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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果毒热平注射液抗流感病毒作用的体内实验研究 作者：张艳丽，顾立刚，范新生，李澎涛 【摘要】 目的：观察毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的死亡保护作用和对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。 方法 :用流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，观察肺指数、病毒致小鼠病死率。结果：毒热平注射液的大、中剂量组对小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用，对流感病毒感染小鼠具明显的死亡保护作用。结论：毒热平注射液在小鼠体内具有效的抗流感病毒作用
2、。 【关键词】 毒热平;流感病毒;肺炎模型 中医学称流感为“时行感冒”或“重伤风”，其不同于普通感冒，是由时邪病毒引起的一种外感热病，无季节性和地域性，具有传染性和流行性。流感病毒抗原的易变性使疫苗难以达到理想预防效果1;化学药物因其特异性不强，副作用明显，性价比低下等特点而难以广泛 应用 。在此我们开展了新药毒热平注射液的抗流感病毒实验 研究 ，为该药的临床应用奠定基础，拓宽祖国医药的开发和使用前景。 1 实验材料 病毒 流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)， 中国 中医药研究院中医所提供，本实验室-76保存备用。于9日龄鸡胚尿囊腔连续传代2次后，测血凝滴度为1：512。 动物 ICR小鼠，体
3、重14g1g，合格证号：SLXK(京XXXX)，级别:SPF/VAF。小鼠及饲料均由北京维通利华实验中心提供。饲养环境：本室动物室动物洁净柜，室温：(222)，相对湿度：50%10%。 药物 毒热平注射液，棕色液体，174mg/10ml；阳性对照药：注射用双黄连(冻干粉)：600mg干粉/支，实验前用生理盐水配制成40mg/ml备用，批号:(哈药集团中药二厂)；利巴韦林：100mg/ml，批号：(石药集团欧意药业有限公司)。 方法和结果 .1 流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定 取ICR小鼠50只,用单纯随机抽样法随机平均分成5组,病毒为(2-6-2-10)/mL5个稀释度，每只小鼠经
4、乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染不同稀释度病毒液，以死亡和生存为观察指标，24h内死亡的不予统计。每天观察,直至感染后第14d为止。按ReedMunch公式2 计算 出病毒的半数致死量(LD50)为/mL。 .2 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用3 取ICR小鼠140只,随机分组、给药见表1。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水滴鼻，其余各组以4个LD50流感病毒液滴鼻感染，每只，于感染当天开始腹腔给药，对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续10d。从感染之日算起，连续观察15d,每天观察小鼠发病症状并记录小鼠感染病毒后的死亡数和死亡时间，按以下公式计算出死亡保护率和延长生命率，结
5、果采用组间t检验进行统计学处理(见表1)。 正常组小鼠饮食正常，精神良好，毛发光泽，体重 自然 增加；模型组小鼠自感染后第4d开始出现呼吸急促、抱团蜷缩、毛发涩乱，体重下降；第6d开始出现死亡,12d后基本不死亡了。利巴韦林对照组小鼠感染后第6d仅出现轻微的畏寒无力、呼吸急促症状，第8d后症状基本消失。双黄连组第6d开始出现死亡,第10d停止死亡，但死亡数较模型组少。毒热平注射液各组，感染后第6d开始出现蜷缩畏寒症状，体重明显下降，开始出现死亡,第10d状态逐渐好转，活动增加，体重逐日恢复但较利巴韦林组低。表1 毒热平注射液对流感病毒致小鼠死亡的保护作用组 注：与模型组比较，P .3 对流感病
6、毒所致小鼠肺炎的抑制作用3 取ICR小鼠70只，随机分组、给药见表2。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水滴鼻，其余各组以40个LD50流感病毒液滴鼻感染,每只，于感染后第2d开始腹腔给药，对照组在同等条件下注射生理盐水,每日1次，连续6d，第7d摘眼球放血处死，称体重后解剖，肉眼观察肺部病变，摘取全肺称重，逐个 计算 肺指数及抑制率，结果采用组间t检验进行统计学处理(见表2)。 肺指数=小鼠肺重(g)小鼠体重(g)100% 肺指数抑制率%=病毒对照组肺指数均值-实验组肺指数均值病毒对照组肺指数均值100% 表2 毒热平注射液对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用组 别剂量(g/kgd)动物
7、数(只)肺指数注：与模型组比较,P 从上表结果可看出，毒热平注射液对小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用，与模型组比较，大、中、小剂量组结果都有统计学意义(P 讨论 流感病毒即中医所谓的外来邪毒，呼吸系统是其侵袭的靶系统，“温邪上受，首先犯肺”。可引起局部和全身的炎症反应，热毒炼血为瘀，气不行血亦成瘀，瘀血致气机阻滞，妨邪外达。毒热平注射液是由黄芩、栀子等药物制成的中药复方注射剂，具有清热解毒、凉血通络之功效4、5。 本实验我们采用了小鼠流感病毒肺炎的生物模型，结果表明毒热平注射液各剂量组都能不同程度降低肺指数，且呈正量效关系，对小鼠病毒性肺炎的发生具有明显的预防和保护作用。大剂量组能明显降低肺指数，
8、作用与双黄连注射液相似，但不及利巴韦林的效果。大、中剂量的毒热平注射液对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用，降低流感病毒感染导致的小鼠死亡率，不同程度改善病毒感染后小鼠的症状。 本 研究 结果提示，毒热平注射液对防治流感有一定的效果，究其如何发挥抑制病毒的作用，本实验室正行进一步研究。 【 参考 文献 】 1Kandel R,Hartshorn KL Novel strategies for prevention and treatment of influenzaJ.Expert Opin The r Targets,XX,(9):1-22. 2郭元吉.流行性感冒病毒及其实验技术M.北京: 中
9、国 三峡出版社,100-106.3李际强,张春学,胡溪柳.升降散抗小鼠流感病毒性肺炎的实验研究J.实用中医内科杂志,XX,18(1):28-29.4Nagai T,Morisuchi R,Suzuki Y,et of action of the anti-influenza virus activity of p lant flavon (5,7,4,-trihydroxy-8-methoxyflavone),from the roots of Scutellaria baicalenslsJ.Antiviral Res.,1995,26(1):11.5王意忠.栀子提取物抗病毒试验研究J.中国中药杂志,XX,7,31(14):1176-1178. 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。
