毕业论文——落新妇苷纳米硒的合成及其抗氧化作用

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1、落新妇苷纳米硒的合成及其抗氧化作用落新妇苷纳米硒的合成及其抗氧化作用摘 要以落新妇苷作为表面修饰剂制备纳米硒溶胶,通过紫外可见分光光度法、傅里叶红外色谱分析法对落新妇苷纳米硒进行表征,并利用高效液相色谱法测定落新妇苷纳米硒中落新妇苷的具体含量;最后通过对羟自由基、氧自由基清除能力及还原力的测定,评价落新妇苷纳米硒溶胶的抗氧化活性。结果显示,与落新妇苷原料相比,落新妇苷纳米硒的紫外特征吸收峰及傅里叶红外光谱中的羟基均发生偏移,证明落新妇苷成功修饰在纳米硒表面;通过高效液相色谱法测得落新妇苷纳米硒中落新妇苷的浓度为0.197 g/mL;抗氧化实验中以落新妇苷、Vc做阳性对照,发现落新妇苷纳米硒溶胶

2、对羟自由基和氧自由基的清除力显著提高,且随着落新妇苷纳米硒浓度的增大而增大,同时落新妇苷纳米硒的还原力也有明显提高。本次实验说明落新妇苷成功修饰在纳米硒材料上后,极大的发挥了落新妇苷的生物学价值,增加了落新妇苷的利用率,为落新妇苷的生物应用提供了新的思路和方法。关键词:落新妇苷纳米硒;高效液相色谱法;紫外可见光光度法;傅里叶红外色谱分析法;抗氧化性IAbstractNami was prepared by using astilbe chinensis as surface modifier, and the selenium was characterized by UV-vis spect

3、rophotometry and Fourier transform infrared spectroscopy ( FTIR ). the content of astilbe chinensis in Nami was determined by HPLC Finally, the antioxidant activity of astilbe chinensis nanoparticles was evaluated by the determination of hydroxyl free radical, oxygen free radical scavenging and redu

4、cing power. The results showed that compared with astilbe chinensis, the ultraviolet characteristic absorption peak of astilbe chinensis and the hydroxyl group in Fourier transform infrared spectrum indicated that astilbe chinensis was successfully modified on the surface of Nami Determination of as

5、tilbe chinensis in selenium Nami by high performance liquid chromatography .The concentration of astilbin measured astilbin nano selenium by HPLC was 0.197 mu g/mL; antioxidation experiment in astilbin and Vc as positive control, found that the scavenging capacity of nano selenium sol by astilbin on

6、 hydroxyl radical and oxygen free radicals increased significantly, and increases with the drop of astilbin Nanoselenium at the same time, the concentration of the reducing power of astilbin nano selenium can be improved significantly. This experiment shows that astilbin successfully modified in nan

7、o selenium material, exerts its biological value of astilbin, increase the utilization rate of astilbin, provides new ideas and methods for the biological application of astilbin.Keywords: astilbin nano selenium; HPLC; ultraviolet visible spectrophotometry; analysis of Fourier transform infrared chr

8、omatography; antioxidation12引 言落新妇苷(astilbin,图1),2(R):3(R)-3,4,5,7-4羟基黄烷酮-3-L-吡喃鼠李糖苷,是一种从传统中药土茯苓(Rhizoma Smilacis Glabrae)中提取的二氢黄酮类化合物,为土茯苓的有效成分之一1。近年研究发现,落新妇苷广泛存在于自然界多种植物中,如巴西芸香(Dimorphandramollis),葡萄,土茯苓,菝葜,黄杞叶,贯叶连翘,草珊瑚等。落新妇苷具有很强的的抗氧化能力,能有效清除超氧阴离子和羟自由基等2,具有抑制辅酶A还原酶,抑制醛糖还原酶,保护肝脏,镇痛,抗水肿等多种生物学活性,并且具有

9、选择性免疫抑制作用,可以作为免疫抑制剂用于免疫相关疾病的治疗。落新妇苷易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂,但其水溶性极差,25 时溶解度仅为250 g/mL,根据中国药典属极微溶解样品,这在一定程度上限制了落新妇苷的生物应用。硒能以多种化学形式存在于生物体内,并通过食物链影响到人体,硒是人类必需的微量元素,对人体健康有着重要作用4,但其营养剂量和可耐受的最高剂量之间范围极窄,容易引起硒中毒。相对于无机硒和有机硒,当单质硒以纳米态存在时具有很高的生物活性和安全低毒性。纳米硒具有抗氧化性和抗癌性,可以预防和治疗多种疾5。因此,无毒且高生物活性的纳米硒作为药物、保健品等被广泛的用于生物、医药领域。

10、为获取稳定的纳米材料,其有效方法之一是加入修饰剂。本实验选用落新妇苷为修饰剂制备纳米硒溶胶,既可以克服落新妇苷水溶性差的特点,又能克服无机硒和有机硒毒性大这一缺点。通过评价落新妇苷纳米硒溶胶对羟自由基、氧自由基的清除效果,证明落新妇苷纳米硒有望成为一种高效的、稳定的新型抗氧化材料,为落新妇苷修饰纳米硒这一技术能更好地运用在食品、医疗卫生等领域提供了理论依据,也为水溶性极差的落新妇苷的生物应用开阔了新的前景。图1 落新妇苷分子结构1 试验材料与方法1.1 主要试剂落新妇苷(纯度为80%) 南京景竹生物科技有限公司亚硒酸钠 山东西亚化学工业有限公司维生素C 上海蓝季科技发展有限公司 邻苯三酚 天津

11、市大茂化学试剂厂盐酸 天津市大茂化学试剂厂磷酸二氢钠 天津市大茂化学试剂厂无水乙醇 天津市大茂化学试剂厂双氧水 天津市大茂化学试剂厂过硫酸钾 天津市大茂化学试剂厂绿矾 天津永大化学试剂开发中心水杨酸 天津永大化学试剂开发中心磷酸氢二钠 天津永大化学试剂开发中心Tris-HCl 北京索莱宝科技有限公司三氯乙酸 天津市福晨化学试剂厂铁氰化钾 天津市福晨化学试剂厂三氯化铁 西陇化工股份有限公司1.2 仪器与设备超纯水机 厦门精艺兴业科技有限公司JD1000-2电子天平 沈阳龙腾电子有限公司GPX-9248干燥箱/培养箱(两用) 上海跃进医疗器械有限公司HH-数显恒温搅拌循环水箱 上海圣科仪器设备有限

12、公司CL-3型恒温加热磁力搅拌器 巩义市予华仪器有限责任公司UV-5200PC紫外可见分光光度计 上海美析仪器有限公司YP-2压片机 上海山岳科学仪器有限公司IS5傅里叶红外光谱仪 上海力晶科学仪器有限公司TGL-16GB台式离心机 上海书培实验设备有限公司TDL-5-A低速大容量离心机 上海安亭科学仪器厂SB-3200DTDN超声波清洗机 宁波新艺生物科技服份有限公司BDC-215KS电冰箱 青岛海尔股份有限公司1.3 主要试剂配制方式 1.3.1 落新妇苷纳米硒合成所需溶液1)60乙醇溶液:量取60 mL无水乙醇并加入40 mL的超纯水,混匀。2) 25 mM的落新妇苷的乙醇溶液:将纯度为

13、80的落新妇苷粉末准确称取0.35 g,溶于60乙醇中6,定量转入25 mL的容量瓶中,并定容至刻度。3)0.1 M的Na2SeO3溶液:准确称取0.17 g Na2SeO3粉末,溶于超纯水中,转入10 mL容量瓶中,并定容至刻度。1.3.2 清除羟自由基所需溶液1)6 mM的绿矾(FeSO47H2O)溶液:准确称取0.17 g绿矾晶体,用超纯水溶解于烧杯中,转入100 mL容量瓶,定容至刻度,摇匀。2)6 mM的水杨酸溶液:准确称取0.03 g水杨酸,用无水乙醇溶于烧杯中,转入100 mL容量瓶,定容至刻度,摇匀。3)6 mM的双氧水:准确称取0.07 g 30H2O2溶液于100 mL容量瓶中,并用超纯水定容至刻度,摇匀。1.3.3 还原力测定所需溶液1)磷酸缓冲液(0

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