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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果清血糖浆药理作用的实验研究【摘要】 对具有祛风止痒，养血润燥作用的清血糖浆进行了相关的药 理学 研究 ，得出其具有以下三方面的作用：(1)稳定肥大细胞膜作用；(2)抗组胺作用；(3)增强红细胞清除循环免疫复合物的功能。 【关键词】 瘙痒症；药理学；动物；实验 瘙痒是皮肤科许多疾病中常见的伴随症状，引起瘙痒的原因众多，机理复杂，长期的瘙痒给患者身心带来了巨大的痛苦，我科室清血糖浆(主要成分：当归、川芎、白芍、生地、防风等)以中医 理论 为基础，辨病辨证相结合，根据
2、实际临床观察，精心研制而成，在 治疗 和缓解瘙痒症状，尤其是血虚风燥型瘙痒上取得了明显的疗效1。为了进一步弄清本药确切的药理作用，我们对清血糖浆进行了相关研究，结果报告如下。 1 实验材料 实验动物 昆明种小鼠，雌雄皆用，体重1822g，清洁级，合格证号：医动字-042，由华中 科技 大学同济医学院实验动物中心提供，以上动物均喂以普通饲料，自由饮水。 试剂与药物 (1)右旋糖酐40：规格30g/500ml，武汉滨湖双鹤药业有限公司；(2)色甘酸钠：湖北潜江制药厂生产，批号：；(3)卵蛋白：天津东方卫生材料厂生产，批号：；(4)百白破疫苗：卫生部长春生物制品研究所生产，批号：-1-4；(5)酵母
3、多糖：由第二军医大学长海 医院 免疫室提供；(6)补体致敏酵母多糖：由第二军医大学长海医院免疫室提供；(7)东宝补血胶囊组：通化东宝药业有限公司生产，批号；(8)清血糖浆：由湖北省中医院制剂科提供。 2 方法 与结果 抗血虚实验 血虚动物模型的制备 按 文献 方法操作2。 方法 取10只健康昆明种小鼠，雌雄兼用，作为正常组，给生理盐水/只，灌胃，取50只血虚模型小鼠随机分为空白对照模型组；清血糖浆高、中、低剂量组；东宝补血胶囊对照组。空白对照模型组给生理盐水；清血糖浆高、中、低剂量组按表中剂量给药，每次灌胃体积均为/只；东宝补血胶囊对照组按/kg(胶囊粉末)溶解后灌胃，每次灌胃体积均为/只。各
4、组每日灌胃一次，连续7天，第7天小鼠眼眶取血，分别进行RBC、WBC计数、Hb含量测定。按酵母菌红细胞花环实验郭峰法3测定红细胞的免疫功能，以一个红细胞结合上2个或2个以上酵母菌为一朵花环，计数200个RBC， 计算 出相应的红细胞C3b受体花环率()和红细胞免疫复合物花环率()。结果xs表示，采用成组t检验比较组间差异。 结果 见表1、2、3。表1 清血糖浆对失血性小鼠血虚证模型血液学的 影响 (xs) 注：与正常组相比P；与空白对照模型组相比P；与空白对照模型组相比P 经统计学处理：模型组在RBC和WBC数量上及Hb的含量上均显著性的低于正常组(P)，说明造模成功。清血糖浆高、中剂量组能显
5、著性的提高血虚小鼠的RBC和Hb的含量，其中，高剂量组还能显著性的提高血虚小鼠WBC的数量，清血糖浆低剂量组血虚小鼠的RBC、WBC的数量和Hb的含量与空白对照模型组差异无显著性。阳性对照东宝补血胶囊组能显著性的提高血虚小鼠的RBC的数量和Hb的含量，但对血虚小鼠的WBC的数量无明显影响。清血糖浆高剂量组与正常组相比差异存在显著性。 表2 清血糖浆对失血性小鼠血虚证模型的影响 (xs)注：与正常组相比P；与空白对照模型组相比P；与正常组相比P 经统计学处理：空白对照模型组与正常组相比差异有显著性，提示造模成功。清血糖浆高、中剂量组能显著性的提高血虚小鼠，与模型组相比差异有显著性。而清血糖浆低剂
6、量组无此作用。但清血糖浆高、中、低剂量组在给药后的与正常组相比差异仍有显著性。 表3 清血糖浆对失血性小鼠血虚证模型对的影响注：与正常组相比P；与空白对照模型组相比P；与正常组相比P 经统计学处理：空白对照模型组与正常组相比差异有显著性，提示造模成功。清血糖浆高、中剂量组在给药前后能显著性的降低血虚小鼠，与模型组相比差异有显著性，而清血糖浆低剂量组无此作用。在给药后，清血糖浆高剂量组与正常组相比无明显差异(P)，而清血糖浆中、低剂量组则与正常组相比有明显的差异(P)。 右旋糖酐所致的小鼠全身瘙痒实验 取50只昆明种小鼠，雌雄兼用，随机分为空白对照组，清血糖浆高、中、低剂量组，扑尔敏组。空白对照
7、组、清血糖浆高、中、低剂量组给药同前；扑尔敏组按/kg给药，使用前用蒸馏水溶解，每次灌胃体积均为/只。各组每日灌胃1次，连续7天。于末次给药后30min，给各小鼠尾静脉注射%右旋糖酐/10g，以小鼠前爪搔抓头部，后爪搔抓躯干，嘴咬全身各部位作为瘙痒指针，记录30min内小鼠搔抓的次数及瘙痒持续的时间，以此作为评价药物的止痒作用，各组进行组间t检验，结果见表4。表4 清血糖浆对右旋糖酐所致的小鼠全身瘙痒的止痒作用 (xs) 注：与空白对照组相比P；与扑尔敏组相比P 经统计学处理：清血糖浆高、中、低剂量组能够显著的减少右旋糖酐所致的小鼠全身瘙痒的次数及持续时间，且表现出了较好的量效关系。阳性对照组
8、扑尔敏组也能显著的减少右旋糖酐所致的小鼠全身瘙痒的次数及持续时间。清血糖浆高、中、低剂量组在减少小鼠全身瘙痒的次数及持续时间方面与扑尔敏组相比在统计学上无明显差异。 .3 肥大细胞实验 . 分组 大鼠50只，随机分入空白对照组，色甘酸钠组，清血糖浆高、中、低剂量组，每组10只。模型对照组、色甘酸钠组给生理盐水3ml/只灌胃；清血糖浆高、中、低剂量组按表5所示给药，每次灌胃体积均为3ml/只。各组每日灌胃一次，连续7天。 . 制备抗血清 取4只大鼠，体重150200g，肌注卵蛋白25mg/kg，同时腹膜内注射免疫佐剂百白破疫苗2个/只，正常饮食、饮水，12天后眶内采血，制备大鼠抗卵蛋白血清，置于
9、-20冰箱保存备用。 . 方法 除空白对照组头皮下注射生理盐水外，其余各组均头皮下注射抗卵蛋白血清1：5稀释液，48h后各组动物口服给药(色甘酸钠按25mg/kg静脉给药)，给药后50min静脉注射1%卵蛋白，30min后处死大鼠，剥离颅骨置于95%的乙醇中，1h后取出移入无水甲醇中，再用%中性红染色30min。染色后用盐水冲洗并剥离骨膜，置于载玻片上封固。光镜下计数200个肥大细胞中脱颗粒的细胞数目。 . 结果 见表5。 表5 清血糖浆对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒的 影响 (xs)注：与空白对照组相比P；与色甘酸钠组相比P 经统计学处理：清血糖浆高、中、低剂量组能够显著地抑制大鼠颅骨骨膜肥大
10、细胞脱颗粒，阳性对照组色甘酸钠组也表现出了相同的功能。但清血糖浆高、中、低剂量组在抑制大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒方面与阳性对照组色甘酸钠组相比有明显的差异(P)。 3 清血糖浆止痒机理的探讨 通过上述实验 研究 表明清血糖浆至少在以下3个方面阻断或干扰了瘙痒的产生：(1)稳定肥大细胞膜作用：通过稳定肥大细胞膜抑制肥大细胞脱颗粒，释放瘙痒介质。(2)抗组胺作用：能够直接拮抗组胺介导的瘙痒。(3)增强红细胞清除循环免疫复合物的功能。 临床上血虚风燥型瘙痒患者可表现出红细胞免疫学方面的异常，如陈如泉4等对临床血虚证患者血液标本进行检测后发现血虚证患者的红细胞C3b受体花环率明显减少，而红细胞免疫复合
11、物花环率则明显升高，这提示血虚证患者的红细胞免疫功能呈低下状态，血虚证的病理实质中包含着红细胞免疫功能的低下。而本药能增强红细胞清除循环免疫复合物的功能，并通过这一机制减少抗原抗体复合物的沉积，避免沉积的抗原抗体复合物激活补体释放过敏毒素(如C3a、C4a、C5a)作用于肥大细胞或嗜碱性粒细胞上的相应受体，促使其脱颗粒，释放瘙痒介质，而诱发或加重瘙痒。这应该是本药对血虚风燥型瘙痒疗效突出的一个重要原因。 综上所述，本药具有抗变态反应，增强红细胞免疫功能，能多途径、多靶点的发挥止痒作用，与单纯抗组胺药相比，本药具有更加强大的止痒作用，且本药还能提高血虚小鼠的RBC、WBC的数量，Hb的含量，这可能在改善皮肤的营养状态，促进皮肤功能的恢复方面也发挥了一定的作用。 【 参考 文献 】 1 王玉英.清血合剂 治疗 皮肤瘙痒的临床观察.湖北中医杂志，XX，25(3)：29. 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1994，1010. 郭峰.红细胞免疫及其调节功能测定方法.免疫学杂志，1990，6(1)：60. 陈如泉.血虚证的临床及实验研究探讨. 中国 中西医结合杂志，XX，21(6)：473. 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。
