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1、呼吸道感染疾病检测新技术,姚俊飞,呼吸道病原体感染概况,上呼吸道感染 鼻腔、咽、喉部 - 常见病因病毒，少数为细菌； 下呼吸道感染(最常见的感染性疾患) 气管、支气管、肺部-由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。 以社区获得性肺炎(CAP)多见,呼吸道病原体感染概况,一、典型“致病菌” 细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等 症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有发热，或有脓血痰 病史：悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎 重症致死性肺炎很多是细菌性 上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报道约在40%左右 肺炎链球菌大约占在60%,呼
2、吸道病原体感染概况,二、非典型病原体 进展的、开放的概念，始用于20世纪30年代末，60年代首次发现了非典型的病原体肺炎支原体 泛指各种能引起肺炎的、临床表现与典型肺炎不同的各种病原体（广义） 临床症状不典型，差异大 在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约占40-60%，逐渐引起各国医疗工作者注意,（一）最常见的非典型病原体,肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌等（狭义的非典型病原体） 感染比例高，超过“非典”50% 临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏器受累明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精神神经症状等 -
3、内酰胺类 （青霉素类、头孢类）、氨基糖苷类（链霉素）等药物无效 治疗：呼吸喹诺酮类、大环内酯类,（二）病毒类,流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、禽流感病毒等 季节性或区域性流行 临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，低氧血症 治疗：主要依靠对症支持治疗。早期抗病毒治疗可能效果较好。预后取决于病毒类型和宿主对病毒的反应,（三）真菌性肺炎,念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛霉菌属等 除组织胞浆菌为原发吸入性感染外，多数为条件致病 多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗生素治疗的患者,白色念珠菌肺炎,各病原体在CAP中感染率,数据来源：,各国社区获得性肺炎指南
4、对非典型病原体的重视情况,肺炎的诊断与治疗研究进展,重视非典型病原体在CAP致病中的作用,要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用等,呼吸道病原菌合并感染的分析,More than one pathogen was identified in 27 (34%) patients in whom an etiological diagnosis was established. It is concluded that RTI is caused by a broad spectrumof etiological agents, a considerable number of patie
5、nts having evidence of infection with more than one pathogen. -Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1998) 17 :685689 One or more viral agents were identified in 369 (45.9%) cases; of which 3.3% were mixed infections. -Pediatric Infectious Disease Journal Single infections were noted in 48 (74%) whereas
6、mixed infections occurred in 17 (26%) of 65 infected infants. -PEDIATRICS Vol. 68 No. 3 September 1981, pp. 322-329 In 20（127） patients there was evidence of infection with more than one microorganism. -Eur J Clin Microbiol. 1985 Jun;4(3):268-72.,呼吸道病原菌合并感染的分析,119例小儿肺炎细菌感染97例，细菌感染及肺炎支原体同时感染19例。 -检验医
7、学与临床2009年12月第6卷第23期 在SARS发病前阶段，合并MP感染阳性率为693 (3956) ；发病后阶段，合并MP感染阳性率为l86 (843） -Joumal of Tropical Medicine Vo13 No3 Sep2003 Mpn和Cpn合并阳性有27例占总阳性数的450 -中国优生与遗传杂志2001年第9卷第3期 9例(12)患儿MP-IgM 和CpnIgM 同时阳性； -世界感染杂志2006年第6卷第4期 本次调查同时检测了8种感染呼吸道的常见病毒，结果提示Mp、Cp多混合有病毒感染。 -中国人兽共患病杂志：1002-2694(2005)030269-02,一项来
8、至亚太地区的研究表明 肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌之一,2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院 He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data,我国CAP病原学构成-流调1,2003年12月-2004年10月份，610例成人CAP，12家医院 刘又宁，陈民钧等，2006，中国结核呼吸杂志,我国CAP病原学构成-流调2,欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学的研究结果（1996-2001）,共计610例患者有病原学证据可供评价，
9、其中细菌/非典型病原体致感染患者采用常规方法检测病原体，混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据,其中细菌合并非典型病原体最常见，占10.2%,共入组665例病人，其中完成非典型病原体检测的为610例,刘又宁等中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8,总结为： 肺炎链球菌仍是我国CAP的主要致病菌 非典型病原体在CAP中的作用不容忽视 混合感染常见，细菌合并非典型病原体感染最常见,特殊人群-肾病综合征和呼吸道感染,1、感冒时，免疫沉积肾病加重 感冒时，人体内的免疫细胞会吞吃入侵体内细菌及病毒，形成一种抗体，而后死亡，达到消灭病菌的功能，以确保人体不受影响。某些人因为体质弱或其它因素，
10、体内免疫细胞比正常的人少，免疫功能不够强，因此免疫细胞有可能不但没有吞吃病菌，而只是暂时把病菌包容起来，身体中的病菌抗体与病菌本身结合成一种免疫复合物，随着血液循环，到了肾脏时，会沉积到肾小球的基底膜，从而对肾脏有一种损害，使大量蛋白流失，最终导致肾病综合征、肾炎等肾病。,2、肾病患者易成感冒高发人群 由于许多慢性肾病患者长期使用免疫抑制剂或细胞毒药物来治疗，导致免疫力下降，而且肾病患者多不适宜进行疫苗接种，加之久病体虚，所以肾病患者是春季感冒的高发人群；感冒是肾病复发、加重诱因，感冒、感染呼吸道疾病会激活自身的免疫反应，而造成免役复合物沉积于肾脏的病变部位，诱发或加速肾脏纤维化，导致肾功能的
11、进行性下降。,肾病患者免疫机制,土耳其学者Guven等报告，肾病患儿接种肺炎疫苗后，尽管最初抗体反应较好，但随着时间的延长，其抗体水平不能得到保持，提示这些患儿对感染的易感性仍然存在 肾病综合征患儿( NS) 的 IgG 明显低于正常人,I gM显著高于正常人,I gA 与正常人无差异. 肾病综合征患者血清中C3、C4、IgG、IgA、IgM 的分析 对肾病综合征患者的随访结果表明：不论活动期、缓解期或停药2年，均有IgG明显降低和IgM明显升高。 肾病综合征缓则低IgG血症原因的探讨 ,特殊人群-肿瘤和呼吸道感染,九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂,西班牙VIRCELL公司：成立于1991年
12、。专业从事呼吸道病原体检测试剂盒的研发和生产。 西班牙VIRCELL公司研发生产的九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸道病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的漏检。 至2012年国内已有超过200家的大型三甲医院、CDC在开展、使用。,产品简介,载玻片 1、独特的载片包被工艺，视野清晰，显色持久 2、一人一片，专人专用 3、一片九项,载玻片,包被有下列抗原： 1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集） 2. McCoy细胞中的肺炎支原体 3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附
13、性和避免细菌聚集） 4. 肺炎衣原体（原生小体） 5. HEp-2细胞中的腺病毒 6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒 7. LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒 8. LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒 9. LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型 10. 质控,检测原理：1、IgM抗体，利于早期诊断 2、血清标本，易采集,试剂盒组成及用途,检测结果显示-阴性结果图谱,POSITIVE,NEGATIVE,POSITIVE,NEGATIVE,检测结果显示- 阳性结果图谱,不同地区儿童呼吸道感染病原体阳性率,临床问题总结,1、查到病毒阳性或弱阳性临床意义不大，因病毒属有自限性特点？ 病毒性呼
14、吸道感染虽属于自限性疾病，主要引起上呼吸道疾病，但具有较强的传染性，而且可引起严重并发症 病毒性呼吸道感染疾病的预后取决于病毒类型和宿主对病毒的反应 临床主要依靠对症支持治疗，早期抗病毒治疗可能效果较好。,2.间接免疫荧光法的敏感性、特异性是多少？什么是敏感性？什么是特异性？ 采用方法学对比进行阴阳性符合率分析，阳性符合率代表灵敏度，阴性符合率代表特异性，结果如下：,3.与凝集法查支原体不同在哪里？哪种方法准确？为什么？,凝集法检查的是总抗体IgM和IgG，九联检是检测IgM 在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（
15、IgM早于IgG出现）；而再次感染时可能不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后23个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。 再次，对与婴儿来说，因为出生前母体的IgG会被动的传递给了胎儿，所以对6个月以下的婴儿IgM检测是更为有用感染标志物,4.有一位病人，临床表现为典型的病毒感染，九联查出来是阴性？医生有疑惑,检测时间？抗体峰值？再次感染？ 九种病原体之外的病毒感染？,5.呼吸道九联检能否查H7N9?,九联检甲型流感血清学反应主要针对的是：所有血清亚型中常见的非可变区蛋白（基质蛋白和核衣壳蛋白
16、）的免疫学反应。所以没有必要每年改变包被的菌株。九联检能够检测到其他甲流血清亚型共同抗原表位引起的免疫反应。 临床免疫检验手册第六版摘录如下：用细胞或蛋黄培养的病毒检测针对核衣壳和基质蛋白的抗体，由于存在型的特异性，不需要每年改变包被的抗原。这些检测在检验中被广泛应用，特别是那些正在流行没有被分离出的抗原。 病原体感染人体后，一般于1周左右产生抗体，2周左右达到高峰，以后逐渐降低至消失，可在体内存留2-3个月左右,九种呼吸道病原菌的潜伏期和IgM抗体出现,引用文献 -九种呼吸道病原菌IgM抗体出现时间,1.陆慰萱，张运剑.军团菌肺炎J. 国际呼吸杂志 2007,27(8):634-635. 2. 刘丽，林花，成焕吉等.儿童社区获得性肺炎肺
