的变迁,杂质谱的定义,Impurity Profile （杂质谱）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance. 对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。,,Company Logo,名词解释,已鉴定杂质 Identified Impurity,特定杂质 Sp
3、ecified Impurity,潜在杂质 Potential Impurity,杂质谱 Impurity Profile,已确证了结构特征的杂质,在质量标准中规定检查并有自己限度标准的杂质。已鉴定或未鉴定,按照理论推测在生产或贮藏过程中可能产生的杂质，实际产品中不一定存在,存在于药品中的杂质组成或模式,Click to edit title style,选择最优,多种互补,结构确证,比较杂质的数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果,杂质谱 比较,杂质谱的比较,新方法,分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）,原方法,中国抗生素杂志，2009，34：734,
4、在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法,杂质谱的比较多种互补,不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长） 不同检测器（uv、DAD） 不同原理的方法 -分离或检测,杂质谱的比较多种互补,柱串联技术 适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，通过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MG C18长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。 原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCX短柱的离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入C18长柱中，从而成功分离；然后由于MGC18长柱中疏水性基
5、团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。,杂质谱分析的基本途经,新杂质的研究 药物杂质的可能来源,1.原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、 阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F 2.中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、
6、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 3.副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、 氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇 霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、 O-甲苯 磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去 二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮 基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯 4.降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮,
7、阿奇霉素中可能存在的杂质：37种,,Company Logo,结构确证常用的方法,模拟色谱图,实际色谱图,毒性快速评价平台,斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。 优点： 杂质用量少 无需知道杂质结构 实验周期短 （34天一个周期）,药物耳毒性检测 利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。 下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。,给药后,系统对照组（正常幼体）,增设有效项目指标加强安全性监控,结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性设立特色有针对性
8、检测项目，最大限度解决安全隐患。 人尿制品增加乙肝表面抗原检查：如尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁等 重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。 含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值检查：如多烯酸乙酯（P272）等。,增设有效项目指标-甲氧基苯胺值,含有不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也称p-茴香胺值）就是ISO推荐的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。 测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成
9、醇胺，醇胺脱水生成的醛亚胺可采用紫外-可见分光光度法在350nm波长处测定。,增设有效项目指标-甲氧基苯胺值,注意： 甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用。以异辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了0.2，则需重新配制试剂。 供试品溶液中加入0.25的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意避光，在350nm波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置10分钟后测定，尽量减小误差。 本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分
10、含量超过0.1%时，可按10g样品加12 g无水硫酸钠的比例脱除水分后测定。另外，应取用新开启包装的供试品。,2-乙基己酸 -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录2010年版药典二部（附录 L）； 如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。,2-乙基己酸 勘误： -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录2010年版药典二部（附录 L）； 如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。 勘误：,目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶剂控制的
11、理念，而且结合中国国情，建立了具有中国特色的残留溶剂检查方法。 中国药典2005版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与ICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。 中国药典2010版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法 抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法 从附录走向各论,残留溶剂,如：头孢泊肟酯 残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录 P）测定。 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 色谱条件与系统适用性试验 略 内标
12、溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200g的溶液，作为内标溶液。,残留溶剂,残留溶剂检查方法及验证,除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的规定,检测方法进行了相应的调整： 顶空进样甲烷气体，记录死时间(t0) 顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间( tR )相对于参考物质保留时间( tR )的相对调整保留时间( Relative adjustment retention
13、 time，RART)法替代RRT法 tR为组分的保留时间;tR为参比物的保留时间。 t0为甲烷保留时间。,残留溶剂,检测方法选择： 直接进样？顶空进样？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？ 验证项目确定： 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？ 原始记录较常发现的问题 连带问题：按无水无溶剂计算,残留溶剂方法建立、验证与常见问题,高聚物 凝胶色谱法（2010年版新增的19个标准）,高聚物 2010版：品种增加,方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶G-10（Sephadex G 10）；短柱子的使用，减少分离时间 2、 商品凝胶柱TSK-GEL G20
14、00SWXL ：头孢地嗪（北京所） 3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所) 4、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱的统一,高聚物 盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较,Sephadex G-10系统,TSK-Gel G2000swxl系统,0.8ml/min,供注射用原料可见异物检查,头孢他啶： 取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸钠溶液（经0.45m滤膜滤过）溶解，依法检查（附录 H），应符合规定。 头孢地嗪钠： 取本品5份，每份2.0g，分别加微粒检查用水溶解，依法检查（附录 H），应符合规定。,有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑 有些品种如甲硝唑
15、等与重金属发生反应产生不溶物 有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀，易有金属屑 有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋白沉淀 有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块,引发不合格的部分原因,供注射用原料不溶性微粒检查,头孢他啶： 取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45m滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000个，含25m以上的微粒不得过600个。 头孢曲松钠： 取本品3份，加微粒检查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000个，
16、含25m以上的微粒不得过600个。,供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求 由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查供试品溶液浓度 制剂最多有11个规格，均按每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000粒，含25m以上微粒不得过600粒；,强化不溶性微粒等项目控制,强化不溶性微粒等项目控制,供注射用原料不溶性微粒检查,可见异物/不溶性微粒检查,原始记录问题 不详细 无趋势 缺方法摸索及分析 原始记录建议,控制生产环境和过程中的污染-外源异物 考察药物与容器的兼容性-内源异物 考察活性成分的稳定性以及与溶剂/添加物的稳定性-内源异物 深刻理解“药品的质量源于设计” 认真做好处方研究/工艺验证和
