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1、选修3 技术总结,1、基因工程基本操作 2、植物组织培养 3、植物体细胞杂交 4、动物细胞培养 5、动物细胞核移植 6、动物细胞融合 7、单克隆抗体的制备 8、体外受精 9、胚胎移植,基因工程基本操作的四个步骤,1、目的基因的获取,2、基因表达载体的构建,3、将目的基因导入受体细胞,4、目的基因的检测与鉴定,1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成,包括启动子、目的基因、终止子、标记基因,植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 动物：显微注射法（受精卵） 微生物：感受态细胞法,目的基因是否插入：DNA分子杂交技术 目的基因是否转录：分子杂交技术 目的基因是否翻译：抗原-抗
2、体杂交技术,（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。,BamHI HindIII,amp,（1）需用 限制酶。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。,BamHI HindIII,氨苄青霉素,（1）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 。 （2）在 检测到人乳铁蛋白说明基因表达成功。,1.下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线,乳腺蛋白基因启动子,乳汁,脱分化,再分化,植物组织培养的过程,（未分化）,（分化）,原理：,植物细胞的全能性,有丝分裂。 无机物、有
3、机物和植物激素（生长素，细胞分裂素等，避光,薄壁细胞 高度液泡化 排列疏松、无规则,有丝分裂、细胞分化。 无机物、有机物和植物激素（生长素，细胞分裂素等，需光,去壁,去壁,纤维素酶果胶酶,原生质体,植物细胞,原生质体融合,再生细胞壁,杂种细胞,去分化,愈伤组织,杂种植株,再分化,植物体细胞杂交过程示意图,植物细胞,离心、振动、电刺激、 聚乙二醇,细胞融合成功的标志,植物组织培养,优势：克服远缘杂交不亲和障碍 原理：植物细胞的全能性，膜具有一定流动性,动物细胞培养,取 的组织、器官,原代培养 （1-10代细胞）,传代培养（10-50代细胞）,单个细胞,加入液体培养液,动物胚胎或幼龄动物,胰蛋白酶
4、,接触抑制,胰蛋白酶,无限传代（细胞系）,动物血清,去核卵细胞（减II中期）,供体 细胞,重组细胞,代孕母牛C,无性繁殖,体细胞的核移植过程,含有促进细胞核全能性表达的物质,原理：动物细胞核具有全能性,遗传物质来源：供体细胞核和受体线粒体,A细胞,B细胞,人工诱导,杂交细胞,动物细胞融合,电激、PEG、灭活病毒,原理：细胞膜具有一定的流动性,BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）,（一选）选择性培养基：获得杂交瘤细胞,获得产生相应抗体的B细胞,（抗体检测）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内培养,单克隆抗体的制备,杂交瘤细胞特点：既能无限增殖，又能产生特异性抗体。,单克隆抗体最主
5、要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。,胚胎移植,采集卵母细胞,体外培养,采集精子,体外获能,体外受精,早期胚胎培养,受体牛,体外受精,（时期： ）,1）超数排卵（试剂） 2）活体取卵（仪器） 3）从屠宰的卵巢取卵,假阴道法 手握法 电刺激法,（培养法，化学法）,（获能溶液或专用受精溶液）,成熟的卵子,获能的精子,MII中期,方法,方法,发育培养液：两盐、两酸、两素、血清和水,有性繁殖,选择,供体母牛,受体母牛, 处理,超数排卵,供体公牛,配种,冲卵,质量检查、培养,胚胎移植,妊娠检查,分娩（胚胎移植的犊牛）,胚胎移植的基本程序,同期发情,1.卵细胞成熟 期。 2.胚胎移植用 期。 3.胚胎分割用 期。 4.同期发情用 激素 5.超数排卵用 激素。 6.胚胎干细胞来自于 。,MII中,桑椹胚或囊胚,桑椹胚或囊胚,孕激素,促性腺激素,原始性腺或早期胚胎,
