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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果正交实验法优化洋金花总生物碱的提取工艺研究 作者：许海玉，郁建平，谭艾娟，梅兴国 【关键词】 总生物碱；提取；正交试验 摘要 目的 筛选洋金花总生物碱的最佳提取工艺条件。 方法 采用L94正交试验，用滴定法测定总生物碱含量，以总生物碱浸膏重和总生物碱含量为指标。结果 洋金花总生物碱的最佳提取工艺为,使用80的酸水乙醇，酸水pH值为3，提取3次,使用相当于药材量4倍的溶剂量。 结论 优选的提取条件效率高，可增加洋金花的利用率。 关键词 总生物碱；提取；正交试验 E
2、xtracting technique of total alkaloids from Flos datura optimized by orthogonal design Abstract Objective To study and select the optimal extracting technique of total alkaloids from Flos The orthogonal design were used. Results The results showed that the optimal extracting technique of total alkal
3、oids from Flos Datura was that0 percent sulf-alcohol,and pH of sulf-water was,and the extracting time was，and the volume of solvent was times as much as the amount of crude drug. Conclusion The methods has high efficiency for extracting and increased the availability of Flos datura. Key words total
4、alkaloids;extraction;orthogonal test 洋金花为茄科植物白曼陀罗的干燥花，又称为南洋金花。而同科同属植物毛曼陀罗的干燥花称北洋金花。前者主产于江苏、福建、广东等地。洋金花具有平喘止咳、镇痛、解痉的功效1。洋金花中含生物碱%，其中东莨菪碱约占85%，莨菪碱和阿托品共占约15%。游离生物碱类及其盐一般都能溶于乙醇，故选用乙醇作为溶剂2。有效利用洋金花药材资源，控制中药制剂质量，本实验以溶剂浓度A、溶剂倍量B、提取次数C、pH值D为考察因素，每个因素设置3个水平，以总生物碱浸膏和总生物碱含量为定量指标，采用正交设计优选酸性乙醇提取条件，为制订 科学 、 经济 的洋金
5、花总生物碱制备工艺提供实验依据。 1 材料与方法 材料 洋金花。乙醇、石油醚、氨水、氯仿、硫酸滴定液、甲基红试液、氢氧化钠溶液、烘箱、滴定管。 1.实验方法 提取条件的选择 为了优化提取工艺，根据药材提取过程中的 影响 因素，考虑乙醇浓度、溶剂倍量、提取次数及pH值4个因素，选择L94正交表实施实验，见表1 表1 实验因素和水平把洋金花粉碎过40目筛，称取洋金花粉末10 g，共9份，按照正交设计方案，进行L94正交实验，提取液放置过夜，过滤，合并滤液，回收乙醇，浓缩至干，得浸膏。 总生物碱的纯化 将上述醇浸膏各加水40 ml，加热溶解后并调pH为23，过滤，用ml的石油醚脱脂2次，用氨试液调p
6、H值至10，依次用40 ml、30 ml、30 ml的氯仿萃取3次，回收氯仿得总生物碱浸膏，在烘箱干燥1天,在干燥器冷却1min,称重1。结果见表2。表L94正交试验表及试验结果 总生物碱的含量测定 样品液的制备：将上面样品的总生物碱浸膏分别用95%乙醇溶解至相当于每1 ml含洋金花，摇匀后精密吸取20 ml，水浴蒸干，残留物加中性乙醇ml。总生物碱的测定2：在上述的样品液精密加入硫酸滴定液10 ml,水10 ml与甲基红试液6滴，用氢氧化钠溶液滴定黄色，以无水乙醇按同样的方法处理作空白，按下式计总生物碱的含量，结果见表2中总生物碱含量。 X%=C303100%/10 C：氢氧化钠滴定液摩尔浓
7、度 VO：空白消耗氢氧化钠滴定液毫升数 V1：供试品消耗氢氧化钠滴定液毫升数 03：东莨菪碱的分子量 实验结果及 分析 根据以上的实验结果，有2个指标即总生物碱浸膏重和总生物碱含量，这两个指标对洋金花提取工艺评价都很重要，总生物碱得率最高的得分为50以及总生物碱含量最高的得分也为50，求出总得分见表2。 总得分=总生物碱浸膏重/50+总生物碱含量/50最后按照总得分进行实验直观分析和方差分析，分析结果见表3。 表方差分析结果 注：*：溶剂浓度A因素有显著性 正交设计结果分析：将实验得到的数据用直观分析法和方差分析法进行统计学处理，可以看出， 影响 总生物碱浸膏得率的因素顺序为ABDC,A因素中
8、A2A3A1,B因素中B2B3B1,C因素中C3C2C1,D因素中D2D1D3,所以最佳提取工艺为A2B2C3D2,用80的酸水乙醇，酸水pH值为3，用4倍量的溶剂，提取3次。 为了验证上述结果的准确性，重复提取A2B2C3D2，得总生物碱浸膏平均重为,总生物碱的平均含量为%。总得分为，实验结果总生物碱浸膏得率和总生物碱的含量明显高于预实验和正交设计优化9个实验号，因此可以证明优化实验具有合理性。 讨论 经过方差分析，pH值对总得分影响最大 这与总生物碱呈碱性，在酸性溶解度要大，最佳pH值为3左右，但当pH值增大到1时，总生物碱的提取率和总得分反而明显减少，这可能是在强酸的作用下，受破坏产生新
9、的成分，这和贾元印等3的结果一致。其他3个因素对总得分没有显著影响。 评价指标有两个：总生物碱浸膏重和总生物碱含量。这两个指标存在一定的相关性，即总生物碱浸膏得率高的，其总生物碱的含量大。 上述最佳工艺经重复实验，总生物碱浸膏重和总生物碱含量的总得分为，比最高得分组高%左右。因此，笔者认为，本实验得到的最佳提取工艺条件，不仅提高了总生物碱浸膏得率和总生物碱含量，而且节省溶剂用量，降低成本。 参考 文献 1 朱月琴.洋金花总生物碱提取工艺的 研究 .时珍国医国药，XX，11：965-966. 中华人民共和国药典.北京：化学 工业 出版社，XX，219. 贾元印，谢鸿霞，彭广芳.洋金花生物碱最佳提取酸度研究. 中国 中药杂志，1994，19：480-482. 作者单位： 贵州贵阳,贵州大学生化营养所 北京,军事医学 科学 院毒物药物研究所生物药剂室 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。
