《民族药余甘子冻干粉免疫调节作用的血清药理学研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《民族药余甘子冻干粉免疫调节作用的血清药理学研究（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果民族药余甘子冻干粉免疫调节作用的血清药理学研究 作者：罗春丽， 张永萍， 邱德文， 郑维发 【关键词】 民族 摘要：目的实验旨在 应用 中药血清药 理学 研究 方法 ，研究民族药余甘子对小鼠脾淋巴细胞增殖的 影响 ，对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的影响以及对小鼠腹腔巨噬细胞细胞活化作用的研究。方法余甘子采用鲜果榨汁经冷冻干燥冻干保存。小鼠随机分6组，其中时效关系研究2组，量效关系研究4组。按/10 g体重用余甘子溶液灌胃。灌胃后30180 min内不同时相无菌
2、取血，利用中药血清药理学方法对实验血清作时效关系研究及量效关系研究。结果与结论时效关系研究表明，用余甘子冻干粉溶液灌胃后30180 min内不同时相含药血清对小鼠脾淋巴细胞具有活化作用，并在给药h时实验血清活化作用明显；量效关系研究表明，余甘子大剂量组实验血清对促进小鼠脾淋巴细胞增殖，促进小鼠腹腔巨噬细胞细胞活化作用以及小剂量组实验血清对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的影响均具显著差异性。 关键词：余甘子； 含药血清； 腹腔巨噬细胞； 淋巴细胞； S180腹水肿瘤细胞； 免疫调节 Study on the Immunoregulatory Effect of Phyuanthus Emblic
3、a in Mice Abstract:Objective The experiment applies the traditional Chinese medicine Plasma Pharmacology. This experiment studies how Phyuanthus emblica Phyllanthus emblica, the traditional Chinese medicine，promotes the propagate of the spleen lymphocyte of small mice, how it influents the survival
4、rate of the mouse S180 ascites tumor cell and how it activates the macrophage in the abdominal the fresh fruit juice of Phyuanthus emblica. Dry it and keep in freeze. The small mice are randomly divided in groups. Among them, groups are studied in time-efficacy relation, the other are studied in qua
5、ntity-efficacy relation. Infuse the solution of Phyuanthus emblica Phyllanthus emblica per 10g wEight into the stomach of the small mouse. Take the blood in sterile environments at different time after0min but before 180min, then study the time-efficacy relation and the quantity-efficacy relation wi
6、th the traditional Chinese medicine Plasma and ConclusionThe study of time-efficacy relation expresses that after infusing the solution of Phyuanthus emblica Phyllanthus emblica, medicated serum in different time activates the spleen lymphocyte of small mice differently after the0min but before 180m
7、in. During this period, onh the activation of the medicated serum is the most obvious. The quantity-efficacy relation research expresses that megadose promotes the propagate of the spleen lymphocyte of small mouse and activates the macrophage in the abdominal cavity more obviously. On the other hand
8、, the small dosage influents the survival rate of the mouse S180 ascites tumor cell more obviously. Key words:Phyuanthus emblica; Drugcontaining sera; Immunoregulation; S180 ascites tumor cell; Spleen lymphocyte 余甘子为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实，余甘子首载于南方草木状。余甘子在本草中首载于唐苏恭新修本草。作为民族药最早被记载的是西藏帝玛
9、尔丹增彭措著的晶珠本草。实验研究证实，余甘子具有抗氧化、抗致畸、防肿瘤、抗病原微生物、降压、抗爱滋病毒、降血糖及改善糖尿病并发症、补益及降脂减肥等作用。证明其在提高机体免疫力方面具有很好的调节作用。中药血清药理实验方法具有体外实验条件可控性强，药物效应易于检测，可深入揭示药物作用机理等优点，又能防止中药粗制剂本身理化性质对实验的干扰，还可反映出药物中可吸收部分的直接作用。体现了体外和体内实验较好的结合。实验采用较先进的血清药理学方法，用小鼠服药后的含药血清代替中药煎剂进行体外实验，对脾脏淋巴细胞增殖活性、对小鼠腹腔巨噬细胞细胞活化作用以及对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的影响进行免疫功能检测，
10、通过时-效关系及量效关系对余甘子的药理作用及免疫调节作用机理作进一步阐明。 1 材料 试剂RPMI1640培养基；10%新生小牛血清；四甲基偶氮唑盐、刀豆蛋白-型、二甲基亚砜；其余试剂均为 分析 纯。 药品余甘子为鲜果榨汁的冷冻干燥粉。 实验动物昆明种健康小鼠，雌雄各半，体重g，由江苏省药用植物生物技术重点实验室动物房提供。 实验仪器超净工作台；SHELATC2323型CO2孵育箱；日本产BIO-RED50型酶标仪；96孔培养板；24孔培养板；数控恒温水浴箱；血球记数板。 方法 .1 余甘子灌胃后不同时相含药血清对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进作用 . 含药血清的制备参照 文献 1，小鼠用余甘子大剂
11、量组灌胃，为成人日剂量的20倍。按/10 g体量灌胃给药，于给药后30，60，90，120，180 min分别用乙醚吸入麻醉，摘眼球无菌取血，37促凝，000 r/min离心10 min分离血清，血清呈透明、清亮、淡黄色、无沉淀、未溶血。56，30 min灭活。4保存备用。 . 正常小鼠对照血清的制备小鼠用蒸馏水/10 g体重灌胃，30 min后摘眼球取血，37促凝，000 r/min离心10 min分离血清，4保存备用。 . 脾淋巴细胞悬液制备参照文献2，正常小鼠脱颈椎处死，体积分数为的酒精浸泡消毒，无菌取出脾脏，置盛有510 ml Hanks液平皿的100目铜网上，轻轻捻碎，使单个细胞经网
12、进入Hanks液中，并移吸至刻度离心管中800 r/min离心10min，经Tris-NH4Cl除去红细胞，Hanks液洗3遍，镜下细胞记数，用RPMI1640培养液配成5106/ml悬液。 . 余甘子不同时相含药血清促进淋巴细胞增殖测定参照文献3，于96孔培养板中每孔加入100 脾淋巴细胞悬液，再加入100 ，g/ml ConA溶液及20 的实验血清，4复孔；20 空白血清，4复孔，37、体积分数为的CO2培养487。培养结束前4每孔加入MTT溶液10 l，培养结束弃去上清，每孔加入DMSO溶液200 ，充分震荡后静置20 min，酶标仪测定A490 nm值。 .2 余甘子含药血清促进小鼠脾
13、淋巴细胞增殖 . 含药血清的制备参照文献4，小鼠随机分4组，每组6只，生理盐水组、余甘子大剂量组、余甘子中剂量组、余甘子小剂量组。按/10 g体重量灌胃给药，1次/d，连续给药d。于末次给药120 min后，摘眼球取血，37促凝，000 r/min离心10 min分离血清，血清呈透明、清亮、淡黄色、无沉淀、未溶血。56，30 min灭活。4保存备用。 . 正常小鼠对照血清的制备小鼠用蒸馏水/10 g体质量灌胃，30 min后摘眼球取血，37促凝，000 r/min离心10 min分离血清，4保存备用。 . 脾淋巴细胞悬液制备正常小鼠脱颈椎处死，75%酒精浸泡消毒，无菌取出脾脏，置盛有510 m
14、l Hanks液平皿的100目铜网上，轻轻捻碎，使单个细胞经网进入Hanks液中，并移吸至刻度离心管中800 r/min离心10 min，经Tris-NH4Cl除去红细胞， Hanks液洗3遍，镜下细胞记数，用RPMI1640培养液配成5106/ml悬液。 . 余甘子含药血清促进小鼠脾淋巴细胞增殖测定于96孔培养板中每孔加入100 脾淋巴细胞悬液，再加入100 ，g/ml ConA溶液及20 的实验血清，4复孔；20 空白血清，4复孔，37、体积分数为的CO2培养487。培养结束前4每孔加入MTT溶液10 ，培养结束弃去上清，每孔加入DMSO溶液200 ，充分震荡后静置20 min，酶标仪测定
15、A490 nm值。 .3 余甘子含药血清对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的 影响 . 含药血清的制备同上。 . 正常小鼠对照血清的制备同上。 . S180腹水肿瘤细胞悬液的制备无菌条件下取S180腹水癌细胞，用基本1640液洗涤离心3次后，用完全1640液配成3105个/ml备用。 . S180腹水肿瘤细胞存活率的测定于96孔培养板中每孔加入100 l S180腹水癌细胞悬液，再加入100 ，2g/ml ConA溶液及20 l的试验血清，4复孔；20 l空白血清，4复孔，37、体积分数为的CO2培养4872。培养结束前46每孔加入MTT溶液10 ，培养结束弃去上清，每孔加入DMSO溶液200，充分震荡后静置20 min，酶标仪测定A490nm值。 .4 余甘子含药血清对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用 . 含药血清的制备同上。 . 正常小鼠对照血清的制备同上。 . 小鼠腹腔巨噬细胞分离 参考 文献 6，小鼠腹腔注射质量分数为3
