血栓与止血检验实验诊断()

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1、血栓与止血检验 实验诊断,高科,随着血栓与止血检验在临床科室的广泛应用，凝血项目的检测已成为出血性疾病和血栓性疾病的常规检验项目；也成为手术患者术前筛查有无凝血系统疾病的常规检验项目；也是判断抗凝和溶栓治疗监测的关键指标。,内容导读,一、血栓及止血基本理论 二、凝血项目测定的原理及临床意义 三、全自动凝血分析仪的检测方法及原理 四、凝血标本采集的注意事项 五、凝血检测相关问题,一、血栓及止血基本理论,1、血液凝固 2、凝血因子及其命名 3、凝血过程 4、瀑布学说 5、抗凝及溶栓治疗监测的指标,1、血液凝固,血液凝固是血液由液体状态转为凝胶状态的过程，简称为凝血。,机体的凝血系统是非常精妙的平衡

2、系统，由凝血与抗凝两方面组成，正常生理状态下两者维持着动态平衡，血液在血管中维持着流动状态，而血管损伤时便快速形成凝块，当止血功能障碍时便发生血栓栓塞或出血现象。,电 镜 下 的 血 凝 块,血液凝固（瀑布学说） 该学说认为血液凝固过程基本上是一系列凝血因子有限水解的过程，凝血过程一旦开始，各个凝血因子便一个激活另一个，形成一个“瀑布”样的反应链直至血液凝固。每个凝血因子都被其因子或其他有关因素激活，最后生成纤维蛋白。,2、凝血因子及其命名,概念：把在血液和组织中直接产凝血的物质统称为凝血因子,因子II、VII、IX、X都是在肝脏合成的，合成时需维生素K参与，因此也称为维生素K依赖因子。,3、

3、凝血过程 包含：三条途径或两个系统 内源性凝血途径：指由因子XII被激活到IXa-VIIIa- Ca2+-PF3复合物形成的过程。 外源性凝血途径：指从组织因子(TF)释放入血到TF-VIIa- Ca2+复合物形成的过程。 共同途径：指从因子X的激活到纤维蛋白形成的过程，它 是内、外源凝血系统的共同凝血阶段。,凝血过程,内源凝血途径,外源凝血途径,共同凝血途径,4、凝血过程（瀑布学说）,1、口服抗凝药监测: PT，（华法林，香豆素类等） ： 2、肝素治疗监测: APTT，TT ，AT-III（抗凝血酶III） 3、溶栓治疗监测：（链激酶，尿激酶，蛇毒等） 一级监测：PT，TT，FIB 二级监测

4、：D-Dimer（D-二聚体），FDP（纤维蛋白降解产物）PLG（纤溶酶原）, a2-AP（a2-抗纤溶酶）。,5、抗凝及溶栓治疗监测的指标,二、凝血项目测定的原理及 临床意义,1、凝血酶原时间测定 2、活化部分凝血活酶时间测定 3、凝血酶时间测定 4、纤维蛋白原测定 5、D-二聚体测定,【原理】在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需时间即凝血酶原时间。 【步骤】 血浆组织因子钙离子 观察凝固时间 【参考值】 PT （凝血酶原时间）: 10-14s PTA（活动度）：80%-120

5、% PTR（比值）：0.8-1.2 INR（国际标准化比值）：0.8-1.5,1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）,【结果报告形式】 凝血酶原时间（PT）：大于正常3秒以上为异常。 凝血酶原活动度（PTA）= PTR100% PT比值（PTR）=患者PT/正常对照PT 国际标准化比值（INR）=PTRISI,1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）,INR: 国际标准化比值 ISI: 国际敏感指数,1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）,【分析流程】,50l血浆,100l PT试剂,温育3分钟-检测,【临床应用】 1、是反

6、映外源性凝血系统最常用的筛查试验。 2、是监测口服抗凝剂的首选指标。 3、是维生素K缺乏的监测指标。,【异常意义】 1、PT延长见于： 先天性凝血因子、缺乏。 后天性缺乏，见于DIC、严重肝病、维生素K缺乏等。 2、PT缩短见于：DIC早期高凝状态、血栓性疾病、心肌梗 死等。 3、口服抗凝剂的监测。,1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）,世界卫生组织（WHO）推荐 应用口服抗凝剂时 【INR的允许范围】： 非髋部外科手术前 1.5-2.5; 髋部外科手术前 2.0-3.0; 深静脉血栓形成 2.0-3.0; 治疗肺梗塞 2.0-4.0; 预防动脉血栓形成 3.0-4.

7、0; 人工瓣膜手术 3.0-4.0,1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）,【原理】在抗凝血浆中，加入足量的活化接触因子激活剂和部分凝血活酶（代替血小板的磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源性抗凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即称为活化部分凝血活酶时间。 【步骤】血浆FXII激活剂部分凝血活酶钙离子 观察凝固时间. 【参考值】正常对照为2035s,超过正常对照10s以上为异常。,2、活化部分凝血活酶时间测定 （Activated partial thromboplastin time，APTT）,50l血浆,2、活化部分凝血活酶时间测定 （Activa

8、ted partial thromboplastin time，APTT）,【分析流程】,50lAPPT试剂,50l的氯化钙溶液,1分钟加热,3分钟加热-检测,2、活化部分凝血活酶时间测定 （Activated partial thromboplastin time，APTT）,【临床应用】 1、是检查内源性凝血系统是否正常的筛查试验。 2、用于证实先天性或获得性凝血因子、是否缺陷。 3、是普通肝素治疗监测的首选指标。,2、活化部分凝血活酶时间测定 （Activated partial thromboplastin time，APTT),【异常意义】 1、延长: (1) 见于因子 和水平减低，

9、如甲型血友病、乙型血友病等。 (2) 严重的凝血酶原、 因子、和纤维蛋白原缺乏。如肝脏疾病、阻塞性黄疸、应用肝素以及低(无)纤维蛋白原血症。 (3)纤容活力增强，如继发性、原发性纤溶以及血循环中含有纤维蛋白(原)降解物(FDP)。 2、缩短 （1）高凝状态，如DIC的高凝血期，促凝物质进入血流以及凝血因子的活性增高等。 （2）血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊高征和肾病综合征等。,【原理】在受检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，在凝血酶的作用下纤维蛋白原转变成纤维蛋白，记录血浆凝固所需的时间为凝血酶时间。 【步骤】血浆凝血酶 观察凝固

10、时间 【参考值】正常对照为1421s，大于正常对照3s以上为异常。,3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）,3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）,【分析流程】,50l血浆,100l凝血酶试剂,温育3分钟-检测,3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）,【临床应用】 1、用于判定血栓前状态或血栓性疾病的筛查项目。 2、用于纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查。 3、肝素诱导凝血酶时间延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断。,3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）,【异常意义】 1、延长： 见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多。 如S

11、LE、肝病、肾病等，低（无）纤维蛋白血症。 纤维蛋白原降解产物（FDP）增多、 如DIC、原发性纤溶等。 肝素抗凝治疗、体外循环、血液透析等。 2、缩短： 见于血标本有微小凝块或钙离子存在时。,4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：,【测定原理】 Clauss法，也叫凝血酶法。 为WHO推荐的测定Fbg的参考方法。 即在被检血浆中加入过量的凝血酶，血浆即凝固，其凝固时间与纤维蛋白原浓度呈负相关，从国际标准品Fbg参比血浆测定的标准曲线中可获得Fbg浓度。,【参考范围】：2.00-4.00 g/L,4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：,【分析流程

12、】,10l血浆,90ul Owrens Veronal 缓冲液,50l凝血酶试剂,3分钟加热-检测,4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：,【异常意义】 1、减低：(1.5g/L) 见于肝脏疾病、DIC中晚期、原发性纤溶亢进、低（无）纤维蛋白原血症、溶栓治疗等。 2、增高：纤维蛋白原是一种急性时相蛋白,其增加往往是机体的一种非特异反应。常见于下列疾病：急性感染，恶性肿瘤、心机梗塞、外科术后、血栓前状态或血栓性疾病。,【临床应用】 1、在溶栓时、抗凝治疗时、手术前监测凝血功能。 2、是预防血栓形成的独立因素。 3、肿瘤病人化疗后监测Fbg，防止Fbg降低时出现大出血。,5

13、、D-二聚体测定（仪器分析法）,【原理】免疫比浊法 将待测物质相对应的单克隆抗体包被在聚苯乙烯胶乳颗粒上，当标本中含有D-二聚体时，单克隆抗体即与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。单克隆抗体能触发凝集反应，引起浊度的增加。仪器在800nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的含量。,【参考值】 0 - 1 mg/L,5、D-二聚体测定（仪器分析法）,【临床应用】 1、用于弥漫性血管内凝血（DIC）的早期诊断。 2、用于血栓疾病的诊断和溶栓疗效的观察。 3、用于肝炎病情的观察。 4、在血液病方面的临床应用。 5、慢性支气管炎急性发作期合并肺部感染

14、。 6、在深静脉血栓、急性心梗、肺栓塞、脑梗死诊断中 的应用。,5、D-二聚体测定（仪器分析法）,【临床意义】 1、D-二聚体被视为DIC早期诊断的首选标志物。 2、D-二聚体可做为溶栓疗效观察的一个特异性指标。 3、D-二聚体含量的升高幅度与肝炎病情的严重程度密切相关。 4、D-二聚体是唯一反映凝血和纤溶的理想指标。 5、D-二聚体是目前鉴别原发性和继发性纤溶的理想指标。 6、D-二聚体被视为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物。 7、D-二聚体升高不能诊断血栓的形成部位却能够提示体 内是否有血栓的形成。,三、全自动凝血分析仪的检测 方法及原理,1、仪器检测功能 2、仪器检测方法及原理,1、仪

15、器检测功能： Sysmex CA-7000及CS-5100全自动凝血分析仪检测项目有十几种，常规的检验项目有PT、APTT、TT、Fbg、D-二聚体、FDP等。两台仪器检测原理相同，具有全自动浓度稀释分析功能、自动再检、自动连锁筛选等功能，全自动进样架进样、全能随机分析、急诊随时插入分析。采用高频振荡混匀技术，能够保证样本和试剂充分混匀，四组检测波长能够满足不同厂家试剂的需求。,2、仪器检测方法： 全自动血凝分析系统CA-7000用于凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统因子的检测，系统采用以下三种检测方法： 1）、 凝固法 2）、 发色底物法 3）、 免疫分析法,注：凝固法采用了散射光加百分比凝固测定

16、原理，能有效地避免溶血、脂血和及黄疸标本对凝固分析测定干扰,（一）凝固法（检测原理）： 对固定数量的血浆进行了一定时间的预热之后，把试剂加进去。被加进了试剂的样品再暴露到光底下，然后在凝固的过程中（即纤维蛋白原向纤维蛋白的转变），随着散射光强度的变化，就可以检测到血浆浑浊度的变化。通过散射光强度的变化，就可以得到一个凝固曲线，通过百分比检测方法就可以知道血浆凝固的时间。,1.光学检测方法（散射光检测方法） CA-7000使用的是光学检测方法，而且在凝固的过程中，随着散射光强度的变化，可以检测到血浆的浑浊度的变化。从一个光源发出的光（660nm的波长）到达这个样品。样品由于浑浊而使光变得离散起来。散射光被光电二极管接收，光电二极管再把接收到的光信号转变为电子信号。这些电子信号通过一个微型计算机的存储和计算，就可以得到凝固的时间。,2.凝固点检测方法（百